通过T-A克隆技术构建含免疫刺激序列CpG基序的抗SBR DNA疫苗(英文)

目的 :构建含免疫刺激序列、能够阻止变形链球菌在牙面粘附的防龋DNA疫苗。方法 :根据原核表达质粒 pS BR CTA2 B基因序列 ,设计针对编码变形链球菌表面蛋白抗原AgⅠ /Ⅱ分子中唾液蛋白结合区段 (SBR)的特异性PCR引物 ,利用PCR技术由质粒 pSBR CTA2 B扩增目的DNA片断 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于中间载体 pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,选择插入方向正确的克隆 ,将目的DNA从中间载体释放 ,再克隆至含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 1。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 1 SBR进行酶切图谱分析和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒 pcD NA3 1 SBR构建成功、开放阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码SBR的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体 pcDNA3 1的适当部位 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA 3 1

牙龈卟啉单胞菌FimA蛋白和白细胞介素-15共表达质粒免疫小鼠的实验研究

目的观察重组质粒pIRES-fimA:IL15经滴鼻免疫BABL/c小鼠后诱导产生的血清和唾液抗体反应及白细胞介素-15(IL-15)对sIgA反应的调节作用。方法重组质粒pIRES-fimA:IL15与pIRES-fimA经滴鼻免疫和肌肉注射免疫BABL/c小鼠,以间接ELISA方法检测血清中IgG和唾液中sIgA抗体水平。结果重组质粒pIRES-fimA:IL15与pIRES-fimA经滴鼻免疫可诱导产生唾液sIgA反应,且该反应明显高于肌肉注射组,血清IgG水平与肌肉注射组无统计学差异。pIRES-fimA:IL15经滴鼻免疫产生的唾液sIgA滴度显著高于pIRES-fimA组,且有统计学差异(P<0.05)。结论滴鼻免疫可以作为抗牙龈卟啉单胞菌DNA疫苗有效的黏膜免疫途径,诱导循环和口腔局部抗体反应;IL-15可以作为细胞因子佐剂通过滴鼻途径增强该疫苗诱导的sIgA反应强度。

表面活性剂对变形链球菌致龋基因表达和粘附定植的影响

目的 :研究非离子表面活性剂对变形链球菌 (S .mutans)致龋基因表达和粘附定植能力的影响。方法 :在培养基中加入非离子表面活性剂 ,分别接种在各致龋基因中融合了编码氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的基因片段的S .mutans系列工程菌株 ,通过检测CAT活性 ,观察非离子表面活性剂对S .mutans致龋基因表达的调控作用 ;通过测定S .mutans牢固粘附于玻璃试管的数量 ,观察非离子表面活性剂对S .mutans合成细胞外葡聚糖及形成菌斑能力的影响。结果 :土温 80、土温 4 0可不同程度地增强gtfB、gtfC和gtfD基因的表达 ,聚十八烷乙酯、聚十六烷乙酯可抑制gtfB基因的表达 ,而pac基因的表达则不受非离子表面活性剂的影响。土温 80可促进S .mutans牢固粘附于试管壁 ,聚十八烷乙酯则抑制其粘附。结论 :非离子表面活性剂可在转录水平调节某些致龋基因的表达以及影响其形成菌斑和定植的能力。

2种牙菌斑控制法对胃黏膜幽门螺杆菌再感染的影响研究

目的比较2种牙菌斑控制法对胃黏膜幽门螺杆菌(H.pylori)再感染率的影响,探讨H.pylori相关性胃病患者行菌斑控制的必要性及有效方法。方法将148例胃炎和消化性溃疡患者随机分为试验一组(54例)、试验二组(55例)和对照组(39例),经消化内科抗H.pylori系统治疗并碳13尿素呼气试验证实H.pylori被根除后,试验一组行日常菌斑控制,试验二组除日常菌斑控制外增加牙菌斑的口腔专业处理,对照组未行上述处理。半年后行碳13尿素呼气试验检查确定各组胃黏膜H.pylori的感染率。结果试验一组中5例患者因停用含漱液漱口被淘汰,试验二组中8例患者因未严格执行牙菌斑控制被淘汰。试验一组、试验二组、对照组患者H.pylori的感染率分别为67.3%、19.1%、82.1%。统计分析表明,试验二组患者H.pylori的感染率低于对照组、试验一组(掊2=33,P<0.05;掊2=31.06,P<0.05),试验一组患者H.pylori的感染率与对照组之间无统计学差异(掊2=2.43,0.1<P<0.25)。结论牙菌斑是胃H.pylori再感染的重要来源,H.pylori相关性胃病患者应控制牙菌斑,以专业牙菌斑处理加药物含漱为佳。

黄连水提取物药膜辅助治疗慢性牙周炎的疗效评价

目的:制备并探讨黄连药膜对慢性牙周炎的辅助治疗作用。方法:应用黄连水提取物制备药膜;将30例患有中到重度慢性牙周炎患者的各4颗牙随机分为4组:黄连药膜组、碘甘油组、空白药膜对照组和空白对照组。在基线、4周和7周时分别检测菌斑指数(PI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)和探诊出血(BOP)等牙周病的临床指标。对资料进行方差分析和卡方检验。结果:各组在4周和7周时,探诊深度、附着丧失和探诊出血与基线比较均有显著性差异(P<0.05);黄连药膜组治疗效果优于其他各组(P<0.05),且治疗结束后,各项指标呈继续改善状态。结论:机械治疗后,应用黄连药膜辅助治疗,可以显著提高牙周炎的治疗效果。

龋病及牙周炎患者唾液中HP检测及意义

采用Taqman实时荧光定量PCR技术分别对无慢性胃炎史的龋病、牙周炎患者及正常对照者唾液标本中的幽门螺杆菌(HP)进行检测。结果龋病患者唾液中HP阳性率为14.28%,HP-DNA拷贝数为(1744.77±673.33)拷贝/μl;牙周炎患者分别为25%、(2177.56±403.22)拷贝/μl;正常对照者未检测到HP阳性者,HP-DNA<500拷贝/μl。结论HP不是无慢性胃炎史的健康人群口腔中的常驻菌群,但重症的龋病和牙周炎与HP在口腔中的定植有关。

黄连对慢性牙周炎患者龈沟液中IL-6的影响

将牙周病患者随机分为黄连药膜组,药膜对照组,空白对照组和碘甘油组。应用酶联免疫吸附方法检测各组基线及治疗后4周时龈沟液中IL-6水平并比较,评价疗效。结果各组在治疗后4周时,探诊深度和附着丧失与基线比较均有统计学差异(P(0.05),以黄连药膜组为著(P(0.05)。黄连药膜组和碘甘油组治疗后龈沟液IL-6浓度均低于治疗前、药膜对照组及空白对照组,黄连药膜组低于其他各组(P均<0.05)。提示黄连药膜可降低牙周炎患者龈沟液中IL-6的水平,这可能是其辅助治疗牙周病的机制之一。

2种接连方式种植体的骨界面应力分析

目的建立2种包含实体种植体的下颌骨三维有限元模型,研究2种接连方式种植体(Replace和Replace Select)的骨界面应力状态。方法测量2种种植体各部件的数据和利用螺旋CT扫描下颌骨截面形态,分别建立2种种植体的三维骨内模型,对模型采用轴向加载200N、30°侧向加载100N载荷,分析2种种植体的骨界面的应力分布趋势。结果2种种植体骨界面应力分布特点均为从种植体颈部至根尖部逐渐减小,应力主要集中在皮质骨区和种植体颈部狭窄处的骨界面;侧向加载时骨界面的应力值均高于轴向加载。无论轴向加载还是侧向加载,Replace Select种植体骨界面的应力值均高于Replace种植体。结论临床修复时应避免种植体受到过大的力,尤其是侧向力,以防出现颈部骨吸收,Replace Select种植体更应注意。

减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建

目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 。

氢氧化钙-甘油糊剂消毒根管的疗效评价

目的通过对氢氧化钙-甘油糊剂根管消毒的临床观察,评价此制剂的疗效及其稳定性和安全性。方法配制5%氢氧化钙-甘油制剂消毒备用。随机选择急慢性根尖周炎患者,记录患者用药前各项临床体征。常规开髓,预备根管后拭干,放置蘸有氢氧化钙制剂的棉捻或纸捻,5～7d后复诊,记录临床体征。无阳性体征者即进行根管充填。仍有阳性体征者,重复放置氢氧化钙药捻,直至无阳性体征为止。结果用氢氧化钙制剂消毒根管后,患者临床体征均有显著改善,一般经过1～2次封药,急性根尖周炎阳性体征消失率达89%～98%,慢性根尖周炎阳性体征消失率达94%～99%。该制剂经过1a的观察使用,未见沉淀、凝固现象。结论氢氧化钙制剂用于根管消毒,经临床应用观察,可使急、慢性根尖周炎的临床体征显著改善和消失,疗效可靠。其应用简单、方便,无任何不良作用,是一种较理想的根管消毒剂。

铸造桩表面喷砂处理对牙根抗折性能影响的体外实验研究

目的:研究铸造桩表面喷砂处理对牙根抗折性能的影响。方法:20颗近期拔除的单根第一前磨牙,根管治疗后于釉牙骨质界冠方1.5mm截冠,随机分为2组,铸造桩核及金属全冠修复。实验组铸造桩粘固前表面喷砂处理,对照组不作处理。试件包埋于丙烯酸树脂块中,在电子万能实验机上进行测试。结果:对照组牙根折裂强度为2.773±0.357kN,实验组牙根折裂强度为3.113±0.357kN,2组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:对铸造金属桩表面进行喷砂处理,可以提高桩核冠修复后牙根的抗折强度。

含变链菌SBR基因的双启动子质粒pCN-SSIE的构建及其免疫原性检测

目的:构建含有编码变形链球菌致龋毒力因子SBR基因的双启动子防龋DNA疫苗pCN-SSIE,以减毒沙门菌为载体进行高效黏膜免疫。方法:通过PCR扩增编码变形链球菌表面蛋白抗原的唾液结合区段(SBR)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,将SBR基因插入到双启动子表达载体pCMVnir中,在SBR基因上游和下游依次插入人工合成的tPA信号肽基因序列、核糖体内部进入位点(IRES)基因和EGFP基因,构建质粒pCN-SSIE。通过DNA测序和酶切分析证明,双启动子表达质粒pCN-SSIE构建成功后,再用该质粒转化减毒沙门菌SL3261和转染CHO细胞,检测SBR在原核细胞和真核细胞中的表达状况,最后用pCN-SSIE裸质粒通过肌内注射免疫小鼠,检测其血清中的抗SBR特异抗体。结果:DNA测序和酶切分析均证明,构建的双启动子表达质粒pCN-SSIE开放读码框架正确;质粒在原核和真核细胞中均能正常表达;在免疫小鼠的血清中检测到了高水平的抗SBR特异IgG。结论:构建成功双启动子表达质粒pCN-SSIE,在体外真核和原核细胞中均能正常表达,用其作为DNA疫苗免疫动物,可诱导明显的免疫应答。

Replace内、外连接方式种植体-基台内部的应力分析

目的建立2种Replace实体种植体的下颌骨三维有限元模型,研究Replace内、外连接方式种植体-基台内部的应力状态。方法测量2种种植体各部件的数据和利用螺旋CT扫描下颌骨截面形态,分别建立2种种植体的三维骨内模型,对模型采用轴向加载(200 N)、30°侧向加载(100 N),分析2种种植体-基台内部的应力分布趋势。结果无论轴向加载还是侧向加载,2种种植体的应力主要集中在种植体颈部狭窄处,且侧向加载时的应力值均高于轴向加载。Replace Select种植体内部的应力值均高于Replace External Hex种植体。结论临床修复时应避免种植体受到过大的力,尤其是侧向力,以防出现种植体破坏现象,使用Replace Select种植体时更应注意。

吸烟对牙周基础治疗效果影响的研究

目的评价吸烟与非吸烟慢性牙周炎患者牙周基础治疗1个月后的疗效差异。方法选择36例慢性牙周炎患者,吸烟组20例,非吸烟组16例,基线时两组牙周炎病情相似。从牙列的4个象限选取探诊深度在5～9mm范围的位点1～2个,吸烟组108个位点,非吸烟组88个位点,观察这些位点在牙周基础治疗前、治疗后1个月临床指标的变化,包括菌斑指数(PLI),牙龈出血指数(BI),牙周袋探诊深度(PPD)和附着丧失(AL);在作临床观察的同时,对治疗前后龈沟液白介素(IL)-1β进行检测。结果治疗前(基线时)两组PLI、BI、PPD、AL以及IL-1β差异不显著,牙周基础治疗1个月后,两组的各项指标均有明显的改善,但吸烟组改善程度明显低于非吸烟组(P<0.05)。结论慢性牙周炎患者,吸烟者牙周基础治疗的效果差于非吸烟者。

牙周病与成人正畸的关系

本文描述了牙周组织对正畸力的反应,牙齿移动对牙周组织的影响,牙槽嵴上纤维环切术(Circumferential supracrestal fiberotomy,CSF)防止正畸复发的效果,正畸带环对牙周组织的影响,正畸和牙周治疗之间的时间关系等。也讨论了正畸和种植修复的关系(如使用种植体作为支抗)。以期为临床操作提供指导帮助。

变形链球菌SBR经颌下腺免疫小鼠后局部神经生长因子和白介素-5表达变化

目的 探讨在涎腺免疫接种后局部免疫调节相关细胞因子的变化。方法 以变形链球菌SBR作为亚单位疫苗经颌下腺注射免疫BALB/C小鼠 ,应用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测接种后颌下腺内神经生长因子和白介素 5的表达。结果 免疫接种之后 ,小鼠颌下腺内神经生长因子和白介素 5的mRNA表达量均高于对照组。结论 变形链球菌SBR在涎腺作局部免疫接种 ,可诱导抗体应答 ,促进免疫调节相关细胞因子的表达 ,进一步增强涎腺的免疫功能和分泌功能。

头颈癌患者放疗期混合唾液质和量的变化

选择26例头颈部癌患者，对其放疗前、放疗中及放疗后刺激性混合唾液流率、乳铁素、溶菌酶、淀粉酶与白蛋白的含量进行分析，结果显示：唾液流率和淀粉酶含量在放疗开始后即明显下降，并一直维持在较低水平，半年后更低；唾液乳铁素、溶菌酶与白蛋白的含量在放疗早期明显升高，累积量达40Gy时稍有回落，当累积量达60Gy时，又明显升高，半年后基本恢复到治疗前水平。提示：唾液流率和淀粉酶含量的变化是反映放疗期唾液腺功能受损程度的可靠指标，而乳铁质、溶菌酶与白蛋白的变化是与放疗有关的炎症反应的指标。

控制牙菌斑对胃炎或消化性溃疡病人胃黏膜幽门螺旋杆菌的影响

目的:研究牙菌斑控制,对胃黏膜幽门螺旋杆菌(HP)检出率的影响,为证实牙菌斑和胃内HP感染具有相关性提供新证据。方法:胃内HP被根除的病人80例,行彻底的牙菌斑控制者为实验组,未行牙菌斑控制者为对照组。半年后以碳13尿素呼气试验确定其胃黏膜HP检出率。结果:试验组胃黏膜中HP的检出率明显低于对照组(P<0.05)。结论:牙菌斑与胃HP感染之间具有明显的相关性。胃炎、消化性溃疡病人应控制牙菌斑。

支架用钴铬合金表面镀金对变异链球菌粘附的影响

目的研究支架用钴铬合金表面镀金对变异链球菌粘附能力的影响。方法将义齿支架用钴铬合金制作成试件,随机分为实验组和对照组,每组30块。实验组表面镀金处理,对照组表面不做任何处理。用SJ-201便携式表面粗糙度仪检测两组粗糙度差异。通过细菌体外粘附实验分析4h、8h、12h时每组试件表面变异链球菌的粘附量。通过测定粘附于试件表面的变异链球菌表达CAT(报告基因产物)的活性,确定镀金处理对变异链球菌合成细胞外多糖能力的影响。结果实验组试件表面变异链球菌的粘附量均少于对照组(P<0.05);其表达CAT的能力明显低于对照组(P<0.05)。结论钴铬合金表面镀金可有效抑制变异链球菌的粘附,作用机制可能与其抑制gtf B基因表达有关。