百日咳毒素、丝状血凝素、百日咳黏附素抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

目的建立小鼠血清中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)及百日咳黏附素(pertussis adhesin,PRN)抗体间接ELISA定量检测方法,并进行验证及初步应用,为百日咳疫苗生产工艺的优化提供参考。方法分别用PT、FHA及PRN抗原包被酶标板,加入百日咳抗小鼠血清标准品及待测小鼠血清,以HRP标记的山羊抗鼠IgG作为酶标二抗,通过TMB显色的指示程度定量检测小鼠血清中PT、FHA、PRN抗体含量。对建立的间接ELISA检测方法进行专属性、线性范围、准确性、精密性进行验证。采用建立的方法对百日咳疫苗及效价合格的内部参比品免疫小鼠血清进行检测。结果采用PT、FHA、PRN抗体ELISA方法检测百日咳抗小鼠血清标准品及待测样品的结果为阳性,其余样本检测结果均为阴性。PT抗体ELISA检测方法的线性范围为0.0053~0.17 U/mL,回收率为90.91%~104.77%,重复性验证RSD为6.31%,人员间RSD为6.40%;FHA抗体ELISA检测方法的线性范围为0.0223~1.43 U/mL,回收率为95.84%~102.18%,重复性验证RSD为9.02%,人员间RSD为5.79%;PRN抗体ELISA检测方法的线性范围为0.0094~0.3 U/mL,回收率为86.27%~100.22%,重复性验证RSD为6.94%,人员间RSD为8.90%。采用建立的方法检测百日咳疫苗样品及效价合格的内部参比品免疫小鼠血清,6组样品PT抗体水平明显高于内部参比品,FHA、PRN抗体水平与内部参比品相当。结论建立的各抗体ELISA检测方法专属性强,线性相关性良好(R2>0.99),准确性高,精密性良好,可用于小鼠血清中百日咳(PT、FHA、PRN)抗体的定量检测,为百日咳疫苗生产工艺的优化提供了参考。