微乳头型肺腺癌类器官的构建及其靶向药物的筛选

目的建立微乳头型肺腺癌类器官的培养方法,并开展靶向药物的筛选。方法自确诊为微乳头型肺腺癌患者手术组织样本中提取和培养原代肺癌类器官,动态观察和记录肺癌类器官生长情况;苏木精-伊红(HE)染色法及免疫组化染色法比较肺癌类器官与亲本组织间肿瘤细胞形态及蛋白表达特征;实时荧光定量聚核酶链反应检测肺癌亲本组织和类器官中基因突变情况;基于基因检测结果挑选靶向药物并验证其体外抑瘤效果。结果成功从微乳头型肺腺癌组织中培养出类球形肿瘤类器官,可传代至少3代。HE染色结果可见类器官中肿瘤细胞形态与亲本组织细胞基本一致;免疫组化染色结果显示肺癌类器官与亲本组织中各基因的蛋白表达水平大致相同;基因突变分析结果显示,肺癌亲本组织和类器官的突变基因结果一致,均体现为原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体Ret(RET)融合突变。基于肺癌类器官的靶向药物筛选结果显示,凡德他尼的体外抑瘤效果最佳。结论基于微乳头型肺腺癌类器官的药筛实验可在短时间内筛选出高效靶向药物,可使微乳头型肺腺癌患者从中获益。

对放疗敏感的鼻咽部上皮-肌上皮癌1例

病例男,72岁,枕部疼痛3月伴右肩膀疼痛不适半月余。CT检查:枕骨斜坡区见一不规则软组织密度影,大小约40 mm(左右径)×28 mm(前后径),密度不均匀,CT值48~72 HU,与双侧海绵窦分界不清,边界不清,局部可见溶骨性骨质破坏(图1a)。MR检查平扫枕骨斜坡见软组织占位,最大层面大小约46 mm(左右径)×27 mm(上下径)×38 mm(前后径),T1WI呈等信号,T2WI呈低信号,边界不清(图1b),增强扫描,呈明显不均匀强化,病灶侵犯颅内,桥脑及延髓受压(图1c,1d);左侧鼻咽部见明显强化,咽隐窝显示不清(图1e)。

胃肠道间质瘤中Maspin、uPA、VEGF和VEGF-C的表达及其意义

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)组织中Maspin、uPA、VEGF和VEGF-C的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法和逆转录PCR法检测GIST组织中Maspin、uPA、VEGF及VEGF-C的表达情况,并分析各指标表达与GIST生物学行为之间的关系以及Maspin与uPA、VEGF、VEGF-C表达的相关性。结果 42例GIST组织中,Maspin、uPA、VEGF和VEGF-C蛋白的表达率分别为61.9%(26/42)、64.3%(27/42)、59.5%(25/42)和54.8%(23/42)。逆转录PCR检测显示,Maspin、uPA、VEGF和VEGF-C mRNA在GIST组织中均有表达,且与其相应蛋白表达的趋势基本一致。随着GIST侵袭危险性增加,Maspin表达显著降低,uPA蛋白及VEGF、VEGF-C表达均显著增加(P<0.05),而uPA mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。随着GIST出现复发转移,Maspin表达显著降低,VEGF和VEGF-C表达显著增加(P<0.05),而uPA表达无显著性差异(P>0.05)。Maspin与uPA、VEGF、VEGF-C表达均呈显著负相关(r=-0.429,P<0.05;r=-0.312,P<0.05;r=-0.292,P<0.05)。结论 Maspin表达下调或缺失促进uPA、VEGF和VEGF-C表达上调在GIST演进过程中可能扮演重要角色,4种蛋白均有可能是预测GIST生物学行为及预后的重要辅助因子;Maspin基因有可能是GIST靶向治疗新的研究靶点。

发生肺转移的肾脏孤立性纤维性肿瘤1例

患者女性，60岁，因体检时发现左肾上极肿物入院。患者无血尿、尿频、尿急、尿痛及肾区绞痛等症状，也无任何体征。B超及CT检查均提示左肾实性占位，肾癌可能性大。遂在全麻下行左肾根治性切除术。

大肠癌中B细胞异位基因-2的异常表达及其抑癌机制

目的研究B细胞异位基因-2(BTG2)在结肠癌中的表达特点及其抑癌机制。方法采用免疫组织化学方法检测BTG2在100例大肠癌、40例大肠腺瘤标本和40例正常大肠组织标本中的表达水平;分析BTG2的表达与肿瘤临床病理特征间的关系;Western blot方法检测结肠癌组织中BTG2、P21、c-Myc、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素E(cyclin E)、P53、细胞周期依赖蛋白激酶-2(CDK2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平,分析BTG2潜在的抑癌机制,并对患者进行随访。结果 BTG2在大肠癌中的表达率为43%,显著低于正常大肠组织和大肠腺瘤中的表达率,且与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、淋巴转移有关,与患者的性别、年龄、大肠癌的部位、肿瘤组织类型无关。Western blot结果显示BTG2、c-Myc、cyclin D1、cyclin E、CDK2、MMP-2、MMP-9、P53和P21在不同肿瘤分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移组间差异有统计学意义,且BTG2蛋白表达水平与c-Myc、cyclin D1、cyclin E、CDK2、MMP-2、MMP-9呈显著负相关,与P53和P21呈正相关。随访结果显示BTG2表达水平与患者预后密切相关。结论 BTG2表达减少或缺失在大肠癌发生及演进过程中起重要作用,其分子机制可能与一些关键细胞周期因子和某些抑癌基因作用失调有关。

刃针联合通督调带治疗腰椎间盘突出症80例临床观察

目的观察刃针联合通督调带推拿治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法 80例腰椎间盘突出症患者随机分为治疗组和对照组各40例,治疗组给予刃针联合通督调带推拿治疗,对照组给予通督调带推拿治疗;按摩治疗隔日1次,每周3次,刃针治疗视病情可间隔5~7d 1次,一般治疗1~5次。两组观察疗程均为四周。观察治疗前后两组患者的临床疗效综合评分、突出指数和治愈时间的变化,比较两组临床疗效。结果治疗组、对照组在治疗后腰椎间盘突出指数均较治疗前略变小,但组内、组间比较均无统计学差异。治疗组临床疗效综合积分、治愈时间均显著低于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。治疗组治愈率(48.64%)、总有效率(97.73%)均优于对照组。结论刃针联合通督调带推拿法能够有效改善或解除腰椎间盘突出症患者的临床症状,疗效好见效快。

胃肠道间质瘤中maspin基因表达及其启动子甲基化的临床意义

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)中maspin基因表达及启动子甲基化在预测肿瘤生物学行为、评估预后中的作用。方法采用免疫组织化学法及甲基化特异性PCR分别检测52例GIST中maspin基因蛋白表达及其启动子甲基化情况,并对患者进行随访;分析maspin基因蛋白表达及启动子甲基化与GIST生物学行为及预后的关系。结果 maspin基因蛋白表达率及启动子甲基化率分别为67.3%(35/52)和26.9%(14/52),两者表达均与GIST侵袭危险性、复发转移显著相关,且两者间存在显著负相关。38例获访的GIST患者中,maspin蛋白表达与患者生存期显著相关(P<0.05),但maspin基因启动子甲基化与患者生存期无显著相关(P>0.05)。结论启动子甲基化可能是maspin表达减少或缺失的重要原因,且在GIST发生发展过程中起着重要作用,两者检测可用来评价GIST生物学行为,能否预测患者预后尚需进一步研究。

小泛素相关修饰物异常表达在常见恶性肿瘤发生发展中的作用机制研究进展

小泛素样蛋白(SUMO)修饰是一种可逆的翻译后修饰,已成为一种重要的分子调控机制,参与基因表达、基因组维持、DNA损伤修复、转录调控和细胞周期等多种生物学过程。如SUMO通路的稳态被破坏,异常SUMO会导致DNA损伤、转录调控失调,以及促进癌症干细胞的干性维持,从而使细胞增殖、迁移和凋亡出现异常,促进肿瘤的发生发展。在白血病中,异常SUMO化修饰导致转录调控因子表达失调,致使髓系分化、细胞周期和凋亡受阻;在乳腺癌中,异常SUMO化修饰使损伤的DNA不能得到及时修复,并激活了一些癌基因;在前列腺癌中,异常SUMO化修饰促使转移相关因子表达及抑癌基因p53的活化;在肝癌中,异常SUMO化修饰通过影响细胞周期、调控部分转录因子促进肿瘤发生和转移;在结直肠癌中,异常SUMO化修饰通过调控细胞周期及相关癌基因的转录因子来调控细胞的增殖。

黏附分子L1在胃肠道间质瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨黏附分子L1在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法和RT-PCR检测66例GIST、10例平滑肌肿瘤、6例神经鞘瘤及14例正常肠壁组织中L1的表达情况,并分析其临床意义。结果:胃肠道间质瘤中L1蛋白及mRNA的表达率分别为57.6%(38/66)和83.3%(30/36),差异有统计学意义(P<0.05);L1在不同侵袭危险性GIST中的表达差异有统计学意义(P<0.05),但在不同性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。L1在GIST中的表达明显高于其在平滑肌肿瘤及正常肠组织中的表达(P<0.01),与其在神经鞘瘤中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:L1表达在GIST发生发展过程中起促进作用,L1可作为GIST的诊断和鉴别诊断指标。

肾盂疣状癌1例报道

疣状癌是一种少见的高分化鳞状细胞癌，低度恶性，极少转移。通常发生于口腔、喉、食管、鼻腔、外阴和皮肤等部位。发生于肾盂的鳞状细胞癌非常少见，仅占肾盂恶性肿瘤的0．7％～7％，

Maspin基因及其在胃肠道肿瘤中的研究进展

Maspin是一种抑癌基因,在多种肿瘤组织中有不同程度的表达,具有诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞浸润、转移及肿瘤组织新生血管生成的作用。近年的研究多集中于Maspin基因结构、功能及其在不同肿瘤中作用机制的探讨。Maspin在不同肿瘤中表达趋势不完全相同,探讨其在胃肠道肿瘤中的表达及其相关机制,为分析胃肠道肿瘤的耐药机制及基因靶向治疗提供了一定的理论依据。

倒置性毛囊角化病8例临床与病理分析

目的探讨皮肤倒置性毛囊角化病的临床病理学特征。方法对8例皮肤倒置性毛囊角化病临床病理资料进行回顾性分析,并复习文献。结果 8例倒置性毛囊角化病,男3例,女5例,男女比例为0.6:1,中位年龄46岁,病程2个月～1年不等,分别发生于面部、颈部、腋窝、胸部和下肢。临床症状与病变部位有关或无自觉症状。皮损以丘疹为主,直径2～14mm,表皮均有不同程度的内生性生长,亦可伴有向外呈乳头状瘤或疣样、角化棘皮瘤样增生,下肢1例为小囊肿,各例均可见特征性鳞状涡形成。结论倒置性毛囊角化病为一少见病,临床表现缺乏特征性,主要组织病理学特征为内生性生长和鳞状涡形成。

1,25(OH)_2D_3在牙乳头干细胞成骨分化中的作用

目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在牙乳头干细胞向成骨细胞分化过程中的作用。方法分离培养儿童牙乳头干细胞,培养基中添加1,25(OH)2D3,使其终浓度分别为1、10和100 nmol/L,另设对照组加入等体积生理盐水。采用噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞增殖周期变化,Western blot法检测维生素D受体(VDR)、核因子-κB受体活化剂配体(RANKL)及骨保护素(OPG)蛋白表达水平。采用siRNA技术沉默VDR表达后(siR-VDR组),检测其对RANKL和OPG蛋白表达的影响。结果对照组及1、10、100 nmol/L 1,25(OH)2D3组增殖指数(PIx)分别为49.78±2.03、50.14±1.55、48.81±1.91和48.56±2.15,不同浓度1,25(OH)2D3对牙乳头干细胞的增殖无明显作用(F=3.174,P>0.05)。对照组牙乳头干细胞中可见一定水平VDR、RANKL和OPG的蛋白质表达;加入1,25(OH)2D3后,VDR、RANKL和OPG蛋白表达水平均有不同程度升高,其中以VDR上升趋势最为显著;转染siR-VDR后,VDR、RANKL和OPG的蛋白质表达水平下降。结论 1,25(OH)2D3通过调节VDR水平影响牙乳头干细胞向成骨细胞方向的分化过程。

胃肠道间质瘤中maspin的蛋白表达及其启动子5'CpG岛的甲基化状态

目的探讨maspin基因启动子5'CpG岛的甲基化及蛋白表达与胃肠道间质瘤临床病理特征间的关系。方法采用甲基化特异性PCR及免疫组织化学法分别检测54例胃肠道间质瘤及40例正常胃肠断端组织中maspin基因5'CpG岛的甲基化和蛋白表达,分析maspin基因启动子5'CpG岛的甲基化及蛋白表达与胃肠道间质瘤临床病理特征间的关系及两者的相关性。结果胃肠道间质瘤和正常胃肠组织中,maspin蛋白表达率分别为66.7%和87.5%,5'CpG岛甲基化率分别为29.6%和12.5%,差异均有统计学意义(P<0.05)。maspin基因5'CpG岛甲基化和蛋白表达与胃肠道间质瘤侵袭危险性及复发转移显著相关,在不同性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型组间差异无统计学意义,且maspin基因5'CpG岛甲基化和蛋白表达两者存在显著负相关(r=-0.467,P<0.05)。结论 maspin基因异常甲基化是其蛋白表达减少或缺失的重要原因,并在胃肠道间质瘤的发生发展中起着重要作用,为其靶向治疗提供了一个新的研究靶点。

连翘苷对Lewis肺癌VEGF和内皮抑素表达的影响

目的:探讨连翘苷对Lewis肺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成抑制因子内皮抑制素(endostatin)蛋白表达的影响。方法:免疫组化染色检测临床收集的正常肺部组织、癌旁组织和肺癌组织样本中VEGF和endostatin的蛋白表达。设空白对照组10只,同时于40只小鼠右肢腋窝皮下接种Lewis瘤细胞,随机分为模型组、连翘苷低剂量组、连翘苷中剂量组和连翘苷高剂量组,每组10只。模型组每天1次灌胃等体积无菌水;连翘苷低、中剂量组每天灌胃5、10 g/kg连翘苷1次;高剂量组每天灌胃10 g/kg连翘苷2次。给药20 d后取肺部组织进行HE染色和免疫组化染色检测肿瘤组织形态学与肺部组织中VEGF和endostatin的蛋白表达。结果:临床样本中,与正常组织和癌旁组织相比,肺癌组织中的VEGF呈高表达,endostatin呈低表达。连翘苷随剂量增加可显著减少Lewis肺癌小鼠肿瘤体积和瘤组织密度;给予不同剂量连翘苷后,VEGF在肺癌组织中表达显著低于模型对照组,而endostatin表达则明显高于模型对照组。结论:连翘苷通过下调VEGF的表达、上调endostatin的表达而发挥抑制肺部肿瘤发展的作用。

超声引导下穿刺活检在乳腺小肿块中诊断价值的探讨

目的:探讨超声引导下的穿刺活检在乳腺小肿块中的诊断价值,为提高早期乳腺癌的诊断率和合理治疗提供参考依据。方法:收集2011—2013年超声发现直径小于2 cm的乳腺肿块145例,其中可疑病例89例,进行超声引导下穿刺活检或术中冰冻活检,并与手术后病理或随访结果对照。结果:超声引导下穿刺活检和术中快速冰冻组织活检病理诊断准确性分别为94.2%和94.6%、阳性敏感性分别为96.4%和94.1%、特异性均为92.3%和95.2%,两种方法比较均无显著性差异(P<0.05)。结论:超声引导下对乳腺小病灶进行穿刺活检是安全、可靠的术前早期诊断方法,对于特殊病例应与切检或术中快速冰冻活检结合应用。

P16表达缺失与胃肠道间质瘤生物学行为及预后关系

目的:探讨P16 mRNA和蛋白表达缺失与胃肠道间质瘤生物学行为及预后的关系。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学及Western Blot法分别检测胃肠道间质瘤组织中P16 mRNA和蛋白表达情况,并对患者进行随访,分析P16表达水平与胃肠道间质瘤细胞核增殖指数、肿瘤细胞的侵袭危险性及胃肠道间质瘤患者生存预后间的关系,采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析。结果:胃肠道间质瘤中P16 mRNA和蛋白的阳性表达率分别为53.8%(21/39,冰冻组织)、51.3%(20/39,冰冻组织)和51.4%(37/72,石蜡组织),不同侵袭危险性间比较差异有统计学显著性(P<0.05),随着侵袭危险性的增高,其表达率呈下降趋势;且与核增殖指数Ki-67表达及患者生存期呈负相关(P<0.05)。结论:P16表达缺失与胃肠道间质瘤的浸润进展有关;P16 mRNA和蛋白的检测有助于判断胃肠道间质瘤的生物学行为和预后。

半固体凝胶介质诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

目的利用半固体凝胶介质诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化,确立一种基于物理特性的心肌细胞诱导分化方法。方法原代分离培养和鉴定BMSCs。以DMEM培养基和低熔点琼脂糖按不同配比配制成6.4%、3.2%、1.6%、0.8%、0.4%和0.2%6种物理密度基质,将BMSCs培养于上述基质。RT-PCR方法检测细胞分化标记基因心肌特异性基因肌球蛋白重链α(α-MHC)和抗小鼠心脏特异性肌钙蛋白T(cTnT)的mRNA水平;细胞免疫荧光方法检测cTnT和α-MHC的蛋白质表达情况。结果 RT-PCR结果显示BMSCs中cTnT mRNA表达峰值出现在物理密度为1.6%的培养基质中,而α-MHC的峰值出现在物理密度为3.2%的培养基质中。细胞免疫荧光结果显示BMSCs在不同密度基质中培养时表达cTnT和α-MHC的总体趋势与RT-PCR结果一致。结论利用半固体凝胶介质可实现将BMSCs向心肌细胞诱导分化。

DOG1蛋白在胃肠道间质瘤中的表达意义及其与CD117表达的关系

目的探讨DOG1在胃肠道间质瘤(GIST)和胃肠道外间质瘤(EGIST)的表达及临床意义,并与CD117表达比较,为进一步提高GIST的病理诊断及临床治疗提供有力的依据。方法收集胃肠道间叶源性肿瘤102例,其中47例GIST肿瘤组织及55例其他间叶源性肿瘤组织,采用免疫组织化学染色法检测DOG1在所有GIMT和CD117在GIST中的表达情况,并分析DOG1的表达与GIST临床病理参数、CD117表达及其他间叶源性肿瘤组织中表达的关系。结果 (1)GIST中DOG1和CD117蛋白表达率分别为95.73%(45/47),93.6%(44/47),与患者性别、年龄、肿瘤发生部位、细胞形态及Fletcher危险程度分级均无显著相关(P>0.05),2例CD117阴性GIST DOG1蛋白均强阳性表达,但两者表达率差异无统计学意义。(2)DOG1在其他间叶源性肿瘤表达率为1.8%(1/55),与其在GIST中表达比较差异有统计学意义。结论 DOG1是GIST敏感而特异性标记物,与CD117联合检测能够进一步提高GIST的诊断水平。

ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析

目的:研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制。方法:用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染脐带间充质干细胞(UCMSCs),将其分别置于33℃和37℃培养,细胞免疫荧光方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性及细胞周期,WesternBlot法检测周期素(Cyclin)D1、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)2、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法检测巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:细胞在33℃时培养24、48、72h的PCNA阳性表达百分率均高于37℃时,差异有统计学意义(P<0.01)。转染tsSV40LT抗原基因后,细胞在33℃培养箱时的端粒酶活性和PIx值高于37℃时,差异有统计学意义(P<0.01)。33℃时的CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6及Nestin表达量高于37℃时,P16、P21、NSE和GFAP的表达量低于37℃时,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:通过tsSV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控。