趋化因子受体1在人结肠癌中的表达及其与肿瘤转移的相关性研究

目的研究趋化因子受体1（CC chemokine receptor 1,CCR1）在人结肠癌组织中的表达分布情况,探讨其表达水平与临床病理特征的关系。方法收集广州军区武汉总医院普通外科手术切除并经病理诊断证实的96例结肠癌组织。采用Real-time PCR、Western blot及免疫组化技术检测CCR1在96例结肠癌组织及相应的癌旁组织中的表达分布情况,并分析其表达差异与结肠癌淋巴结转移及肝转移的相关性。结果在96例结肠癌组织及其相应的癌旁组织中均可检测到CCR1的表达,结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织。CCR1mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显相关性（均P〉0.05）,而与肿瘤的淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关（均P〈0.05）。免疫组化检测结果显示CCR1在结肠癌组织中的蛋白表达主要定位于细胞膜。26例淋巴转移的结肠癌组织中,10例（38.5%）染色强度为＋＋-＋＋＋,16例淋巴结转移合并肝转移的结肠癌组织中,13例（81.2%）染色强度为＋＋-＋＋＋,经χ^2检验,两组比较差异具有统计学意义（χ^2=6.095,P=0.014）。结论 CCR1在结肠癌组织中的表达高于癌旁组织,其表达水平与淋巴结转移及肝转移相关,具有一定的诊断价值,有望成为判断结肠癌侵袭转移能力及预后的指标。

胃肠道间质瘤组织起源的研究进展

胃肠道间质瘤是胃肠道最常见的间叶组织源性肿瘤。近年来,胃肠道间质瘤的诊断和治疗水平有了长足的进步,尤其是伊马替尼的成功应用使胃道肠间质瘤成为肿瘤分子靶向治疗的典范。但是目前胃肠道间质瘤的组织起源仍不明确,其发生发展机制仍有待进一步研究。本文就胃肠道间质瘤组织起源的研究进展作一综述。

Galectin-7蛋白在人非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:观察galectin-7蛋白在人非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨galectin-7在NSCLC中的临床意义。方法:采用Western blot(WB)和免疫组织化学染色法(IHC)检测30例NSCLC组织及相应癌旁正常肺组织中galectin-7的表达情况。结果:WB结果显示galectin-7在NSCLC的表达较癌旁组织显著增高(1.33±0.11 vs.0.06±0.02,P<0.01)。IHC显示NSCLC中galectin-7染色明显强于癌旁组织,galectin-7主要表达于肺癌细胞、浸润淋巴细胞的胞膜和胞浆中。结论:galectin-7的高表达与NSCLC相关。

寻找受体分子研究方法的进展

配体与受体间的识别及相互作用是分子发挥其功能的重要途径,具有重要的生物学意义。但是,寻找某一分子的受体并不容易,往往成为研究的瓶颈所在。目前寻找及验证某一对配体/受体分子及其对应关系的方法有很多,包括免疫共沉淀、噬菌体展示、酵母双杂交、分子模拟、谷胱甘肽巯基转移酶pull-down、串联亲和纯化等。该文对这些方法的基本原理、简要步骤及优缺点进行综述,为相关研究提供依据。

标准化患者在胃肠外科住院医师规范化培训PBL教学中的应用

经过2013~2018年近5年的不断完善和发展,住院医师规范化培训制度已较为成熟,包括以问题为基础(PBL)在内的各种教学方法也在培训中不断开展。针对PBL模式在胃肠外科住院医师规范化培训临床教学中显示的不足,本课题组将标准化患者(SP)教学法引入以形成PBL结合SP的综合教学模式,取得了良好的效果。本文从引入SP的必要性、SP改善教学效果的原因、SP的选择及培训要点三方面进行论述,总结具体实施的相关经验,以供参考。

人胃肠道间质瘤细胞株的建立及其生物学特性

目的从手术切除的人胃肠道问质瘤组织中建立间质瘤细胞株，并探讨其生物学特性。方法将胃肠间质瘤组织切成小块，置于含20％胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养基中进行培养，待细胞达80％-90％融合后消化传代培养，并进行形态学、免疫荧光、免疫组织化学、Westernblot及流式细胞术等生物学特性研究。结果成功建立胃肠道问质瘤（GIST）细胞株，该细胞株可在体外培养生存1个月，传代7—8代。经流式细胞仪的免疫荧光分析显示该细胞：CD117＋CD34＋。且所建立的GIST细胞表达c-kil蛋白，ST1571抑制所建立的GIST细胞增殖。结论间质瘤细胞株可在体外长期培养，且具有明显的间质瘤细胞特征。

微小RNA-6791-5p靶向磷酸呋喃酸性簇分选蛋白2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-6791-5p在各细胞系中的表达水平(表达倍数为0.52±0.04、0.83±0.06、0.60±0.12、0.68±0.07),并构建miR-6791-5p模拟物(miR-6791-5p mimic)及其阴性对照Negative control,并将其转染至RKO细胞。使用RT-qPCR检测miR-6791-5p和PACS2 mRNA的表达水平(表达倍数为0.468±0.032)。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测PACS2蛋白的表达水平[RKO:(51.590±6.018)%]。使用两样本t检验进行统计分析,结果以均数±标准差(±s)表示,以P<0.05为差异有统计学意义。结果miR-6791-5p在人结直肠癌细胞系表达水平显著低于人结肠上皮细胞,其中RKO和DLD1下调最明显(RKO组低于460组:0.52±0.04比1.00、DLD1组低于460组0.60±0.12比1.00),差异有统计学意义(RKO:t=17.811,P<0.0001;DLD1:t=5.372,P<0.01)。RKO转染后,mimic组miR-6791-5p表达水平高于mimic NC组(3.28±0.44比1.00),差异有统计学意义(RKO:t=8.764,P<0.01)。细胞计数试剂(CCK-8)检测表明mimic组24、48、72、96 h细胞吸光度值显著低于mimic NC组(24 h吸光度值为0.185±0.004比0.250±0.030,48 h吸光度值为0.275±0.040比0.376±0.020,72 h吸光度值为0.497±0.120比0.657±0.010,96 h吸光度值为0.691±0.004比0.905±0.019),差异有统计学意义(RKO:t=10.821,P<0.01)。平板克隆实验表明mimic组集落形成数低于mimic NC组(115.70±12.51比176.00±19.18),差异有统计学意义(RKO:t=4.581,P<0.05)。划痕愈合实验显示miR-6791-5p mimic组划痕愈合率低于NC组[(14.960±0.848)%比(36.480±1.340)%],差异有统计学意义(t=23.491,P<0.0001)。Transwell迁徙和侵袭实验显示穿透微孔膜的细胞数mimic组低于mimic NC组(迁移数目miR-6791-5p mimic组比NC组42.330±3.512比125.700±7.760,侵袭数目分别为54.33±4.16比159.30±7.76),差异有统计学意义(Transwell迁移t=16.931,P<0.01)、(Transwell侵袭t=20.641,P<0.01)。在线靶预测软件(miRWalk、mirtarbase、targetscan)预测miR-6791-5p可能的靶基因,并通过qRT-PCR及Western blot验证,mimic组PACS2的mRNA及蛋白表达水平低于mimic NC组[比例为(51.590±6.018)%比1.00],差异有统计学意义[mRNA(RKO:t=27.951,P<0.0001);Western blot(RKO:t=13.931,P<0.001)]。结论miR-6791-5p在结直肠癌细胞中低表达,过表达miR-6791-5p能抑制结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并且明显下调PACS2的mRNA和蛋白表达水平,说明miR-6791-5p可能通过PACS2调控结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

Delta吻合在全腹腔镜远端胃癌根治术消化道重建中的安全性和远期疗效的临床分析

目的:探讨Delta吻合在全腹腔镜远端胃癌根治手术中手术技巧、安全性及远期疗效。方法:回顾性分析我院41例在2015年7月—2021年8月实施全腹腔镜远端胃癌根治术Delta吻合的关注指标、围手术期情况、并发症和远期生存疗效。对手术和重建时间、术中出血量、手术切口长度、疼痛感、下床、通便和进食时间、术后并发症、住院日、淋巴结清扫数目、营养状况等进行分析。术后均全程随访,随访截止日期为2021年8月31日。结果:41例患者均顺利进行手术,手术时间为165(147,184)min,消化道重建时间为51(43,77)min,术中出血量为85(60,110)mL,腹壁切口长度4~6 cm,38例患者在术后1~2 d拔除胃管,均未发现明显的吻合口出血。所有患者均无明显的术后疼痛,在术后1~2 d下床运动。37例患者在手术3~5 d之内恢复肠道通气。35例患者术后4 d内进流质饮食。41例均未出现伤口感染和腹腔感染,6例患者出现肺部感染,5例患者出现淋巴瘘。全部患者均未出现吻合口漏、吻合口狭窄和吻合口出血。分别有2例患者出现反流性胃食管炎和胃功能不全。术后住院时间平均(6.0±1.7)d。全组患者未出现手术相关死亡。所有病人均行标准的D2根治手术,清扫淋巴结数量为36(28,48)枚,阳性淋巴结数量为2(0,3)枚。术后TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别有16例、23例和2例。全部患者均获得全程跟踪随访,随访率100%,术后1月内复查患者总蛋白和血清蛋白以及前白蛋白,均恢复到正常值水平。在随访期内未发现肿瘤复发或者转移。结论:Delta吻合在腹腔镜胃癌根治性术消化道重建中是安全可行的,可提高患者术后生存质量,同时可获得良好的远期疗效。

长程2型糖尿病对胰腺导管腺癌肿瘤相关巨噬细胞和预后的影响

目的探讨病程较长(≥3年)的糖尿病是否影响胰腺癌中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的极化,以及对胰腺癌患者预后的影响。方法收集2011年至2016年在武汉大学中南医院接受胰腺癌手术的患有长程2型糖尿病或无糖尿病患者的标本83例。采用免疫组织化学法分析组织切片中CD68和CD163的表达。运用Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验分析生存曲线,Cox回归模型进行单因素和多因素分析。结果长程2型糖尿病(DM)组的CD68^(+)TAMs(P<0.05)、CD163^(+)TAMs(P<0.01)及CD163^(+)/CD68^(+)比例(P<0.01)均高于非糖尿病(NDM)组,差异有统计学意义。长程2型糖尿病与患者的组织分化程度、局部浸润和CA19-9的水平明显相关(P均<0.05)。长程2型糖尿病和CD163^(+)/CD68^(+)比例是无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)的独立影响因素(P均<0.05),长程2型糖尿病明显缩短患者的RFS和OS。结论长程2型糖尿病与胰腺癌的恶性程度明显相关,并吸引更多的巨噬细胞聚集于肿瘤中,这些巨噬细胞同时大量极化为M2型TAMs。长程2型糖尿病和CD163^(+)/CD68^(+)比例是RFS和OS的独立影响因素。

早期胃癌淋巴结转移列线图预测模型的建立及验证

目的:构建列线图预测模型以预测早期胃癌患者淋巴结转移,以分选不适宜内镜下切除的早期胃癌患者。方法:收集2004年至2016年SEER数据库中诊断为早期胃癌并接受手术的4035例患者的临床病理资料并进行随机分为主要队列和验证队列。采用单因素和多因素Logistic回归分析确定早期胃癌淋巴结转移的危险因素并构建列线图模型。ROC曲线、C指数及校准曲线评估列线图模型的预测准确性和判别能力,决策曲线分析评估模型的临床应用价值。在内部验证队列中对模型进行内部验证。结果:本研究共纳入早期胃癌4035例,其中774例(19.2%)发生淋巴结转移。多因素Logistic回归分析显示,年龄、分化程度、肿瘤大小和浸润深度是早期胃癌淋巴结转移的独立危险因素。据此构建列线图预测模型,校准曲线显示预测概率与实际概率之间具有良好的一致性,C指数为0.702。列线图在内部验证队列中也有很好的区分度(C指数=0.708)和良好的校准。临床决策曲线分析表明该列线图预测模型的临床应用价值。结论:基于SEER数据库构建预测早期胃癌淋巴结转移风险的列线图模型具有良好预测能力,有助于为早期胃癌患者做出合适的临床决策。

微小RNA-17-5p通过抑制转移生长因子β受体2的表达促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460,以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达,构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞,分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中miR-17-5p的表达倍数均高于人正常结肠上皮细胞NCM460(3.22±0.72、1.99±0.36、2.26±0.51、1.77±0.60比1.07±0.05,F=5.153,P<0.05),差异有统计学意义。miR-17-5p inhibitor组miR-17-5p表达水平低于NC组(0.55±0.07比1.03±0.06,t=9.714,P<0.05),差异有统计学意义。CCK-8实验证实miR-17-5p inhibitor组细胞增殖能力低于NC组(24、48、72、96 h吸光度值分别为(0.21±0.00比0.33±0.03,0.33±0.01比0.54±0.01,0.54±0.02比0.79±0.00,0.83±0.05比1.10±0.08,t=5.041、16.840、17.530、3.977,P<0.05),差异有统计学意义。平板克隆实验提示miR-17-5p inhibitor组细胞克隆形成能力低于NC组[克隆形成数目(327.33±9.53)个比(504.67±10.96)个,t=27.290,P<0.05],差异有统计学意义。划痕及Transwell实验结果显示,miR-17-5p inhibitor组细胞迁移及侵袭能力显著低于NC组[划痕实验细胞迁移率(16.83±1.21)%比(35.70±1.04)%,Transwell迁移实验细胞迁移数目(46.00±3.27)个比(146.33±4.92)个,Transwell侵袭实验细胞侵袭数目(131.00±5.35)个比(243.00±5.10)个,t=16.700、24.020、21.420,P<0.05],差异有统计学意义。生物信息学预测并筛选出miR-17-5p靶基因TGFBR2,qRT-PCR法检测提示miR-17-5p inhibitor组TGFBR2 mRNA表达水平高于NC组(3.22±0.81比0.99±0.07,t=3.888,P<0.05),差异有统计学意义;Western blot结果表明miR-17-5p inhibitor组TGFBR2蛋白表达水平高于NC组。结论miR-17-5p在结直肠癌中表达升高,并且可以通过调控TGFBR2表达水平促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

微小RNA-519d-3p靶向DCAF4L2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620,同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用两样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降,其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO:(0.311±0.165)倍比1.000倍,t=7.783,P<0.05;SW620:(0.354±0.079)倍比1.000倍,t=15.72,P<0.01],差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p,过表达组表达倍数高于对照组[RKO:(2.913±0.602)倍比1.000倍,t=5.409,P<0.01;SW620:(3.194±0.427)倍比1.000倍,t=8.765,P<0.001],差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示,过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO:0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021,t=3.064,P<0.01;SW620:0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032,t=2.432,P<0.01),差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO:(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个,t=7.127,P<0.05;SW620:(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个,t=9.387,P<0.05],差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO:(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%,t=394.900,P<0.01;SW620:(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%,t=21.350,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组,迁移实验[RKO:(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个,t=44.290,P<0.01;SW620:(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个,t=16.090,P<0.01],差异有统计学意义;侵袭实验[RKO:(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个,t=33.950,P<0.01;SW620:(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个,t=50.980,P<0.01],差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测,并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示,DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC,过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组,mRNA表达倍数[RKO:(0.170±0.050)倍比1.000倍,t=18.400,P<0.01;SW620:(0.256±0.069)倍比1.000倍,t=26.800,P<0.01],差异有统计学意义;蛋白倍数[RKO:(45.504±6.076)%比100.000%,t=15.540,P<0.01;SW620:(43.567±3.760)%比100.000%,t=26.000,P<0.01],差异有统计学意义。结论结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降,并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

通过共表达分析抑制素βA基因表达与肠正常黏膜到腺瘤再到腺癌进展的关系

目的寻找与肠正常黏膜(NOR)到结直肠腺瘤(CRA)再到结直肠癌(CRC)的进展密切相关的基因。方法利用数据集GSE37364(包括38例NOR,29例CRA及27例CRC)构建加权基因共表达网络分析(WGCNA),选择软阈值为10确保基因无尺度网络分布,构建关系矩阵转换为邻接矩阵,进一步构建拓扑重叠矩阵鉴定与疾病进展相关的基因模块并寻找其枢纽(Hub)基因。对Hub基因在数据集GSE20916中进行单因素方差分析及组间t检验,数据集GSE14333中进行t检验,以确认Hub基因与疾病进展的相关性。结果筛选出1858个差异表达基因进行分析,确定一个重要的基因模块(黄色模块)和该模块中的4个Hub基因:抑制素βA(INHBA)、趋化因子配体8(CXCL8)、趋化因子配体1(CXCL1)、CCAAT增强子结合蛋白(CEBPB),进一步线性回归分析发现INHBA与疾病进展高度相关(R^(2)=0.793)。基因富集分析表明,该模块中的INHBA主要参与细胞增殖的调控。在GSE20916数据集中进行分析,INHBA在NOR、CRA、CRC中表达分别为2.732±0.1441、2.81±0.1347、2.946±0.1603,INHBA表达与NOR至CRA再至CRC的进展密切相关(F=16.99,P<0.0001),在CRA及CRC表达均高于NOR(P<0.05),在CRC中表达高于CRA中表达(P<0.01)。在数据集GSE14333中,INHBA表达在Dukes分期A、B、C、D期CRC中表达分别为9.658±1.349、10.32±1.105、10.56±1.234、10.26±1.26,Dukes分期B、C、D中INHBA表达均高于Dukes分期A期CRC,差异有统计学意义(P<0.05),在B、C、D期中表达差异无统计学意义。结论通过共表达分析发现INHBA可能通过调节细胞增殖与NOR、CRA和CRC的进展有关。

微小RNA-422a靶向叉头框蛋白Q1抑制人结直肠癌生长和侵袭能力的研究

目的研究人结直肠癌中微小RNA(miR)-422a的异常表达与肿瘤生物学特征之间的关系,探讨miR-422a对人结直肠癌细胞系HCT15生长和侵袭能力的调控机制。方法收集2017年8月至2018年1月在武汉大学中南医院实施结直肠癌手术切除标本65例,收取结直肠癌组织及癌旁组织。采用实时定量反转录聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测组织中miR-422a及叉头框蛋白Q1(FoxQ1)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)分析检测组织中FoxQ1的蛋白表达强度。分析miR-422a与结直肠癌肿瘤生物学特征和FoxQ1 mRNA表达水平的相关性。RT-qPCR检测miR-422a在结直肠癌细胞中的表达,并使用miR-422a模拟物转染人结直肠癌HCT15细胞。采用双荧光素酶活性实验验证miR-422a对FoxQ1的靶向作用。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western blot法检测FoxQ1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达。结果结直肠癌组织miR-422a的表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(1.015±0.123比3.910±0.078,P<0.01);结直肠癌组织FoxQ1的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(2.398±0.195比1.583±0.174,P<0.01);相关分析显示,FoxQ1表达强度与miR-422a表达水平呈负相关(r=-0.664,P<0.01)。miR-422a的表达水平与肿瘤大小(P<0.05)、局部浸润(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)、远处转移(P<0.01)和TNM分期(P<0.01)有关。miR-422a在HCT15细胞中表达较低,上调HCT15细胞中miR-422a表达水平后,细胞增殖和侵袭能力均受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01);FoxQ1及Vimentin蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达增高。双荧光素酶报告基因结果提示FoxQ1是miR-422a的靶基因。结论miR-422a的表达与结直肠癌的恶性程度相关。上调miR-422a的表达靶向FoxQ1抑制结直肠癌细胞的上皮-间充质转化,从而抑制其增殖和侵袭能力。

蛋白激酶D-1调控神经内分泌肿瘤细胞上皮-间充质转化的机制

目的研究蛋白激酶D-1(PKD-1)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达以及PKD-1信号调控NEN细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制,探讨其与NEN转移的相关性。方法通过免疫荧光染色和免疫组织化学染色的方法,检测人胰腺NEN组织中PKD-1以及波形蛋白(Vimentin)、白细胞共同抗原(CD45)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及分布,分析转移性肿瘤细胞中PKD-1的表达;通过体外培养BON细胞,分别激活和阻断PKD-1信号,或以表皮生长因子(EGF)处理细胞,以免疫荧光染色、蛋白质印迹法(Western blot)和反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法,检测BON细胞中EMT相关标志物的表达,分析PKD-1信号对BON细胞EMT的调控机制。两样本间比较采用t检验,多样本间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果NEN组织中Vimentin+转移性肿瘤细胞有在小动脉周围聚集现象,且PKD-1在NEN肿瘤细胞转移过程中呈动态变化;PKD-1信号能够促进BON细胞Vimentin的表达[(56.67±1.93)%比(35.55±2.22)%,t=7.178,P<0.01]并升高PKD-1和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平,EGF能刺激BON细胞发生间质样形态变化,并降低E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达(0.517±0.005比1.000±0.004,t=74.63,P<0.001)而增加Vimentin的表达(9.632±0.646比1.004±0.061,t=13.29,P<0.001)。结论NEN中PKD-1信号是调控肿瘤细胞EMT的重要机制;血管内皮细胞分泌EGF可能通过PKD-1信号诱导肿瘤细胞EMT,促进肿瘤转移。

硒抑制长链非编码RNA HOXB-AS1表达调控胃癌增殖的作用及其机制

目的探讨硒抑制长链非编码RNA HOXB cluster antisense RNA1(HOXB-AS1)表达调控胃癌增殖的作用及其机制。方法对人胃癌HGC-27、SNU-1,KATOⅢ细胞和人胃黏膜上皮细胞使用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内HOXB-AS1基因表达水平;根据亚硒酸钠添加的浓度将高表达HOXB-AS1基因的细胞分为空白组、5μmol/L组、10μmol/L组、15μmol/L组、20μmol/L组、25μmol/L组、30μmol/L组,分别培养24、48、72 h后采用细胞计数试剂(CCK-8)检测各组细胞活力,筛选亚硒酸钠的最佳作用浓度;用30μmol/L亚硒酸钠干预人胃癌HGC-27细胞,采用RT-qPCR检测细胞内HOXB-AS1基因表达水平,采用CCK-8检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡比例变化,运用蛋白质印迹法(Western blot)法检测蛋白激酶B(Akt)及雷帕霉素的哺乳动物靶标蛋白(mTOR)的表达水平。组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果RT-PCR检测结果表明,与其他细胞株比较,人胃癌HGC-27细胞HOXB-AS1基因的表达水平最高(5.37±0.14,F=386.913,P<0.05);CCK-8结果显示30μmol/L亚硒酸钠组的平均细胞抑制率都显著高于其他5组(F24 h=178.105,F48 h=1093.759,F72 h=473.833,P<0.05);RT-PCR检测结果表明,亚硒酸钠干预后的HGC-27人胃癌细胞的HOXB-AS1表达水平(0.11±0.01)显著低于对照组(t=43.895,P<0.05),而细胞凋亡率[(36.36±0.46)%]则显著高于对照组(t=-26.737,P<0.05);Western blot结果显示亚硒酸钠组的Akt(1.02±0.00)、磷酸化Akt(p-Akt,0.32±0.02)、mTOR(0.79±0.00)和磷酸化mTOR(p-mTOR,0.49±0.02)的相对表达量都显著低于对照组(tAkt=27.951,tp-Akt=47.666,tmTOR=37.898,tp-mTOR=25.307,P<0.05)。结论硒能够通过抑制人胃癌细胞的lncRNA HOXB-AS1表达来影响Akt/mTOR通路,从而促进人胃癌细胞的凋亡来抑制胃癌的增殖。