Δ133p53表达状态对rmhTNF效应的影响及机制研究

背景与目的:p53异构体在胃癌发生中的作用报道较少。该研究旨在探讨p53异构体Δ133p53在重组改构人肿瘤坏死因子(recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmh TNF)干预胃癌细胞系生物学效应中的作用,为胃癌诊断和治疗提供新的依据。方法:采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)和流式细胞术,检测不同浓度的rmh TNF单独或联合氟尿嘧啶(5-FU)应用于MKN-45(表达Δ133p53)和SGC-7901(不表达Δ133p53)细胞,观察细胞抑制率和细胞凋亡情况。通过巢式逆转录多聚酶链反应(nested reverse transcriptase-polymerase chain reaction,n RT-PCR)和实时荧光定量多聚酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测Δ133p53、Gadd45α和Cyclin B1 m RNA的表达变化。结果:rmh TNF单独作用于Δ133p53表达阳性的MKN-45细胞有抑制作用,浓度为50、500 IU/m L的rmh TNF作用24 h后,细胞抑制率分别为24.82%、72.33%(t=-9.558,P<0.01),并可提高5-FU的抑制率,且具有显著的量效和时效关系,5-FU(25μg/m L)、rmh TNF(50 IU/m L)+5-FU(25μg/m L)、rmh TNF(500 IU/m L)+5-FU(25μg/m L)作用于MKN-45细胞24 h后,抑制率分别为18.20%、48.66%、59.83%(F=82.742,P<0.01);rmh TNF(50 IU/m L)+5-FU(25μg/m L)作用于MKN-45细胞24、48、72 h后,抑制率分别为48.66%、68.20%、85.23%(F=128.583,P<0.01)。而对于Δ133p53表达阴性的SGC-7901细胞,浓度为50、500 IU/m L的rmh TNF单独抑制率为2.74%、3.25%,抑制作用不明显(t=-0.121,P>0.05)。流式细胞术显示,rmh TNF不仅单独可引起MKN-45细胞凋亡,而且可显著增强5-FU促细胞凋亡作用,rmh TNF(50 IU/m L)、rmh TNF(50 IU/m L)+5-FU(25μg/m L)、rmh TNF(500 IU/m L)+5-FU(25μg/m L)作用于MKN-45细胞24 h后,凋亡率分别为7.21%、10.13%、15.28%(F=123.931,P<0.05)。在MKN-45中,rmh TNF单独或联合5-FU可下调Δ133p53和Cyclin B1基因,上调Gadd45α基因表达水平。n RT-PCR检测对照组及实验组Δ133p53基因相对表达量分别为0.886、0.499、0.330、0.161(F=240.927,P<0.01);Real-time PCR检测实验组Gadd45α基因相对表达量分别为1.227、1.694、3.394,Cyclin B1基因相对表达量分别为1.221、0.722、0.316。Δ133p53表达水平与Cyclin B1呈正相关(r=0.977,P<0.01),与Gadd45α呈负相关(r=-0.950,P<0.01)。结论:rmh TNF对表达Δ133p53胃癌细胞展现出显著的抑制效应,并能增加传统化疗药物5-FU的疗效,其中部分效应可能是通过调节p53下游分子Cyclin B1和Gadd45α表达实现的,提示Δ133p53可能是rmh TNF治疗胃癌生物学效应的关键靶点。

北京市东城区娱乐场所女性性工作者艾滋病和丙肝防治知识知晓率及其影响因素

目的了解北京市东城区娱乐场所女性性工作者(FSW)艾滋病和丙肝防治知识知晓情况,探讨其影响因素,为艾滋病和丙肝知识宣教工作提供依据。方法采用分层整群抽样方法,调查收集FSW艾滋病知晓情况、丙肝晓情况、高危行为等信息,采集静脉血检测人类免疫缺陷病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)。结果共调查271人,艾滋病知识知晓率为92.98%,低档场所FSW艾滋病知晓率(88.37%)低于中档场所FSW艾滋病知晓率(95.13%),差异有统计学意义(P<0.05);丙肝知识知晓率54.61%,低档场所FSW丙肝知晓率(44.18%)低于中档场所FSW艾滋病知晓率(59.45%),差异有统计学意义(P<0.05);最近1个月与客人发生性行为,低档场所坚持每次使用安全套率(70.93%)低于中档场所坚持每次使用安全套率(88.11%),差异有统计学意义(P<0.05)。检出HIV阳性率为0.00%,HCV阳性率为0.74%。结论北京市东城区低中档娱乐场所FSW艾滋病、丙肝相关知识知晓率较低,尤其低档场所防治艾滋病、丙肝知识水平偏低,安全意识薄弱,安全套使用率低,应继续加强高危人群健康教育,提高其自我保护意识。

Δ133p53异构体在5-FU抑制胃癌MKN45细胞系生长实验中的作用

背景与目的:Δ133p53具有促进肿瘤细胞生长的作用,但具体作用机制尚不明确,本实验是采用5-FU-MKN45胃癌细胞系模型,观察p53异构体Δ133p53表达与p53基因下游MDM2、cyclin G1基因表达的相关性。方法:使用不同浓度5-FU(50μg/m L,100μg/m L)作用于人胃癌MKN45细胞系后,MTT法检测细胞抑制率,巢式逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR法)检测Δ133p53、MDM2及cyclin G1 m RNA的表达变化。组间差异用单因素方差分析,组内比较用t检验,两变量相关性用Pearson直线相关分析。结果:MTT结果显示,随着5-FU浓度增高以及作用时间的延长,细胞抑制率逐渐增加,4组实验中50μg/m L 5-FU作用于MKN45细胞24、48和78 h后抑制率平均值分别为41.10%、54.79%和68.48%,差异有统计学意义(F=45.52,P=0.00)。100μg/m L 5-FU作用于MKN45细胞24、48和78 h后抑制率平均值分别为69.53%、78.21%和86.92%,差异有统计学意义(F=85.58,P=0.00)。50和100μg/m L 5-FU作用于MKN45细胞24 h后抑制率分别为41.10%和69.53%,差异有统计学意义(F=51.29,P=0.00)。50和100μg/m L 5-FU作用于MKN45细胞48 h后抑制率分别为54.79%和78.21%,差异有统计学意义(F=51.29,P=0.00)。50和100μg/m L 5-FU作用于MKN45细胞72 h后抑制率分别为68.48%和86.82%,差异有统计学意义(F=104.91,P=0.00)。RT-PCR结果显示,随着5-FU浓度的增加,胃癌细胞系MKN45细胞中Δ133p53 m RNA、MDM2 m RNA和cyclin G1 m RNA表达量逐渐下降,组间差异具有统计学意义(F值分别为738.532、1 396.607和2 785.560,P=0.00)。相关性分析显示,Δ133p53 m RNA与MDM2 m RNA在胃癌中表达呈正相关(r=0.871,P=0.01),而cyclin G1 m RNA的表达与Δ133p53 m RNA没有明显的相关性(P=0.13)。结论:在5-FU-MKN45模型中,Δ133p53参与的5-FU的抗肿瘤途径与MDM2有关,与cyclin G1无关。

幸福家庭

吃过晚饭，我家的家庭音乐会又开始了。爸爸笑眯眯地拿起他的口琴，妈妈一边喝水一边清嗓子，我迫不及待地穿上舞蹈鞋。随着爸爸悠扬的琴声，妈妈唱起了动听的歌，我也跟着欢快的节奏翩翩起舞、

rmhTNF对Δ133p53表达阳性胃癌细胞系MKN45的影响

[目的]利用rmh TNF-MKN45细胞模型,观察p53异构体Δ133p53及p53下游基因的表达。[方法]不同浓度(50、100、200、400、500 IU/ml)重组改构人肿瘤坏死因子(rmh TNF)作用应用于MKN45,采用CCK-8法,观察其细胞增殖抑制率;通过巢式逆转录多聚酶链反应(n RT-PCR法)检测Δ133p53、p53、Gadd45α、PTEN、Mdm2、Bax和Cyclin B1 m RNA的表达变化。[结果]随rmh TNF作用浓度增加和作用时间(24、48、72h)延长,MKN45细胞抑制率明显增加(F=35.683,P<0.001;F=60.328,P<0.001)。随rmh TNF浓度增加,MKN45细胞中,p53、Gadd45α、PTEN、Bax基因表达上调,Δ133p53、Mdm2、Cyclin B1基因表达下调。Δ133p53与p53、Gadd45α、PTEN、Bax表达呈负相关(r=-0.916,-0.894,-0.872,-0.971,P均<0.01),与Mdm2、Cyclin B1表达呈正相关(r=0.924,0.943,P均<0.01)。[结论]在肿瘤生长抑制效应中,Δ133p53异构体表现出与野生型p53拮抗作用,其机制可能与调控Gadd45α、PTEN、Mdm2、Bax、Cyclin B1等下游基因表达有关。

p53β在氟尿嘧啶干预人胃癌细胞系中表达的生物学效应

目的探讨p53异构体p53β在氟尿嘧啶(5-FU)干预胃癌细胞系MKN45及SGC-7901中表达的生物学效应。方法将不同浓度的5-FU作用于MKN45和SGC-7901细胞内24h,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞抑制率;巢式逆转录多聚酶链反应(nRT-PCR)检测p53和P53βmRNA的表达变化;Western-blot检测p53和P53β蛋白的表达变化。结果不同浓度(25、50、100μg/ml)的5-FU对MKN45细胞有抑制作用,抑制率分别为18.204%、31.354%、52.969%,随药物浓度的增加而增加;对SGC-7901细胞抑制率分别为26.305%、26.363%、25.780%,虽有抑制作用,但与药物浓度无关;浓度为100μg/ml的5-FU作用24h后,对MKN45细胞抑制率明显高于SGC-7901细胞。nRT-PCR检测MKN45中,p53和P53βmRNA的表达随5-FU浓度的增加而增加。Western-blot检测MKN45中,p53和P53β蛋白的表达随5-FU浓度的增加而增加。结论 5-FU对表达野生型p53的人胃癌细胞MKN45的抑制效应中,随5-FU浓度的增加,上调p53、p53β的表达,推测p53β在肿瘤生长抑制实验中发挥着重要的作用。

和胃煎剂对实验性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜再生的影响

目的通过观察胃黏膜细胞再生情况,探讨和胃煎剂治疗慢性萎缩性胃炎的机制。方法 45只5周龄雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、萎缩性胃炎组以及干预组,以水杨酸钠法复制慢性萎缩性胃炎小鼠模型,HE及免疫组化法检测胃黏膜陷凹细胞,壁细胞,增殖细胞的变化;半定量实时荧光PCR检测小鼠胃黏膜msi-1 mRNA表达。结果萎缩性胃炎小鼠壁细胞,陷凹细胞减少显著低于正常组与干预组(P<0.01),PCNA阳性表达增加显著高于正常组与干预组,msi-1 mRNA表达显著高于干预组和与正常组(P<0.01);干预组与正常组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论和胃煎剂对水杨酸钠法制备的小鼠慢性萎缩性胃炎具有保护作用,其机制可能与诱导壁细胞分化有关。

2010—2017年北京市某区结核病流行病学特征

目的了解2010—2017年北京市某区结核病患者疾病流行学特征,从而为北京市某区结核病防控工作提供参考依据。方法用Excel和SPSS21.0软件对2010—2017年北京市某区结核病管理信息系统中的结核登记数据资料以及传染病报告信息管理系统资料进行流行病学回顾性分析。结果2010—2017年北京市某区共报告结核病病例1881例,结核性死亡2例,年均报告发病率为27.520/10万。2010—2017年报告的病例数较稳定,发病率最低的是2017年(22.737/10万),2013年发病率最高(33.883/10万),发病以青壮年组(25~<35岁)例数最多,儿童组(<15岁)最少;家政、家务及待业例数为612例,占报告发病总数的33.12%。患者来源方式以转诊和追踪患者为主。结论2010—2017年北京市某区结核病疫情处于稳定状态,但应当高度重视青壮年和老年人肺结核病的防治工作,继续加大和加强肺结核防治工作的投入和管理。

Δ133p53在rmhTNF干预人胃癌细胞MKN-45移植瘤生长中的作用

目的该研究采用rmhTNF-MKN-45裸鼠皮下移植瘤模型,观察p53异构体Δ133p53表达的生物学意义,为胃癌的治疗提供新的依据。方法以人胃癌MKN-45细胞为研究材料,建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成3组,空白对照组肌注生理盐水,实验1组肌注rmhTNF 16.7 IU,实验2组肌注rmhTNF 33.3 IU,均为0.1 mL,1次/d,连续注射10 d。14天后,处死裸鼠,剥离肿瘤组织,记录肿瘤体积和抑瘤率,采用NRT-PCR检测Δ133p53、p53、MDM2mRNA表达水平。结果rmhTNF对MKN-45裸鼠移植瘤有抑制作用(F=937.773,P<0.01),剂量为16.7 IU、33.3 IU的rmhTNF,作用10 d后,裸鼠移植瘤抑制率分别为14.10%、29.04%;作用14 d后,裸鼠移植瘤抑制率分别为36.09%、57.50%,而且具有量效及时效依赖关系。nRT-PCR结果示,随着rmhTNF剂量的增加,MKN-45裸鼠移植瘤中,Δ133p53mRNA的相对表达量分别为1.021、0.602、0.372(F=105.735,P<0.01),MDM2mRNA的相对表达量分别为1.087、0.826、0.617(F=27.028,P<0.01),p53mRNA的相对表达量分别为0.321、0.580、0.872(F=25.963,P<0.01),Δ133p53表达水平逐渐下降,与MDM2呈正相关(r=0.913,P<0.01),与p53呈负相关(r=-0.903,P<0.01)。Δ133p53蛋白的表达量:0.714、0.496、0.348,MDM2蛋白的表达量:0.747、0.630、0.531,并且随rmhTNF剂量增加而降低:Δ133p53蛋白(F=38.755,P<0.01)、MDM2蛋白(F=18.897,P<0.01);实验组p53蛋白的表达量:0.338、0.525、0.713,并且随rmhTNF剂量增加而增高(F=17.596,P<0.01)。Pearson直线相关分析结果示:Δ133p53表达水平逐渐下降,与MDM2呈正相关(r=0.961,P<0.01),与p53呈负相关(r=-0.891,P<0.01)。结论rmhTNF对人胃癌细胞MKN-45裸鼠移植瘤的抑制效应中,Δ133p53与野生型p53发生拮抗作用,其抗肿瘤途径可能与调节p53-MDM2表达途径有关,Δ133p53可能是胃癌治疗的重要靶点。

2013-2017年北京市东城区60岁以上人群肺结核流行病学特征分析

目的分析2013-2017年北京市东城区60岁以上人群肺结核发病特征及流行规律,为该区老年人群结核病防控提供依据。方法采用描述流行病学方法对2013-2017年结核病信息管理系统(新)中登记的北京市东城区60岁以上肺结核病例资料及人口学资料进行分析。结果2013-2017年北京市东城区60岁以上人群肺结核登记病例458例,占同期占该区肺结核病例总数的36.15%,平均登记发病率62.38/10万;登记病例数男女性别比1.6∶1,涂阳构成比为32.09%,均高于全人群发病相应比例;时间分布以第一、二季度发病人数较多,占65.72%。结论北京市东城区老年肺结核疫情随时间下降很慢或变化趋势不明显,说明老年肺结核疫情形势依然严峻,相关部门需制定有针对性的防控措施。

2014—2018年北京市东城区流动人口结核病流行病学特征分析

目的通过对2014—2018年北京市东城区流动人口结核病患者流行特征进行回顾性分析,为北京市东城区流动人口结核病防控工作提供参考依据。方法用Excel和SPSS 21.0软件对2014—2018年北京市东城区结核病管理信息系统中的流动人口结核登记数据资料进行流行病学回顾性分析。结果2014—2018年北京市东城区共报告流动人口结核病患者327例,男性190例、女性137例,男女患者数之比为1.39∶1,不同年份流动人口肺结核患者男女性别分布差异无统计学意义(χ^(2)=5.49,P>0.05);发病年龄集中在15~54岁人群,不同年份间不同年龄人群差异有统计学意义(χ^(2)=7.49,P<0.05);职业以家政家务及待业为主,占全部患者数的34.25%;患者来源方面中以转诊为主(203例),占总数的62.27%。结论2014—2018年北京市东城区流动人口结核病疫情处于稳定状态,但应高度重视男性以及青壮年结核病的防治工作,加强对这些人群的防控管理。

rmhTNF对Δ133p53表达差异裸鼠模型的影响

目的探讨rmhTNF对Δ133p53表达差异的胃癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其机制。方法以人胃癌MKN-45和SGC-7901细胞为研究材料,建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成3组,空白对照组肌注生理盐水0.1ml,实验1组肌注rmhTNF 16.7IU,实验2组肌注rmhTNF 33.3IU,均为1次/d,连续注射10d。14d后处死裸鼠,剥离肿瘤组织,记录肿瘤体积和抑瘤率,采用NRT-PCR检测Δ133p53mRNA的表达水平。结果rmhTNF对MKN-45胃癌裸鼠移植瘤有抑制作用(F=937.773,P<0.01),而且具有量效及时效依赖关系。而对SGC-7901胃癌裸鼠移植瘤抑制作用不明显(t=-0.121,P>0.05)。两种胃癌组织中,胃癌MKN-45表达Δ133p53基因,而SGC-7901不表达Δ133p53基因;在MKN-45移植性胃癌中,rmhTNF可下调Δ133p53基因,具有量效关系(F=114.265,P<0.01)。结论肌肉注射rmhTNF对表达Δ133p53裸鼠胃癌生长具有显著抑制作用,可能是通过调节Δ133p53的表达实现的。