碱性β-聚糖酶产生菌选育及产酶条件优化

从碱性土样中分离到数十株产碱性β聚糖酶类的细菌，经摇瓶反复筛选后，得到一株碱性β聚糖酶产量较高的耐碱性细菌．经初步鉴定，属短小芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｐｕｍｉｌｕｓ）．其纤维素酶作用的最适ｐＨ为７．６，最适θ为６０℃，木聚糖酶的作用最适ｐＨ为９．０，最适θ为５５℃．该菌的最适生长ｐＨ为８．０，最适产酶θ为２８～３２℃．木聚糖与山梨糖分别是木聚糖酶和纤维素酶的良好诱导物．以麸皮为碳源，产酶的最适浓度为５％．添加尿素和（ＮＨ４）２ＳＯ４为氮源可提高纤维素酶酶活２倍，木聚糖酶酶活１倍．发酵周期为６０ｈ，纤维素酶酶活最高可达１．２１ＩＵｍＬ－１，木聚糖酶酶活可达４３ＩＵｍＬ－１．

小肠结肠炎耶尔森氏菌滚环扩增检测方法的建立

根据滚环扩增的原理设计引物、锁式探针以及反应体系,建立和优化了滚环扩增(Rolling Cycle Amplification,RCA)检测体系,构建可快速检测食品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌的RCA检测方法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立的RCA检测方法,具有很好的特异性,灵敏度为1.7×102CFU/mL,高于普通PCR方法。小肠结肠炎耶尔森氏菌RCA检测方法具有较高的灵敏度和特异性,适合在细菌快速检测方面应用。

两种南极冰藻的形态和超微结构观察

对从南极水样中分离到的两种单细胞绿藻塔胞藻 (Pyramimonassp .)和衣藻(Chlamydomonassp .) ,用光镜和电镜对其形态和超微结构进行观察。观察结果表明 ,塔胞藻为倒卵圆形 ,大小为 4～ 5 μm× 5～ 8μm ;具 4根等长的鞭毛 ,运动速度快 ,二分分裂 ;无细胞壁结构 ,细胞膜外为结构独特的两层鳞片结构 ;细胞内储存脂肪颗粒 ,叶绿体呈杯状。衣藻为圆球形 ,大小在 8～ 10 μm左右 ;2根鞭毛 ,运动缓慢或不运动 ,二分分裂 ;细胞壁外无鳞片 ,且细胞壁和细胞膜存在质壁分离现象 ;细胞内储存大量的淀粉颗粒 ,叶绿体形状不规则。两种冰藻的鞭毛结构均为典型的“9+ 2”结构 ,但两者的鞭毛在细胞内的着生方式不同。

乳酸链球菌L318的培养及其对海洋弧菌的抑制作用

以海洋弧菌作为检测菌 ,采用平板抑菌圈检测法 ,对发酵上清液的抑菌性质和在不同培养条件下 ,包括碳源、氮源、初始培养基pH值、温度、接种量和装液量等 ,乳酸链球菌L318的生长和对海洋弧菌的抑制作用进行研究。结果表明 ,含有乳链菌肽的发酵上清液经稀释2～5倍后 ,具有较强的抑菌活性 ;乳链菌肽在酸性条件下比在碱性条件下稳定。采用蔗糖或葡萄糖为碳源 ,酵母膏、蛋白胨和牛肉膏为复合氮源 ,能够获得菌体的最佳生长和最佳的抑菌活性 ,最适的对海洋弧菌的抑制条件为温度30℃ ,接种量2 %～4% ,装液量100ml。

食品检验机构检验人员胜任能力建设的探讨

胜任能力研究是目前人力资源管理与实践领域的一个热点问题。食品检验机构检验人员的素质与能力,体现了食品检验机构的管理水平和技术实力。胜任能力研究的理论模型以及国内外胜任模型建设的实践,为食品检验机构的管理以及检验人员能力素质提升提供了有益借鉴,分析我国食品检验机构检验人员的职位与管理、考试录用、持续培训、考核与绩效等方面制度的建设,有利于保证检验机构检验人员胜任能力的建设落到实处。

婴幼儿食品微生物及微生物毒素调查分析

对婴幼儿食品(配方乳粉、补充谷物、饼干和罐头)分别进行微生物污染以及微生物毒素调查。调查结果表明:357份婴幼儿食品均未检出沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌;11份婴幼儿配方乳粉、1份补充谷物和1份饼干食品中检出坂崎肠杆菌,检出率分别为4.2%,2.4%和2.5%;检出1份补充谷物菌落总数超过国家标准最高安全限量值。13份婴幼儿配方乳粉和3份补充谷物检出肠杆菌科细菌,检出率分别为32.5%和7.1%;14份(婴幼儿)配方乳粉、2份婴幼儿罐头检出蜡样芽孢杆菌,检出率分别为35%和20%;1份婴幼儿配方乳粉检出黄曲霉毒素M1超标。婴幼儿食品存在微生物及其微生物毒素污染的风险,应加强对婴幼儿食品的致病微生物及其毒素的监测和监管。

UV-B辐射对南极冰藻中抗辐射物质的诱导作用

在人工UV B辐照下培养 5种南极冰藻 ,其中包括三种硅藻 :H1硅藻 (diatomH1) ,H2硅藻 (diatomH2 ) ,H 3硅藻 (diatomH3) ;两种绿藻 :L1绿藻 (Pyramimonassp .) ,L4绿藻 (Chlorophyceae)。研究了UV B辐射对南极冰藻中抗辐射物质的诱导作用 ,这些物质被认为具有抵抗UV B辐射损害而提供保护的作用。结果表明 ,(1)UV B辐射诱导产生大量的胞内多糖和胞外多糖物质 ,胞外多糖附着藻体 ;(2 )UV B辐射诱导产生新的水溶性色素类物质 ;(3)UV B辐射诱导产生新的脂溶性色素类物质。不同种类冰藻产生的新色素的最大吸收峰不同。这些结果使我们初步认识了南极冰藻对南极强辐射环境的适应机理 ,并为进一步利用UV B辐射培养南极冰藻产生抗辐射、抗肿瘤、清除自由基等新型活性物质提供依据。

南极冰藻生化组成及其与低温适应性关系的研究

对 4种南极冰藻 (2种单细胞绿藻—— Pyramimonas sp.和绿藻 L 4 ,以及 2种硅藻——硅藻 H1和 H2 )的蛋白质、脂肪、糖、无机元素含量和组成 ,灰分含量 ,以及氨基酸和脂肪酸的组成等的基本生化组成进行测定。结果表明 ,4种冰藻的蛋白质含量均高于常温藻 ,蛋白质含量以绿藻 L4的含量最高 ,为 4 5 .18% ;Pyramimonas sp.的蛋白质含量最低为 2 7.70 %。4种冰藻的脂肪含量均高于常温藻 ,为 14 .0 2 %～ 19.89% ;总糖含量为 4 .7%～ 16 .3% ,与常温藻含量接近。Mg的含量在冰藻和常温藻的无机元素中都为最高 ,为 136 0 0～ 12 4 0 0 0 mg/ kg,但 4种冰藻的含量均低于 2种常温藻 ;4种冰藻的灰分含量均低于常温藻 ,表明冰藻含有更高的有机成分。冰藻的氨基酸含量与常温藻的含量没有明显不同 ,但绿藻 L 4含有较高含量的羟脯氨酸 ,占总氨基酸含量的 2 .4 8%。 4种冰藻的脂肪酸组成 ,主要以多不饱和脂肪酸为主。冰藻的基本生化组成在一定程度上反映了冰藻对生存环境的适应性 。

4种南极冰藻的生化组成对UV-B辐射增强的响应

实验室人工模拟南极UV -B辐射环境 ,对南极冰藻的生化组成变化进行了测定和分析 ,结果表明 ,UV -B辐射增强 (70μW/cm2)后 ,4种南极冰藻的总蛋白含量显著减少 ,其中脯氨酸、羟脯氨酸等6种氨基酸增加 ,谷氨酸、缬氨酸等减少 ;总脂含量明显增加 ,绿藻增加30%以上 ,硅藻增加超过15%;饱和脂肪酸含量降低 ,不饱和脂肪酸含量增加 ,并且产生了一些新的不饱和脂肪酸 ;Mg、Na和Al元素的含量显著降低 ,而Fe、Ca、Zn、Mn等含量却明显增加。总体来说 ,4种南极冰藻的灰分含量显著下降 ,有机成分明显增加。表明了南极冰藻对UV -B增强的积极响应 ,能调整自身对强辐射环境的适应性 。

环境因子对2种南极绿藻脂肪含量和脂肪酸组成的影响

通过气相色谱方法对南极冰藻的脂肪酸进行了分析,发现环境因素对2种绿藻总脂含量有一定的影响 :(1)温度对Pyramidomonassp.总脂含量影响不大 ,一般为8.3 %～8.9 % ,ChlorophyceaeL -4在2℃时的总脂含量最高为10.33 % ;(2)光强显著地影响这2种绿藻脂肪在细胞内的积累。随着光强由限制生长的39lx增加到3900lx ,2种绿藻的脂肪酸含量降低 ;(3)盐度的提高有利于2种绿藻脂肪的积累 ;(4)营养盐的限制也利于2种绿藻脂肪的积累。在氮源缺乏条件下 ,Pyramidomonassp.和ChlorophyceaeL -4细胞内脂肪大量积累 ,含量分别是以NH4Cl为氮源的2.2和3.2倍。环境因素对2种绿藻脂肪酸组成和含量的影响不同 ,其脂肪含量的改变反映了南极冰藻生长的改变。环境因子能够影响这2种绿藻的脂肪含量 ,同样也影响到它们的生长。在适合南极冰藻生长的条件下 ,脂肪酸积累降低 ;反之 ,在南极冰藻生长受到限制的条件下 ,脂肪合成增加。这表明2种绿藻的脂肪含量随生存环境的变化而变化。环境因子同样影响到2种绿藻的脂肪酸组成 ,尤其是不饱和脂肪酸的组成和含量 ,但组成和其生长不存在相关性。环境因子 (温度、光强、盐度和营养盐 )对2种绿藻脂肪酸的测定结果表明 ,在2种绿藻中 ,多不饱和脂肪酸的含量高于单不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸。

脯氨酸和可溶性糖在南极冰藻低温适应机制中的作用

对低温胁迫下两种南极冰藻胞内的脯氨酸和可溶性糖含量的变化进行分析研究,探讨两种冰藻对低温的适应性机制。测定不同培养温度和培养时间下两种南极绿藻细胞中的脯氨酸和可溶性糖含量,获得其在低温下随温度和胁迫时间变化的趋势,分析其产生变化的原因。结果显示,温度越低,塔胞藻Pyramidomonas sp.L-1胞内的脯氨酸和可溶性糖含量增加越明显。-5℃,培养48 h后,脯氨酸含量是初始值的6.5倍,可溶性糖含量增加60%。衣藻Chlamydomonas sp.L-4胞内脯氨酸的含量同样为温度越低,胞内脯氨酸的含量越高;但随时间变化趋势与塔胞藻Pyramidomonas sp.L-1相反,含量随温度作用时间的增加出现减少的趋势。-5℃,48 h后脯氨酸含量基本维持不变,可溶性糖含量增幅达90%。结果表明,脯氨酸和可溶性糖在南极冰藻的低温适应性机制中具有重要的作用,但在不同藻种中的作用机制不同。

芽孢杆菌A-30碱性木聚糖酶用于麦草浆酶法改性的研究

从碱性土壤中分离得到一株耐碱性β-1，4-聚糖酶高产细菌A-30，经初步鉴定属短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）。采用麸皮为主要碳源，尿素为主要氮源，在pH值8．0、温度32℃，发酵至一定时间，最高木聚糖酶活可达400IU／mL，纤维紊酶活可达0．60IU／mL以上。探讨了用其所产木聚糖酶处理漂白麦草浆以改善其性能的可能性。结果表明，A-30粗酶液可以改善草浆的滤水性、强度和脆性，最适宜的酶用量为2—5IU／g浆。

细菌活的非可培养状态的分子生物学检测技术研究进展

许多细菌在不良环境下能进入活的非可培养状态(viable but nonculturable state,VBNC)。细菌培养技术常常造成VBNC状态的细菌漏检,应用分子生物学检测技术可以提高VBNC细胞的阳性检出率。针对VBNC细胞的分子生物学检测技术,基于细菌特异性DNA分子、mRNA分子是目前常用的检测方法,而利用报告基因(如绿色荧光蛋白基因)检测VBNC细胞是一种有效的方法。最近利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)或者叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)联合PCR技术选择性抑制细菌死细胞扩增,该方法结合了EMA(PMA)选择渗透性和PCR特异性,作为一种区分细胞死活的方法,可以有效检测细菌VBNC细胞。

数字PCR定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌方法的研究

目的建立微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的分析方法。方法选择基因hly A为靶序列,设计PCR扩增引物和Taq Man探针,优化反应条件和反应体系,通过细菌分离和dd PCR方法对靶标基因的检测特异性、灵敏度和重复性进行实验,并对定量结果进行分析。结果 ddPCR反应中的最佳探针浓度为5 pmol/μL,特异性好,检出限为(3.6±0.1)copies/20μL,重复性实验良好,标准偏差为0.067%。ddPCR的拷贝数(copy number)与细菌密度(colony forming units,CFU/mL)形成了较好的线性关系。结论本研究建立dd PCR的拷贝数和菌液密度或菌落数的线性关系,可以为单核细胞增生李斯特氏菌的快速定量检测提供参考。

PMA结合ddPCR检测食品中金黄色葡萄球菌的研究

研究了将叠氮溴化丙锭(PMA)与微滴式数字PCR(ddPCR)技术相结合,用于金黄色葡萄球菌活菌的检测。结果表明,强烈光照15 min,可以使PMA与死菌DNA共价交联,同时钝化游离的PMA;可以有效抑制金黄色葡萄球菌死菌DNAPCR扩增的PMA终浓度为2.0μg/m L;不抑制活菌DNA扩增的PMA最高浓度是5.0μg/m L。在不同死、活菌比例下,PMA-ddPCR可以定量检测活菌,避免了死菌DNA的干扰,本方法的检出限为10 copy/20μL。利用PMA-ddPCR检测人工污染鸡肉样品,最低可检出102cfu/m L的金黄色葡萄球菌。表明PMA-ddPCR方法的灵敏度高。

单核细胞增生李斯特氏菌依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法的建立

为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dNTPs以及引物等的浓度进行优化,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明,所建立起的检测法最低检测限为7.8×103 cfu/mL,灵敏度与普通PCR方法相当。Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,具有良好的应用前景。

应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌

以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。

食品中A型肉毒梭菌PCR-DHPLC检测方法的建立

目的:建立食品中A型肉毒梭菌的快速检测方法。方法:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,以A型肉毒梭菌的A型肉毒神经毒素基因作为靶基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以非A型肉毒梭菌,产气荚膜梭菌等23株参考菌株做特异性实验;A型肉毒梭菌DNA稀释成不同梯度,做灵敏度实验。结果:与传统的检测方法相比,该方法具有很好的特异性,方法灵敏度较高,最低检出限可达到为111ng/tube。结论:该方法可以快速、准确检测A型肉毒梭菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。

南极冰藻Chlorophyceae L-4抗氧化酶活性对UV-B辐射增强的响应

为了了解在UV B辐射增强的胁迫下,南极冰藻ChlorophyceaeL 4细胞内保护酶系统对活性氧自由基的清除作用,对不同辐射强度下ChlorophyceaeL 4细胞中丙二醛含量的变化、自由基的产生速率和相应的保护酶系统的变化进行了测定。结果表明,在UV B辐射增强的初期(1～3d),ChlorophyceaeL 4中丙二醛含量的迅速提高,但随后很快降低,在低强度UV B(35μW·cm-2)辐照下保护酶活性能够恢复到基本水平。在UV B辐射增强的胁迫下,ChlorophyceaeL 4中的超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶的活性明显比对照组的高,而且在高强度(70μW·cm-2)的辐照下,酶活性更高。ChlorophyceaeL 4中的抗坏血酸过氧化物酶的活性在UV B辐射增强的胁迫下略有升高或变化不大。本研究结果表明,保护酶系统在南极冰藻适应南极强辐射环境中起着非常重要的作用。