基于蛋白质组学探讨消癌解毒方调控Nrf2/HMOX1通路促进肝癌细胞铁死亡的作用机制

目的通过蛋白质组学方法探讨消癌解毒方促进肝癌小鼠肿瘤细胞铁死亡,抑制移植瘤生长的作用机制。方法C57BL/6J小鼠随机分为模型组、消癌解毒方低剂量组、消癌解毒方高剂量组、消癌解毒方联合铁死亡抑制剂组、铁死亡抑制剂组、顺铂组。构建H22小鼠移植瘤模型,消癌解毒方低、高剂量组予消癌解毒方灌胃,剂量分别为(10、20 g·kg^(-1)·d^(-1));铁死亡抑制剂组予Liproxstatin-1腹腔注射,剂量为10 mg·kg^(-1)·d^(-1);顺铂组予顺铂腹腔注射,剂量为10 mg·kg^(-1)·d^(-1);消癌解毒方联合铁死亡抑制剂组予消癌解毒方(20 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃以及Liproxstatin-1(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))腹腔注射,模型组灌胃等量生理盐水。连续给药11 d后剥取瘤体计算抑瘤率;HE染色检测病理变化;透射电镜观察线粒体结构变化;流式细胞术检测瘤体组织活性氧(ROS)水平;制备血清以TMT肽段标记结合LC-MS/MS寻找差异蛋白表达谱、应用IPA软件进行分析;生化检测血清铁离子、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HMOX1)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达水平。结果消癌解毒方低、高剂量及顺铂能抑制瘤体生长,抑瘤率分别为36.12%、51.63%、57.43%,铁死亡抑制剂促进了瘤体的生长,抑瘤率为-45.56%,消癌解毒方联合铁死亡抑制剂组瘤体较铁死亡抑制剂组缩小,抑瘤率为18.11%;HE染色显示消癌解毒方高剂量组、顺铂组瘤体组织出现凋亡细胞及大量空泡蓄积;透射电镜结果显示,消癌解毒方低、高剂量组出现一定程度的线粒体萎缩及膜密度增加;流式结果显示:消癌解毒方干预后ROS水平明显升高(P<0.01);蛋白质组学检测显示,消癌解毒方高剂量组与模型组相比差异蛋白共129个,其中下调蛋白62个,上调蛋白67个,差异表达涉及脂质代谢等方面;生化检测结果显示,消癌解毒方干预可升高小鼠血清铁离子、MDA含量,降低GSH含量;Western blot结果显示,消癌解毒方高剂量组干预后Nrf2、HMOX1蛋白表达水平增高,SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论消癌解毒方可调控Nrf2/HMOX1信号通路,调节氧化应激,升高脂质过氧化水平,促进肝癌细胞铁死亡,可能是其抑制移植瘤生长的作用机制之一。

基于ATF2和JAK2/STAT3信号通路研究麦门冬汤合千金苇茎汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用

目的:基于ATF2和JAK2/STAT3信号通路研究麦门冬汤合千金苇茎汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及对免疫功能的影响。方法:建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,分别给予生理盐水、麦门冬汤合千金苇茎汤、顺铂、麦门冬汤合千金苇茎汤+顺铂,连续给药21 d后,剥取瘤体称量质量并计算抑瘤率,计算胸腺和脾脏指数,HE染色观察肿瘤组织病理学改变;流式细胞仪检测CD4^(+)T淋巴细胞(CD4^(+))、CD8^(+)T淋巴细胞(CD8^(+))的分布与比例;采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-10、IL-12、IL-16含量;采用免疫组化法检测肿瘤组织中侵袭转移相关蛋白ATF2、MMP-2、MMP-9的表达;采用Western Blot检测肿瘤组织中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果:与模型组比较,各给药组瘤质量均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,顺铂组小鼠胸腺及脾脏指数均有所降低,而麦门冬汤合千金苇茎汤组与麦门冬汤合千金苇茎汤+顺铂组的胸腺及脾脏指数显著升高(P<0.01),光镜下可见各给药组肿瘤组织坏死程度加大,分裂增殖程度减轻。与模型组比较,各给药组小鼠脾淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比值显著升高,血清TNF-α、IL-10、IL-12、IL-16含量及瘤体组织中ATF2、MMP-2、MMP-9、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:麦门冬汤合千金苇茎汤与顺铂单独和联合使用对Lewis肺癌小鼠模型均有显著的体内抗肿瘤作用,同时可增强机体的免疫功能,降低机体炎症水平,其机制可能与下调ATF2、MMP-2、MMP-9表达和干预JAK2/STAT3信号转导通路有关。

消癌解毒方改善晚期肺腺癌患者癌症相关性疲劳的临床研究

目的:研究消癌解毒方对晚期肺腺癌患者的治疗作用及对癌症相关性疲劳的影响。方法:将80例晚期肺腺癌患者随机分为观察组和对照组各40例。对照组患者用AP方案进行治疗,观察组在对照组治疗的基础上加用消癌解毒方。比较两组患者的临床疗效及治疗前后中医症状积分、Piper疲乏量表评分、免疫指标和血清AGR2、IGFBP-7水平。结果:治疗后,两组患者客观缓解率、疾病控制率差异无统计学意义(P>0.05)。观察组心烦失眠、神疲乏力、咳痰等中医症状积分和总积分及Piper疲乏量表中行为疲乏、情感疲乏评分和总分显著低于对照组,NK、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-6、IGFBP-7水平显著高于对照组,AGR2水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:消癌解毒方能改善晚期肺腺癌患者症状、提高患者免疫力,降低患者癌症相关性疲劳,减轻患者血清AGR2水平,升高患者血清IGFBP-7水平。

木犀草素通过上调microRNA-34a-5p诱导肺癌细胞株H460凋亡的研究

探究木犀草素诱导人肺癌细胞株H460凋亡的分子机制,为其治疗肺癌提供新的科学依据。选取处于对数生长期的H460细胞株,并分为对照组和不同剂量的木犀草素组。采用CCK-8法检测木犀草素对H460细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;PCR array检测肺癌相关基因mRNA表达;Western-blot检测p53、p21、Bax、Bcl-2表达量变化;qRT-PCR法检测microRNA-34a(miR-34a)的表达水平;本实验还检测了过表达miR-34a-5p后对H460细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。结果显示,木犀草素能有效抑制人肺癌H460细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制可能是通过激活p53信号通路,上调miR-34a-5p,最终影响凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达来实现的。

中药何首乌促进黑色素生成的作用机理研究

目的研究中药何首乌在B16黑素瘤细胞中促进黑色素生成的作用机理。方法用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法测定何首乌对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。RT-PCR和Western blotting法分别检测何首乌作用前后酪氨酸酶、小眼相关转录因子(MITF),酪氨酸酶相关蛋白1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白2(TRP-2)基因表达和蛋白合成的变化。结果随何首乌加药浓度的增大,细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素合成能力明显增强;何首乌可明显促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成,但对TRP-1、TRP-2的表达几乎没有影响。结论何首乌在体外能显著刺激B16细胞中黑色素的生成,上述变化可能是通过促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成以及激活酪氨酸酶的活性来实现的。

制山茱萸活性部位对D-半乳糖致小鼠肝损伤的保护作用

目的:研究制山茱萸活性部位对D-半乳糖致小鼠肝损伤的保护作用。方法:采用D-半乳糖造成小鼠急性肝损伤模型,以血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及肝脏丙二醛(MDA)含量作为考察指标,观察制山茱萸活性部位(醇沉多糖部位、正丁醇萃取部位、石油醚萃取部位)对小鼠急性肝损伤的保护作用。另取肝组织进行常规HE染色病理组织学切片,结合透射电镜观察肝细胞的凋亡情况。结果:生化分析结果表明,与正常对照组比较,模型组小鼠肝匀浆SOD活性显著降低,MDA含量及ALT、AST活性活性均显著升高(P<0.05);与模型组比较,三种制山茱萸活性部位干预组小鼠肝脏ALT、AST活性及MDA含量均显著降低,肝脏SOD活性显著升高(P<0.05)。肝脏病理形态学显示,模型组肝脏出现明显坏死和炎症,而制山茱萸活性部位干预组变性坏死明显减少,炎症细胞数减少,肝组织的损伤修复程度较好。电镜结果显示,模型组肝细胞损伤较为明显,小鼠肝脏细胞出现明显凋亡特征,而制山茱萸活性部位用药组未见凋亡。结论:制山茱萸多糖、正丁醇萃取部位、石油醚萃取部位均表现出保肝作用,提示三者均存在保肝活性成分,是制山茱萸保肝的物质基础所在,其保肝机制可能与抑制氧化应激及抗炎症反应有关。

黑芝麻提取物促B16黑素瘤细胞黑素合成及其机制的研究

目的研究黑芝麻的水提取物对B16黑素瘤细胞系酪氨酸酶活性、黑素合成及相关基因和蛋白表达的影响,探讨黑芝麻促进黑色素合成的可能机制。方法选择3种浓度(0.5,1,2 mg/ml)的黑芝麻水提物作用于B16黑素瘤细胞72h,观察其对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。免疫印迹法和半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测药物作用48 h前后酪氨酸酶(Tyrosinase)、小眼相关转录因子(microphthalmia associated transcription factor,MITF),酪氨酸酶相关蛋白酶1(TRPl)和酪氨酸酶相关蛋白酶2(TRP2)蛋白和mRNA表达水平的变化。结果3种浓度的黑芝麻水提物可轻微促进B16细胞的增殖(P>0.05);试验浓度范围内可明显促进B16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性增加(P<0.05),并以浓度依赖方式促进酪氨酸酶和MITF的蛋白和mRNA表达(P<0.05),但对TRP-1、TRP-2的表达几乎没有影响(P>0.05)。结论黑芝麻水提物在体外能直接刺激B16黑素瘤细胞黑色素的合成,上述变化可能通过促进酪氨酸酶和MITF的基因转录和蛋白表达作用来完成。

阿尔泰山温泉沟森林公园地衣区系的比较研究

为了查明阿尔泰山温泉沟森林公园地衣物种组成及区系特征,对不同海拔采集的地衣进行了种类鉴定和区系分析,同时对其他11个地区的地衣区系进行了比较。不同地区间的地衣种属相似性采用Czehanowski系数;地衣的区系丰富性采用左家哺综合系数;地衣区系地理成分的相关性采用主成分分析和聚类分析法进行了比较。结果表明,阿尔泰山温泉沟森林公园地衣区系中,单种科和单种属的比例在该地区地衣种类组成中较高,分别占该地区地衣总科属数的40%和56.52%。属的相似性与额尔齐斯河大峡谷最高为64.15%,种的相似性与哈纳斯国家级自然保护区最高为33.96%,与武夷山地衣的属种相似性最低分别为27.12%和2.27%。地衣科、属、种的丰富度指数,还是综合性丰富性指数较低,所比较的12个地区中排在我国第9位。地衣区系地理成分中,环北极成分占优势,其次为温带成分和世界广布成分,与高等植物区系特征相符。

七年制中医专业分子生物学教学改革与实践

从教学现状、理论教学改革、实验教学改革和教改效果4个方面进行探讨,为分子生物学教学改革提供新思路。

山茱萸活性成分对D-半乳糖致衰星形胶质细胞影响的实验研究

目的研究山茱萸活性成分马钱苷、莫诺苷对D-半乳糖致衰大鼠星形胶质细胞的保护作用。方法常规方法体外培养乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞,采用免疫荧光方法进行星形胶质细胞鉴定;MTT法对比不同浓度D-半乳糖对星形胶质细胞的增殖抑制作用,以及马钱苷、莫诺苷对D-半乳糖致衰星形胶质细胞活力的影响;以超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)为观察指标,观察马钱苷、莫诺苷对D-半乳糖致衰星形胶质细胞的影响;ELISA法检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量变化;Western blot法检测Bax、caspase-3、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/ERK激酶(p-MEK1/2)的表达水平,以做进一步机制研究。结果马钱苷、莫诺苷组与模型组比较,细胞的增殖能力提高,SOD含量增加,MDA活性降低,且差异有显著性(P<0.05);马钱苷、莫诺苷组生长因子(GDNF、bFGF)的分泌高于模型组;Western blot结果表明,D-半乳糖致衰老的星形胶质细胞中Bax、caspase-3蛋白表达无明显变化,模型组pERK1/2、p-MEK1/2蛋白表达降低,马钱苷、莫诺苷增加pERK1/2、p-MEK1/2蛋白的表达。结论山茱萸活性成分马钱苷、莫诺苷可通过提高D-半乳糖致衰星形胶质细胞的增殖能力,提高衰老细胞的抗氧化能力,发挥抗衰老作用,其机制可能与MEK/ERK介导的信号通路调控有关。

5-羟甲基糠醛对过氧化氢致大鼠海马神经细胞损伤的保护作用研究

目的观察山茱萸活性成分5-羟甲基糠醛(5-HMF)对H2O2诱导损伤的大鼠海马神经细胞增殖、凋亡及LDH、SOD表达的影响。方法常规方法进行乳大鼠海马神经元的原代培养,建立体外H2O2氧化损伤模型,采用光镜和电镜进行形态学观察,MTT法对比不同浓度5-HMF对大鼠海马神经元增殖的影响,黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞上清液中LDH、SOD的活力。结果光镜结果显示5-HMF大、中剂量组的细胞形态基本正常;电镜结果显示5-HMF大剂量组对细胞有一定程度保护作用。MTT结果显示5-HMF大、中剂量组OD值比H2O2模型组明显增高(P<0.05);LDH和SOD检测结果表明5-HMF大、中剂量组能明显降低培养液中LDH活性、升高SOD活性。结论山茱萸活性成分5-HMF大、中剂量组对H2O2损伤的大鼠海马神经元有一定保护作用。

新疆额尔齐斯河大峡谷与不同地区地衣区系的比较

对新疆额尔齐斯河大峡谷地衣区系与国内7个不同地区的地衣区系成分进行了比较分析。结果表明:额尔齐斯河大峡谷地衣区系成分包括世界广布成分、环北极成分、温带成分、东亚成分和中国特有成分5种类型,其中,温带成分和环北极成分占绝对优势,这与该区地理位置、气候以及植被类型相符合。同时,该区地衣区系具有一定的东亚特色,但特有现象不明显。与国内其余7个地区地衣区系的数值分析表明,该区地衣区系与天山一号冰川的亲缘关系最近,与河北驼梁山的区系类型也较为相似,但河北驼梁山具有明显的亚热带区系特征,与哈纳斯国家级自然保护区、内蒙古赛罕乌拉国家级自然保护区、恰西雪岭云杉国家级自然保护区、重庆金佛山、武夷山的地衣区系关系较为疏远。

文献引导式教学模式在医学分子生物学中的应用

改革传统的教学方法,培养高素质人才,是大学教学需要实现的重要目标。文献引导式教学模式选取与课程知识密切联系的科研文献,导引出要学习的理论问题以及解决问题的方法,从而达到培养学生发现问题、解决问题的目的。以文献引导式教学法运用于医学分子生物学教学为例,具体分析、示范了如何通过探索性的课程教学模式进行大学专业课程的教学,实现大学培养社会转型急需的创新型人才的目标。

血管紧张素转换酶基因多态性与糖尿病的相关性研究

为了研究血管紧张素转换酶(ACE)基因的插入(I)/缺失(D)多态性是否与糖尿病(DM)的易感性相关,对108例糖尿病患者和196例正常人进行了ACE基因多态性分析.发现DM患者基因型DD基因型频率为22%,χ2=4.7,P>0.05(其中,Ⅰ型糖尿病患者相应频率为21%,χ2=4.9,P>0.05;Ⅱ型糖尿病患者为23%,χ2=2.1,P>0.05),而对照组DD基因型频率为16%;DM患者D等位基因频率为38%,χ2=0.0048,P>0.05(其中,Ⅰ型糖尿病患者相应频率为34%,χ2=0.62,P>0.05;Ⅱ型糖尿病患者为41%,χ2=0.25,P>0.05),而对照组相应频率分别为38%.糖尿病患者与对照组之间ACE基因I/D多态性频率存在差异,但不显著.这一结果表明ACE基因的多态性与糖尿病的易感性可能无关.

转基因小麦Puroindoline蛋白SDS-PAGE方法的研究与应用

小麦嘌呤吲哚蛋白(Puroindoline)是优质遗传特性硬度的生化标记,对小麦磨粉品质起决定性作用。对目前分析此类蛋白的两类Triton-X-114和Tricine-SDS-PAGE系统进行了优化和比较,建立了详细的适合半子粒分离Pin蛋白的电泳方法。采用此法检测转pinA基因的硬粒小麦P34的后代以及转基因硬粒小麦之间杂交子代的外源基因pinA的表达情况,取得了良好的效果。该方法为Puroindoline蛋白的进一步研究奠定了基础,为小麦品质生化和分子标记辅助育种提供了方法。

中药复方及有效成分对神经系统保护作用研究

为了探讨中药复方及有效成分对神经系统的保护作用,通过收集近年发表的相关研究报道,从实验目的、实验方法以及实验的结果和结论等几个方面,系统总结了中药复方及有效成分在神经系统保护方面发挥的积极作用,为今后进一步研究其它中药复方或有效成分对神经系统的保护作用机理提供了有效参考。

建构主义教学理论在我校《医学生物学》教学中的应用

简要介绍了建构主义教学理论在我校《医学生物学》教学中应用的一点体会,其核心可以概括为:以学生为中心,强调学生对知识的主动探索、主动发现和对所学知识意义的主动建构。

医学遗传学课程建设与教学实践

医学遗传学是医学领域十分活跃的前沿学科，它研究人类疾病与遗传的关系，包括人类遗传病的发生、传递规律、诊断、治疗和预防等。近年来，医学遗传学对人体的认识已从整体的生理学和病理学水平深入到细胞和分子水平，人类基因组学、蛋白质组学的蓬勃发展，为遗传病发病机制、诊断、治疗、预防等的研究，开辟了广阔的前景。

凉血化瘀方对肝细胞损伤中自噬与凋亡相关蛋白的影响

目的研究凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合D-氨基半乳糖(D-GalN)所致肝细胞损伤中自噬和凋亡相关途径的影响,并探讨其分子调控机制。方法体外培养人正常肝LO2细胞,用TNF-α(100ng/mL)和D-GalN(44μg/mL)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞的形态学变化;MTT法检测细胞活力;Western blot检测凋亡和自噬标志蛋白caspase-3、Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ,凋亡和自噬调节蛋白Bax、Bcl-2和mTOR信号通路调控途径mTOR蛋白表达水平的变化。结果凉血化瘀方能改善肝细胞病理损伤,并表现有剂量依赖性;治疗组细胞凋亡和自噬标志蛋白caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ表达下调,凋亡和自噬调控蛋白中负相关的Bcl-2表达上调、正相关的Bax表达下调,并呈现一定的量效关系,同时mTOR蛋白的表达也体现了剂量相关的下调作用。结论凉血化瘀方对TNF-α+D-GalN所致肝细胞损伤的保护作用,与抑制细胞自噬和凋亡相关,其机制主要是参与自噬和凋亡相关途径中蛋白的表达调控。

麦冬皂苷B体外调控非小细胞肺癌A549细胞miRNA-34b表达的研究

目的:本研究主要观察不同方式处理后的非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中mi RNA?34b表达水平,探讨mi RNA?34b对MET信号通路的调控机制,以及麦冬皂苷B(OPB)抑癌效应的分子机理,探寻治疗NSCLC的新靶点。方法:采用非小细胞肺癌A549细胞、胚肺成纤维细胞MRC?5、A549+OPB细胞、感染过表达慢病毒LV?hsa?mir?34b的A549细胞、以及感染阴性对照CON181B病毒的A549细胞作为研究对象,分别设为CON组、MRC?5组、CON+OPB组、Micro?up组、NC组。采用q RT?PCR方法检测mi R?34b在CON组、MRC?5组、A549+OPB组A549细胞中的表达情况。使用生物信息学软件预测mi RNA?34b可能的下游功能靶基因。使用q RT?PCR的方法定量分析OPB对MET基因表达的影响,用Western blot检测mi RNA?34b和OPB对靶MET蛋白表达的影响。结果:与MRC?5组相比,A549细胞中mi RNA?34b的表达明显减少,加入OPB后mi R?34b的表达增加。生物信息学预测显示MET基因是mi R?34b可能的关键下游靶基因。加入OPB后,MET基因水平和蛋白水平的表达均降低。结论:OPB可能通过上调A549细胞mi RNA?34b表达,抑制下游靶基因MET进而发挥抗癌作用。