湖北地区4819例HPV感染亚型分布及差异分析

目的 探讨湖北地区4 819例HPV感染亚型分布及差异分析。方法 选取2022年2-12月在武汉大学人民医院就诊并进行脱落细胞标本HPV 27种基因分型检测的患者共4 819例患者,其中男性277例,女性4 542例,男性年龄18~86岁,女性年龄16~85岁。采用流式荧光杂交分型检测方法对其进行27种HPV亚型检测。结果 男性患者HPV6、11、42、52、53、58、61、68感染率与女性患者比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中HPV6、11感染率高于女性患者(P<0.05),均为低危型HPV亚型;而HPV42、52、53、58、61、68感染率低于女性患者(P<0.05),其中HPV52、53、58、68为高危型HPV亚型,42、61为低危型HPV亚型。男性单纯低危型HPV感染率、多重风险混合型HPV感染率明显高于女性,而单重单纯高危型HPV感染率、总单纯高危型HPV感染率明显低于女性,差异有统计学意义(P<0.05)。单纯高危型HPV感染和多重风险混合型HPV感染以中年人感染居多。结论 湖北地区男性与女性HPV感染具有差异,男性HPV感染倾向于低危型,而女性HPV感染倾向于高危型,且均集中于中年感染。

慢性精神分裂症患者血清hs-CRP、TC/HDL-C比值与精神症状的关系

目的探讨慢性精神分裂症患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、总胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇(TC/HDL-C)比值与精神症状的关系。方法检测65例精神分裂症患者(患者组)和62例同期健康体检者(健康对照组)血清hs-CRP、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,并计算TC/HDL-C比值;阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者入组时的精神症状。结果患者组血清hs-CRP水平[(2.87±0.75)mg/L]显著高于健康对照组[(0.96±0.25)mg/L],患者组血清TC水平[(1.93±0.51)mmol/L]显著低于健康对照组[(3.97±1.15)mg/L],患者组血清HDL-C水平[(1.08±0.33)mmol/L]显著低于健康对照组[(1.74±0.42)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05);患者组血清TC/HDL-C比值(1.78±0.59)显著低于健康对照组的(2.28±0.61)(P=0.028)。相关性分析显示,患者组血清TC/HDL-C比值与阳性症状呈负相关(r=-0.34,P=0.004),患者组血清hs-CRP水平与阳性症状呈正相关(r=0.31,P=0.010)。结论血脂和炎性反应与精神分裂症有密切关系,联合hs-CRP、TC/HDL-C比值的检测有利于预测精神分裂症的发生,可以作为精神分裂症的危险因素。

循环酶法检测血清同型半胱氨酸方法学评价及其在肿瘤诊断中的应用

目的评估循环酶法试剂盒检测血清同型半胱氨酸(Hcy)的分析性能,探讨Hcy在肿瘤诊断中的临床应用价值。方法应用美国临床实验室标准化协会的标准化评价方案评价循环酶法测定血清Hcy的精密度、比对试验、回收试验、线性范围等。同时检测806例肿瘤患者,67例健康体检者(健康对照组)血清Hcy水平。数据分析采用方差分析、两独立样本t检验、相关性分析等。结果精密度:循环酶法测定血清Hcy低、高水平的批内变异系数(CV)分别为2.69%、3.35%,日间CV分别为1.87%、2.80%,精密度良好;Hcy水平2.00~40.00μmol/L,检测线性良好(r^2=0.997 3);比对试验:与西门子ADVIA Centaur XP检测系统比较,Hcy检测结果相关性良好(r^2=0.970 8,n=40),两种检测方法检测结果均值比较差异无统计学意义(P>0.05);平均回收率为95.2%~103.1%;肿瘤患者血清Hcy水平较健康对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论循环酶法测定血清Hcy方便、快速、准确可靠,其精密度和线性范围可满足临床需求,适合在临床实验室使用;肿瘤患者血清Hcy较健康对照组显著升高,与多种肿瘤相关,可作为肿瘤标志物用于肿瘤的早期筛查。

产NDM ExPEC毒力与其耐药性和分子分型的关系研究

目的对产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)肠外致病性大肠埃希菌(ExPEC)菌株进行分子分型,研究产NDM ExPEC毒力与其对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性和分子分型之间的关系。方法选取分离自该院的15株产NDM ExPEC菌株(实验组)和28株不产NDM ExPEC菌株(对照组)作为研究对象,对产NDM ExPEC菌株进行系统发育分群和多位点序列分型(MLST)研究,PCR方法检测7种毒力基因在这两组菌株中的分布,χ2检验比较分布差异。结果系统发育分群结果显示,15株产NDM ExPEC菌株中,13株属于A群,2株属于D群;MLST分型结果显示,ST410是检出率最高的ST型;实验组毒力基因fimH检出率最高;对照组毒力基因sat、fyuA和ompT检出率高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论该院绝大多数产NDM ExPEC菌株的毒力较弱,表明细菌耐药性强并不意味着其致病性也强。

慢性丙型肝炎患者HCV基因分型与HCV-RNA浓度和凝血功能关系的探讨

目的探讨慢性丙型肝炎病毒(HCV)患者基因分型与HCV-RNA浓度和凝血功能之间的关系。方法选取该院HCV患者66例作为慢性HCV患者组,健康人群20例作为健康对照组。对该院66例HCV患者采用ABI3500dx基因测序仪进行外周血HCV-RNA基因分型检测以及采用罗氏Light Cycler荧光定量PCR仪进行外周血HCV-RNA定量检测,对该院66例HCV患者和20例健康体检者进行凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、血浆纤维蛋白原(FIB)检测。结果在66例HCV患者中,分别检测出1a、1b、2a、3a、3b和6a型6种病毒基因型,其中基因1型39例,非基因1型27例。不同HCV基因型患者血清HCV病毒浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。HCV基因1型和非基因1型之间比较,凝血功能差异均无统计学意义(P>0.05);HCV基因1型和非基因1型分别与健康对照组比较,凝血功能差异均有统计学意义(P<0.05)。HCV-RNA浓度与PT、APTT、TT、FIB的相关性差异均无统计学意义,相关系数分别为0.020、0.002、-0.072、-0.088(P>0.05);HCV-RNA低浓度组(<5.0×105 U/mL)和高浓度组(≥5.0×105 U/mL)之间凝血功能比较差异无统计学意义(P>0.05);HCV-RNA低浓度组和高浓度组分别与健康对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同基因型HCV感染与血液中HCV的病毒浓度相关,基因1型患者HCV-RNA浓度高于非1型患者;HCV基因分型和RNA病毒浓度与凝血功能各项指标大小无关,但是HCV患者较健康人群凝血功能降低,对于HCV感染者有必要进行凝血功能检查,以便了解HCV患者凝血功能状态,防止出现严重的出血。

Tetra-primer ARMS PCR检测丙型肝炎患者IL-28B rs12979860基因多态性

目的评价四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(Tetra-primer ARMS PCR)检测IL-28Brs12979860基因多态性在丙型肝炎患者抗病毒治疗中的应用。方法选取2015年5月至2016年7月就诊的慢性丙型肝炎患者275例,提取外周血DNA,建立Tetra-primer ARMS PCR检测体系,与Sanger测序法对比验证,检测该地区丙型肝炎患者IL-28Brs12979860基因多态性分布情况。结果 Tetra-primer ARMS PCR检测体系成功建立,与Sanger测序法的符合率100%,rs12979860基因的C/C型、C/T型和T/T型的分布频率分别为86.5%、12.0%、1.5%。在C/C型组与C/T或T/T型组中,年龄分布、性别分布、HCV基因1b型比例差异均无统计学意义(P>0.05);患者肝硬化比例和持续病毒学应答比例比较差异有统计学意义(P<0.05),在C/T或T/T组中肝硬化比例较高,在C/C组中持续病毒学应答比例较高。结论该研究建立的Tetra-primer ARMS PCR技术是一种操作简单、成本低廉、快速有效的基因多态性检测方法,对于丙型肝炎患者IL-28Brs12979860基因多态性基因分型具有很好的临床应用价值。

胶乳免疫比浊法测定血清铁蛋白的方法学评价

目的对胶乳免疫比浊法定量测定血清铁蛋白(FER)进行方法学评价。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的评价方法,对胶乳免疫比浊法测定血清FER的精密度、回收实验、线性范围等进行评价。结果胶乳免疫比浊法测定血清FER的批内、日间变异系数(CV)均<5.0%,精密度良好;FER浓度在25~500 ng/m L范围内,检测线性良好;比对实验:两种厂家的试剂盒测定FER结果相关性良好(r2=0.990 7,n=40),检测结果基本一致(P>0.05);回收率为96.20%~102.43%;40例健康体检者样本的检测值均在待验证区间之内。结论胶乳免疫比浊法用于定量检测人血清FER水平,测定结果准确可靠,操作简便、快速,能直接在全自动生化分析仪上使用,适用于临床样本检测。

武汉地区536名体检人群ALDH2的基因多态性分布

目的了解武汉地区体检人群ALDH2基因多态性的分布情况。方法选取2015年6月至2016年4月在武汉大学人民医院进行ALDH2基因检测的无亲缘关系健康体检人群536名,其中男性384名,女性152名。采用基因芯片法检测ALDH2 rs671基因多态性,同时与已报道的其他地区ALDH2 rs671基因型结果进行比较。结果在武汉地区536名体检人群中,ALDH2 rs671三种基因型即GG型、GA型和AA型频率分别为64.18%、31.90%和3.92%;不同年龄段ALDH2基因型分布比较差异无统计学意义(P>0.05)。本地区与上海、洛阳、西宁、四川地区ALDH2 rs671基因型比较差异均无统计学意义(P>0.05),与北京、台湾和山东地区比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论武汉地区ALDH2 rs671基因多态性分布具有地域特异性,ALDH2 GG型是本地区优势基因型。

急性酒精中毒患者儿茶酚氧位甲基化转移酶基因多态性分析

目的:分析急性酒精中毒患者儿茶酚氧位甲基化转移酶COMT rs4680基因多态性。方法:针对COMT rs4680位点设计内外两对引物,建立两对交叉引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)检测体系,经过PCR扩增,通过琼脂糖凝胶电泳鉴别基因型,最后将该结果与基因测序结果比较,验证其准确性,并通过该方法检测288例急性酒精中毒患者(急性酒精中毒组)和348例健康对照人群(健康对照组)COMT基因型,分析COMT rs4680基因多态性与急性酒精中毒的关系。结果:COMT rs4680有GG型、AG型、AA型三种基因型,且PCR-CTPP方法可以准确检测COMT rs4680基因多态性;与健康对照组比较,急性酒精中毒组AA型检出率明显升高(P<0.05),但两组G、A两种等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PCR-CTPP可成功鉴别COMT rs4680三种基因型,AA型可能是急性酒精中毒发生的高危因素之一。

乙醛脱氢酶-2基因及其rs671多态性与相关疾病

乙醛脱氢酶-2(ALDH2)是酒精代谢过程中的关键酶,在酒精代谢产生的高毒性物质乙醛的催化过程中起着重要作用,其基因多态性(尤其是rs671位点多态性)与肝脏疾病、心血管疾病、呼吸道疾病、癌症、阿尔茨海默病(AD)等的发生或发展关系密切,成为近年关注和研究的主要课题。

纠正EDTA依赖性假性血小板减少的方法学研究进展

乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)是国际血液学标准化委员会建议的血细胞计数抗凝剂,其在应用过程中偶尔会发生EDTA依赖性假性血小板减少症(EDTA-PTCP)。为了防止临床误诊误治,导致不必要的血小板输注,必须对血小板计数进行纠正。目前纠正方法主要有稀释模式法、替代抗凝剂法、微量离心管法、药物稳定法、网织红细胞通道法、血小板计数参考方法等。

高分辨熔解曲线分析技术检测ALDH2和ADH1B基因多态性

目的建立高分辨率熔解曲线分析体系检测乙醛脱氢酶-2(ALDH2)和乙醇脱氢酶-1B(ADH1B)基因多态性。方法针对ALDH2和ADH1B基因序列设计短片段引物,在核酸扩增后,使用Eva Green染料分析不同聚合酶链反应(PCR)产物,并与Sanger测序法相比较。结果采用高分辨熔解曲线(HRM)法在同一程序下,90min内即可成功检测出ALDH2rs671和ADH1Brs1229984各种基因型,且其结果与Sanger测序一致。结论采用HRM法检测ALDH2和ADH1B基因多态性快速简单、经济有效,值得推广。

武汉地区丙型肝炎病毒基因型分布及其少见基因亚型系统进化树分析

目的研究武汉地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布情况,构建HCV少见基因亚型系统进化树。方法收集武汉地区258例慢性丙型肝炎患者血浆样本,采用基于HCV非结构蛋白5B(NS5B)区的Sanger测序法对患者HCV进行基因分型,将HCV NS5B区测序结果与NCBI Genotyping tool中HCV基因型数据库进行比对,得到受检患者的HCV基因亚型,采用MEGA5.0软件对武汉地区HCV少见基因亚型进行系统进化树分析。结果 258例丙型肝炎患者样本均被成功分型,共检出6种基因亚型:1b型(71.32%)、2a型(20.16%)、6a型(3.49%)、3b型(2.71%)、3a型(1.16%)、1a型(1.16%)。武汉地区HCV少见基因亚型系统进化树被成功构建。结论武汉地区HCV优势基因亚型为1b型和2a型,6a型、3a型、3b型、1a型较少见。武汉地区3例3a型HCV可能由日本传入;大部分3b型HCV可能由越南传入,NO.379样本出现较大变异;6a型HCV可能由越南传入。

武汉地区8274例受检者新型冠状病毒核酸检测及合并感染结果分析

目的:探讨武汉地区2019新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测病例的阳性率及合并其他病原体感染的情况,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的实验室检测及临床治疗提供参考。方法:本研究为横断面研究,采用荧光定量PCR方法检测2020年1月20日至2月9日在武汉大学人民医院就诊的COVID-19疑似人群8274例,标本类型包括呼吸道标本(鼻咽、口咽、痰和肺泡灌洗液)和非呼吸道标本(尿、粪便、肛拭子、血液和结膜囊拭子)。以核酸检测结果分组,ORF1ab及N基因同时阳性归为核酸检测阳性组;同时阴性归为阴性组;单一基因靶标阳性归为可疑组。以性别分为男性组和女性组。同时对其中316例进行非2019-nCoV感染的13种常见呼吸道病原体多重PCR检测。结果:在8274例受检者中,2745例(33.17%)2019-nCoV核酸检测结果为阳性,5277例(63.77%)结果为阴性,252例(3.05%)结果为可疑。2019-nCoV阳性组(56岁)和可疑组(52岁)年龄中位数均高于2019-nCoV阴性组(40岁)(t=27.569,P<0.001;t=6.774,P<0.001)。2019-nCoV阴性组中其他常见呼吸道病原体核酸阳性率(18.39%)高于2019-nCoV阳性组其他常见呼吸道病原体核酸阳性率(5.77%),差异有统计学意义(χ^2=24.105,P=0.003)。4种呼吸道标本和5种非呼吸道标本均可检出2019-nCoV核酸。结论:男性2019-nCoV核酸阳性率高于女性,2019-nCoV核酸阳性患者会发生合并感染,非呼吸道标本也存在2019-nCoV病毒。

肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶基因型研究

目的探讨对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的肠杆菌科细菌携带碳青霉烯酶基因的类型。方法收集2016年2月至2017年2月武汉大学人民医院分离自临床的87株对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的肠杆菌科细菌。运用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶的表型确证。PCR检测碳青霉烯酶基因:blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM。将PCR产物纯化后进行测序,运用SeqMan软件对测序结果进行拼接后在NCBI网站BLAST比对,得到碳青霉烯酶基因亚型。结果 87株碳青霉烯类抗菌药物不敏感肠杆菌科细菌中,产碳青霉烯酶菌株检出率为70.1%,携带blaKPC-2、blaNDM-1、blaNDM-5、blaIMP-4和blaVIM-1的菌株分别为29、16、11、7和1株。产碳青霉烯酶最多的肠杆菌科细菌为肺炎克雷伯菌(33株),其次为大肠埃希菌(15株),肺炎克雷伯菌以产KPC型碳青霉烯酶为主,而大肠埃希菌仅产NDM型碳青霉烯酶。改良Hodge试验检测碳青霉烯酶的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.4%、96.2%、98.3%和86.2%,可准确检测KPC-2和NDM-5型碳青霉烯酶。碳青霉烯类抗菌药物不敏感肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的不敏感率分别为93.1%和79.3%,产KPC和NDM肠杆菌科细菌对青霉素类、除第四代头孢菌素以外的头孢菌素类、碳青霉烯类及加酶抑制剂的复合制剂耐药率均为100%,对其他临床常用抗菌药物的耐药率均保持在较高水平。结论本院碳青霉烯类抗菌药物不敏感肠杆菌科细菌株主要产KPC-2、NDM-1和NDM-5型碳青霉烯酶。

武汉地区353例体检者MTHFR C677T基因多态性分布

目的 研究武汉地区353例体检者亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）C677T基因多态性的分布。方法 采用PCR-芯片杂交法检测2015年4-8月武汉大学人民医院体检中心353例体检者MTHFR C677T基因型。根据体检者的性别和年龄特征分析MTHFR C677T基因型和等位基因频率分布特点,并与其他地区汉族健康体检人群的数据进行比较。结果 体检人群MTHFR 677CC、677CT、677TT基因型频率分别为36.3%（128/353）、48.4%（171/353）和15.3%（54/353）,677T等位基因频率为39.5%。男性和女性体检者的MTHFR C677T基因型分布差异无统计学意义（P=0.802）。不同年龄组（除年龄70-岁组外）中,677CT基因型均为优势基因型,所占比例分别为年龄-30岁组47.9%、30-岁组43.2%、50-岁组55.7%。各年龄组间的MTHFR C677T基因型分布差异无统计学意义（P=0.120）。与北京和青岛地区健康体检人群相比,武汉地区MTHFR C677T基因型和等位基因频率分布差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 武汉地区353例体检者MTHFR C677T基因多态性分布不受性别和年龄的影响,但具有地域特异性。

武汉地区女性HPV感染状况及其基因型分布

目的研究武汉地区女性HPV感染状况及其基因型分布。方法采用流式荧光杂交法检测在本院妇科就诊的1 095例女性的HPV宫颈脱落细胞标本,分析受检女性中HPV感染情况及基因型分布规律。结果在1 095例女性脱落细胞临床标本中,检出HPV阳性231例,总感染率为21.10%,检出HPV基因型24种,其中高危型有19种(比重88.31%),低危型有5种(比重11.69%)。在所有检出的HPV的基因型中16型、52型、58型感染率高,分别为21.71%、15.46%、9.21%。另外查出单一、双重、三重和四重亚型感染模式,其中单一亚型感染最多,比重高达76.62%,并且单一高危占绝大比例。不同年龄段女性随着年龄增长,HPV阳性率有增加的趋势,但经统计学检验差异无统计学意义(χ2=5.688,P>0.05)。HPV高危型16型、52型和58型在40~49岁年龄段阳性例数较多。结论武汉地区女性HPV感染并不少见,单一亚型感染居多,HPV高危型16、52和58亚型为优势感染基因亚型,且多集中在40~49岁年龄段。了解女性HPV感染者病毒基因型流行病学特征,对武汉地区女性宫颈疾病的筛查、治疗及HPV疫苗的研制等具有重要意义。

产新德里金属β-内酰胺酶肠外致病性大肠埃希菌的分子分型

目的对产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)的肠外致病性大肠埃希菌(ExPEC)进行多位点序列分型(MLST)和系统发育分群研究。方法收集2016年2月至2018年2月分离自武汉大学人民医院临床送检标本中对亚胺培南和(或)美罗培南敏感性降低(MIC≥2μg/ml)的ExPEC菌株。改良Hodge试验(MHT)对碳青霉烯酶进行表型确证。PCR检测碳青霉烯酶编码基因blaNDM。Sanger测序法检测各碳青霉烯酶基因亚型。采用MLST分型和系统发育分群对PCR检测出的产NDM ExPEC菌株的分子流行病学特征进行分析。结果共收集到对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的ExPEC菌株20株,其中产NDMExPEC菌株15株。MHT检测产NDMExPEC菌株的敏感度和特异度分别为93.3%(14/15)和80.0%(12/15)。15株产NDM ExPEC菌株中11株(73.3%)产NDM-5型,4株(26.7%)产NDM-1型。系统发育分群结果显示,15株产NDM ExPEC菌株中,13株属于A群,2株属于D群。MLST分型结果显示,ST410是产NDM ExPEC菌株中检出率最高的ST型(5株,33.3%)。结论本院绝大多数产NDM ExPEC菌株属于毒力较小的系统发育群,应加强院感监测,防止高危克隆ST型的暴发流行。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在细菌耐药机制检测中的应用进展

细菌耐药现象十分严重,已成为全球共同面临的难题.常规细菌耐药性检测方法,如纸片法、稀释法等不仅耗时长且无法明确具体的耐药机制,不能满足临床对药物敏感性指导的需求.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）用于细菌耐药性和耐药机制的检测,克服了传统方法的缺点,具有广阔的应用前景.本文将对近年来MALDI-TOF MS在细菌耐药机制检测中的方法及其适用范围作一阐述.

PCR-CTPP简单快速检测乙醇脱氢酶-1B基因多态性

目的建立两对交叉引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)检测体系鉴别乙醇脱氢酶-1B基因多态性。方法针对ADH1B rs1229984位点设计两对内外引物,经过聚合酶链反应、电泳鉴别基因型,将该方法与DNA测序法比较,验证其检测准确性,并通过该方法检测58例健康人ADH1B基因多态性分布情况。结果 PCR-CTPP方法可用于准确检测ADH1B基因多态性,与DNA测序结果相符;在58例健康人中,ADH1B A等位基因频率71.6%,为优势等位基因。结论PCR-CTPP技术检测ADH1B基因多态性简单快速、经济省力,可用于疾病易感基因的快速筛查和分子流行病学研究,适合在一般实验室推广应用。