AAK1相互作用蛋白的筛选及其调控细胞内整体翻译水平的研究

目的·探究衔接子相关蛋白激酶1(adaptor-associated protein kinase 1,AAK1)新的相互作用蛋白,以及除网格蛋白介导的内吞作用外AAK1介导的生物学功能。方法·通过在HEK-293T细胞中分别外源性转染带有标签的AAK1载体与空白对照载体,利用标签特异性的琼脂糖凝胶进行免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CoIP),并联合质谱分析的方法获得潜在与AAK1相互作用的蛋白;通过CoIP初步验证质谱结果;通过荧光共聚焦成像观察AAK1与其潜在结合蛋白在细胞内的空间定位;通过体外纯化重组蛋白,利用谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白沉降实验(glutathione-S-transferase pulldown,GST Pulldown)进一步明确蛋白间是否为直接的相互作用;通过嘌呤霉素结合实验观察AAK1对于细胞内整体翻译水平的调控作用。结果·质谱结果提示AAK1可能与以脆性X相关蛋白1(fragile X mental retardation syndrome-related protein 1,FXR1)、FXR2、脆性X智力低下蛋白(fragile X mental retardation protein 1,FMRP)三者为核心的一系列蛋白形成复合体。外源性转染AAK1-3xFLAG及FMRP-MYC质粒,利用抗FLAG琼脂糖凝胶富集AAK1-3xFLAG后,可以检测到FMRPMYC的表达;利用内源性抗体进行CoIP,发现富集AAK1可以检测到FMRP的表达。荧光共聚焦成像显示EGFP-AAK1与mCherry-FMRP在细胞质中存在部分空间共定位。GST Pulldown显示FMRP可以直接沉淀HIS6-AAK1重组蛋白。嘌呤霉素结合实验显示相同时间内嘌呤霉素标记的细胞内新合成肽段数量与AAK1蛋白表达量呈正相关。结论·AAK1与FMRP在细胞质内存在直接的相互作用,且AAK1可以提高细胞内的翻译水平。

LncRNA的筛选及其保守性

长链非编码RNA(LncRNA)是目前细胞生物学研究的热点和难点问题。如何准确鉴定LncRNA是进行相关研究首先要解决的问题。由于了解不足,LncRNA尚缺乏准确的筛选策略和完备的分类体系,因此导致不同实验室建立的LncRNA数据库也各有差别。从功能研究的角度上来说,虽然LncRNA的保守性远不如编码RNA,但通过寻找人和其他生物中相对保守的LncRNA并进一步推测其功能仍具有重要的现实意义,近年来已借此发现了一些在功能上保守的LncRNA。随着方法和仪器的不断创新,相信关于LncRNA的筛选、分类、功能和保守性的研究会得以深入。

长链非编码RNA的保守性及其在非模式生物长链非编码RNA筛选中的应用

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)的保守性表现在一级结构、空间结构、转录位置、剪接模式及组织分布等方面,是目前lncRNA研究的热点和难点。不断深入的lncRNA保守性研究可应用于参考基因组相对匮乏的非模式生物lncRNA的筛选过程,并且极大地提升了非模式生物lncRNA数据库建立的完整性和准确性。借助针对开放阅读框长度、密码子分布与出现频率、功能性结构域等保守信息开发而来的lncRNA筛选工具或流程如CPC、PLAR(pipeline for lncRNA annotation from RNA-seq data)等,已成为目前非模式生物lncRNA的筛选及其参考数据库构建的新策略。本文就lncRNA的保守性及其在非模式生物lncRNA筛选中的应用作一综述,并简要介绍了一种运用其保守性的筛选方法——PLAR。

水母皮炎的中西医治疗

近十几年来,随着全球气候变暖和海洋污染日益加重等因素造成水母暴发性增长,导致沿海地区水母蛰伤的发病率逐年增加,已成为威胁人类健康和生命安全的重要医学问题[1]。水母属腔肠动物门,种类繁多,其口周、口腕以及触手等表面密布刺丝囊。