不同程度间歇低氧对小鼠肺成纤维细胞活化和胞外基质分泌的影响

目的探讨不同程度间歇低氧(IH)对MLg小鼠肺成纤维细胞活化和胞外基质分泌的影响。方法取对数生长期的MLg成纤维细胞,IH分别处理1 h、4 h、8 h(IH1组、IH4组、IH8组),IH频率为5%O_2100 s,21%O_2120 s,并设置常氧对照组(21%O_2处理8 h,N组)。实验结束后收集细胞,采用q RT-PCR和Western blot检测各组α肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶质蛋白(COL1)m RNA和蛋白表达水平。结果 IH1组、IH4组、IH8组α-SMA、COL1 m RNA及蛋白的表达水平明显高于N组(P<0.05),且随着IH时间的延长,α-SMA、COL1表达水平逐渐升高。结论 IH可以促进小鼠肺成纤维细胞活化和胞外基质分泌,其作用机制可能与氧化应激有关。

OSAS模式IH对肺癌细胞系YAP以及P-YAP表达的影响

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)模式间歇低氧(IH)对肺癌细胞系A549细胞YES相关蛋白(YAP)及磷酸化YAP(P-YAP)表达的影响。方法 IH分别处理A549细胞1 h、3 h、6 h(IH1组、IH3组、IH6组),IH频率为:5%O2300 s,21%O2300 s,并设置常氧对照组(N组)。q RT-PCR检测YAP m RNA表达;Western blot检测YAP及P-YAP蛋白表达。结果 IH1组(2.50±0.18)、IH3组(4.07±0.25)、IH6组(9.18±0.58)YAP m RNA的相对表达量显著高于N组(1.00±0.01),差异有统计学意义(均P<0.05),IH1组、IH3组、IH6组YAP蛋白的表达量较N组上调,并随暴露时间增加而上调;IH1组、IH3组、IH6组P-YAP蛋白的表达量较N组下调,并随暴露时间增加而下调。结论 YAP信号通路可能在OSAS模式IH促进肿瘤发生发展的过程中起重要的调控作用。

氯化钴低氧对黑色素瘤细胞系迁移能力及FSTL1表达分泌的影响

目的探讨氯化钴(CoCl_2)化学模拟低氧对黑色素瘤细胞系B16F10迁移的影响,以及Follistatin-like 1(FSTL1)蛋白在此过程中的转录、表达和分泌情况。方法 CoCl_2模拟低氧作用于小鼠B16F10细胞,实验分为3组:0μmol/L CoCl_2对照组、50μmol/L和100μmol/L CoCl_2处理组。用MTT法测定细胞活力;用Transwell法测定细胞迁移能力;qRT-PCR检测Fstl1 m RNA表达;Western blot检测细胞内外FSTL1蛋白表达。结果 CoCl_2模拟低氧可以导致B16F10细胞存活率显著下降,并呈浓度和时间依赖性;50μmol/L CoCl_2处理组(0.158±0.006)、100μmol/L CoCl_2处理组(0.203±0.002)B16F10细胞迁移能力均明显高于对照组(0.107±0.001,均P<0.05);50μmol/L CoCl_2处理组(1.573±0.114)、100μmol/L CoCl_2处理组(2.219±0.085)Fstl1 m RNA表达均显著高于对照组(0.962±0.054,均P<0.05),而胞内FSTL1蛋白表达与Fstl1 m RNA表达趋势一致。同时也发现,CoCl_2处理组细胞外FSTL1蛋白表达均低于对照组,且100μmol/L CoCl_2处理组几乎检测不到FSTL1表达。结论 CoCl_2模拟低氧促进黑色素瘤细胞迁移,可能与FSTL1的表达和分泌有关,但其功能和作用机制还需进一步探讨。

Follistatin-Like 1单倍体敲除促进肺纤维化小鼠成纤维细胞自噬

Follistatin-like 1(Fstl1)是促纤维化因子,在成纤维细胞中通过调节TGF-β信号参与肺纤维化发生过程.自噬是维持细胞稳态的过程,在细胞衰老和分化中起到重要的作用.在特发性肺纤维化全肺中自噬不足.通过博来霉素处理Fstl1+/-和Fstl1+/+小鼠构建肺纤维化模型,研究在肺纤维化发展过程中,Fstl1对肺纤维化的效应细胞即成纤维细胞中的自噬的调节.Western blot检测自噬标记蛋白LC3和p62的表达,qRT-PCR检测自噬相关基因ATG5,ATG7,ATG12的表达.在肺纤维化发展的不同时期成纤维细胞的自噬处于动态变化过程,在第7 d时成纤维细胞自噬降到最低,随后逐渐恢复.在未经肺纤维化诱导的小鼠中,Fstl1单倍缺失不影响成纤维细胞自噬;在博莱霉素处理的小鼠中,Fstl1单倍缺失提高了成纤维细胞自噬.