PCR技术检测金黄色葡萄球菌进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)是引起食物中毒的主要致病菌之一,其传统方法包括选择性培养、生化鉴定等步骤,耗时长、灵敏性差,很难满足食品安全快速检测要求。PCR技术是近年来广泛应用于食品中致病微生物快速检测的现代方法之一,其目的基因多种多样,主要包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多种特异性鉴别基因。本文综述了PCR技术应用于金黄色葡萄球菌检测的各种目的基因,并简要介绍了多重PCR及实时定量PCR等新技术的应用。

乳酸菌抗噬菌体机制研究进展

本文首先对乳酸噬菌体的种类、侵入过程进行总结,针对噬菌体的侵入过程介绍了已发现的一些乳酸菌自身防御系统,尤其是与现代生物技术密切相关的控制基因的发现;最终归纳出现阶段一些可行的防治噬菌体手段,包括质粒遗传控制、基因重组技术、反义RNA技术等。

Nisin生物合成相关基因分析

Nisin是乳酸乳球菌某些菌株产生的一种对细菌芽孢和多种革兰氏阳性菌有较好杀伤作用的小肽,广泛用于食品加工、医疗保健等诸多领域。合成Nisin的基因位于染色体上一可接合型蔗糖转座子,由三个启动子nisA、nisR、nisF控制的nisA/ZBT CIPRKFEG构成,其中nisA因具有更强的启动强度,且表达诱导物和宿主菌均为食品级,方便、经济、安全,应用最为广泛。其他基因分别在Nisin合成、调控过程中起不同作用:自身保护性基因ninI、nisF、nisE、nisG的表达,使菌体获得对Nisin较好的耐受性;NisB和NisC与翻译后修饰有关;NisT可促进乳链菌肽前体转移至胞外;NisP则与nisin前体信号肽的切除有关。

动物医学专业分子生物学教学改革的初步探讨

分子生物学是研究核酸,蛋白质等生物大分子的结构与功能,并从分子水平上阐明蛋白质与蛋白质,蛋白质与核酸之间的相互作用及其基因表达调控机理的学科。笔者结合近年来的分子生物学教学经验,就如何让动物医学专业本科生更好的理解和掌握分子生物学知识进行了简单探索。

乳酸菌作为DNA疫苗载体的研究进展

乳酸菌（lactic acid bacteria,LAB）属于革兰阳性、兼性厌氧菌,其基因组中GC含量较低,是一类可以利用碳水化合物发酵产生乳酸的一类菌的总称,包括肠球菌、乳杆菌、乳球菌、明串珠菌、片球菌、链球菌和双歧杆菌等众多种属,被广泛地应用于食品发酵、医药生产、保健药物及饲料添加剂等工业,美国食品和药品监督管理局（FDA）将乳酸菌认定为安全的食品级微生物[1]。

兽医免疫学实验的教学改革与探索

兽医免疫学实验教学在培养合格的动物医学专业学生中发挥着极其重要的作用，兽医免疫学实验教学的改革与探索是一项长期、艰巨的任务。我们在分析当前实验教学存在的问题基础上，在实验教学内容，培养学生实验兴趣，有机结合教师先进的科研成果与实验教学，考核体系等方面进行探索和改革，旨在提高兽医免疫学实验教学质量，培养合格的兽医专业人才，满足社会的需求。

基于长江学者团队的动物医学创新人才接力培养模式的建立与实践

现代社会的高速发展显著增加了大规模传染性疫病暴发风险,如最近几年出现的中东呼吸综合征病毒、埃博拉病毒及塞卡病毒等,对人类社会公共安全造成了极大危害。在这种大背景下,高等农业院校在动物医学专业人才培养方面应积极的做出应对。传统的动物医学人才培养相比其他专业而言耗时更久,探索新型高级动物医学人才培养模式十分必要。

肠道菌群与B细胞发育的相互调节作用

动物肠道是一个栖息着大量菌群、开放的生态系统,这些肠道菌群与宿主之间建立了稳定的互利共生关系,维持肠道内的动态平衡。黏膜免疫学的发展揭示了在正常生理状态下肠道菌群可以促进宿主免疫系统的发育，

表达鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原TATA4与鸡IL-IL-2的侵入型乳酸菌构建及鉴定

为探究鸡柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)表面抗原TA4在植物乳杆菌NC8的表达情况,使用PCR扩增TA4片段,同时使用细胞因子ChIL-2作为免疫佐剂,应用猪圆环病毒2A肽(P2A)序列使抗原与免疫佐剂共表达,连接有金黄色葡萄球菌的纤连蛋白结合蛋白A(FnBPA)的409载体,构建两株重组侵入型乳酸菌NC8 pSIP 409-FnBPA-pgsA′-TA4和NC8 pSIP 409-FnBPA-pgsA′-TA4-IL2。使用自制多克隆抗体通过Western blot检测重组菌的蛋白表达情况。结果表明,两种侵入型目的蛋白TA4和IL-2使用多克隆抗体检测均可成功检测到蛋白表达,为后期动物试验及益生菌口服疫苗的制备奠定了基础。

组成型表达FnBPA的植物乳杆菌的构建及免疫初步评价

为了构建侵入型乳酸菌,将来源于金黄色葡萄球菌的侵入型蛋白FnBPA基因插入乳酸菌-大肠杆菌穿梭表达载体pOri23中,构建pOri23-FnBPA质粒,并通过电转化的方法将其电转到植物乳杆菌NC8中,通过Western-blot检测FnBPA蛋白的表达情况.结果表明目的蛋白FnBPA在组成型启动子Pori23作用下成功表达于NC8细菌表面.重组菌免疫Balb/c小鼠后,以流式细胞术检测了脾脏中树突状细胞数量,发现该重组菌可显著增加脾脏中CD11c＋树突状细胞数量,为后期乳酸菌侵袭细胞试验奠定了基础.

表面展示共表达HA-DCpep蛋白乳酸菌的构建

为了构建HA-DCpep融合基因重组乳酸菌并检测其表达产物的反应原性,本实验采用pGe-HA2质粒为模板,以PCR方法将HA基因DCpep融合,将得到的融合产物进行双酶切,与pSIP409-pgsA’XbaI和HindIII双酶切产物链接,得到质粒pSIP409-pgsA’-HA-DCpep,再经过电转使其到植物乳杆菌NC8中,经Western-blot检测目的蛋白表达情况.结果：构建的NC8-pSIP-409-pgsA’-HA2-DCpep重组蛋白表达成功,而且具有反应原性,为禽流感病毒口服疫苗的研制奠定基础.

基因工程乳酸菌作为活载体表达外源蛋白及疾病防治研究进展

乳酸菌是一类可以发酵碳水化合物产生乳酸的兼性厌氧菌总称,包括乳球菌、乳杆菌、链球菌、片球菌和双歧杆菌等,美国食品和药品监督管理局(FDA)将许多乳酸菌定义为“食品级”微生物,极少数如化脓性链球菌,肺炎链球菌是致病菌。乳酸菌可以调节肠道菌群组成从而维持肠道稳态,提高免疫力;还可竞争型地占位,定殖在肠道表面诱导黏膜液以及肠道上皮细胞抗菌肽(AMP)的产生[1].

建筑设计中绿色建筑技术优化结合分析

文章从绿色建筑技术的功能出发,研究绿色建筑技术对建筑设计的优化作用,着力完善建筑设计工作体系,把绿色建筑技术与建筑设计充分结合,从而达到提高建筑整体设计质量,满足建筑实用功能的目标。

论住宅建筑设计中的公共空间设计

居民是城市居住区的主体,居住区的设计和建设从根本上来讲,是为了在最大程度上满足居民的物质和精神生活需要。在住宅建筑设计过程中,要以满足居民的心理需求和行为需求为基础,高度关注公共空间的设计内容,使住宅建筑设计充分满足可持续发展的内在需求。基于此,文章分析了住宅建筑设计中的公共空间设计相关内容。

表达结核分枝杆菌ESAT-6-Ag85A基因的侵入型乳酸菌免疫特性研究

目的:研究表达ESAT-6-Ag85A(ES85A)融合基因的侵入型乳酸菌对小鼠体内免疫特性的影响。方法:将真核表达载体p Valac与ES85A连接构建真核表达质粒,并将其分别电转到重组乳酸菌NC8-pSIP-409和NC8-pSIP-409-FnBPA感受态中,构建双质粒的乳酸菌p Valac-ES85A/409和p Valac-ES85A/Fn BPA。将其免疫BALB/c小鼠,检测表达ES85A的侵入型乳酸菌对小鼠树突状细胞(DCs)亚群CD80和CD83的影响以及血清中细胞因子的表达水平。结果:Western blot和免疫荧光证明ES85A蛋白成功表达;与空载体组相比,在小鼠免疫表达ES85A的侵入型乳酸菌后,小鼠脾细胞中CD11^+CD80^+(P<0. 001)和CD11^+CD83^+(P<0. 01)以及血清中细胞因子IL-4(P<0. 05)的表达都有所增加。结论:表达ES85A的侵入型乳酸菌能促进小鼠体内DCs的分化和成熟以及提高血清中细胞因子IL-4的表达,为后期研制抗结核分枝杆菌的DNA疫苗制剂奠定了基础。

锚定表达猪IFN-λ3重组植物乳杆菌的构建及其抗PEDV效果的检测

为构建锚定表达猪IFN-λ3的重组植物乳杆菌(L.plantarum),并验证其抗病毒活性,本研究将猪IFN-λ3基因插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭锚定表达载体pSIP-409-pgsA'中构建重组质粒pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3,将其电转化至植物乳杆菌NC8中获得重组pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3/L.plantarum。经清酒乳杆菌素(SPPIP)诱导后用His标签单克隆抗体经westernblot、间接免疫荧光检测目的蛋白的锚定表达情况。结果显示,猪IFN-λ3在重组植物乳杆菌表面锚定表达。利用重组菌刺激细胞后通过荧光定量PCR测定IPEC-J2/PEDV系统中猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,并检测该重组菌刺激细胞后干扰素刺激基因(ISGs)的相对转录水平。结果显示,该重组菌能够显著抑制PEDV在IPEC-J2中的复制,并能诱导细胞中ISGs(OASL、IFITMs)的高转录水平,具有抗病毒作用。本研究为PEDV的预防和治疗提供可行方案。

复方中草药与鼠李糖乳杆菌共发酵产物对鸡球虫病的治疗效果研究

为探究复方中草药与鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,L.rhamnosus)共发酵产物对鸡球虫病的治疗效果,将复方中草药(青蒿、常山、白头翁、仙鹤草、槐花、黄芩、甘草)与L.rhamnosus共发酵12 h,患球虫病雏鸡灌服共发酵产物,连续用药5 d,观察雏鸡临床症状,并检测各组雏鸡的相对增重率,盲肠病变记分,制作盲肠病理切片,计算每克粪便卵囊值(OPG)及各组药物抗球虫指数(ACI)。结果表明,服用复方中药发酵制剂后的感染球虫的雏鸡体重显著高于对照组(P<0.05);发酵产物可以明显减轻盲肠病理变化,同时可以降低受感染雏鸡卵囊的排出量;发酵产物组的ACI为130.59,达到中等抗球虫水平。复方中草药与L.rhamnosus共发酵提高了中药对鸡球虫病的治疗效果,为益生菌中药发酵治疗球虫病奠定了基础。

乳酸菌复合制剂对柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡免疫水平的影响及免疫保护效果评价

为探究乳酸菌等益生菌在雏鸡抗柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染中的作用,本研究以150只1日龄肉雏鸡为试验动物,以2×10~8CFU/200 L鼠李糖乳杆菌、乳酸片球菌和植物乳杆菌复合制剂饲喂雏鸡,并设红、白对照组。于攻虫前后检测细胞因子IFN-γ和IL-2、IgG和SIgA水平,雏鸡血液中淋巴细胞增殖情况和外周血CD4^+和CD8^+T淋巴细胞数量,并对攻虫期间增重情况、卵囊排出数量和盲肠病变情况进行检测。结果显示,该制剂显著提高了IFN-γ、IL-2、IgG、SIgA水平和外周血中T淋巴细胞数量,从而增强了机体细胞和体液免疫水平(P<0.05)。此外,该制剂可以显著减轻球虫感染对雏鸡增重的影响,降低卵囊排出量和盲肠病理损伤(P<0.05),ACI值达到中等抗球虫效果,有望成为鸡球虫病新的防治手段。

表达Rck蛋白的乳酸菌的构建

为了构建侵入型乳酸菌,将来源于沙门菌的侵入型蛋白Rck及成熟Rck蛋白(m Rck)基因分别插入乳酸菌-大肠杆菌穿梭表达载体p SIP-409及锚定表达载体p SIP-409-pgs A’中,构建p SIP-409-Rck-FLAG和p SIP-409-pgs A’-m Rck-FLAG两种重组质粒,并通过电转化的方法将其电转到植物乳杆菌NC8中,通过Western-blot检测两种目的蛋白的表达情况。结果显示,Rck-FLAG在胞内表达,而m Rck-FLAG在细胞壁上表达。结果表明,两种目的蛋白均被成功表达,并且具有反应原性,为后期乳酸菌侵袭细胞试验奠定了基础。

创新性人才培养模式下的动物微生物学课程改革与实践

动物微生物学是吉林农业大学动物科学技术学院-动物医学学院的一门重要专业基础课,面向动物生产类本科生开展教学活动。动物微生物学理论知识和实验技术广泛渗透于其他相关专业课程,对动物疾病的预防、诊断、治疗及控制人畜共患传染病的传播具有极其重要的意义。笔者在吉林农业大学"卓越人才培养计划"基础上,结合实际,通过教学资源全方位多角度整合、双线教学相融合、创新性研究实践、课程思政的教学探索、重视评价导向等五个维度的改革,着力提升学生的创新意识、创新能力和科研素养,为培养德才兼备、善于创新、适应经济社会发展需要的高素质人才提供助力。