大鼠肠道DCs及相关细胞因子在冷-束缚应激诱导肠功能紊乱后的表达

目的:了解肠道表面树突状细胞(DCs)及炎症细胞因子VIP、IL-1β在肠功能紊乱时的表达,以及外周血中VIP、IL-1β的表达,探讨大鼠肠道免疫耐受的变化.方法:将60只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,建立冷-束缚应激动物模型.将大鼠处死后,取大鼠回肠末端、远端结肠各长约2cm的肠段,免疫组织化学法检测肠道表面CD11c、VIP、IL-1β的表达,留取腹主动脉血清用ELISA方法检测外周血清中VIP、IL-1β的表达.结果:在回肠末端,实验组大鼠CD11c的表达较对照组无显著差异性;实验组大鼠VIP、IL-1β表达较对照组均明显增加,差异有显著性(177.67±35.44vs92.64±22.19,359.56±45.48vs216.46±41.56,均P<0.05).并且VIP的表达与IL-1β呈正相关(r=0.78,P<0.01).在远端结肠,实验组大鼠CD11c、IL-1β的表达较对照组均无显著差异性;而实验组大鼠远端结肠VIP的表达较对照组明显增高,差异有显著性(380.15±33.24vs254.04±40.53,P<0.05);在外周血中,与对照组相比较,VIP、IL-1β表达均增高,差异有显著性(149.03ng/L±56.82ng/Lvs104.24ng/L±39.03ng/L,8.82ng/L±3.91ng/Lvs5.49ng/L±3.79ng/L,P<0.05).结论:冷-束缚应激后肠功能紊乱大鼠中,末端回肠和远端结肠黏膜存在轻度的炎症反应,DCs尚不能解释肠功能紊乱后肠道存在轻度炎症反应的发病机制.

水通道蛋白8与肠易激综合征

水通道蛋白8是近年来发现的一种新型的特异性跨膜转运水的蛋白质,在消化道有广泛的表达并且与某些消化系统疾病密切相关,最近发现水通道蛋白8表达与IBS的便秘和腹泻症状有关,为进一步了解IBS的发病机制,此文就水通道蛋白8与IBS的关系作一综述。

冷-束缚应激诱导肠功能紊乱大鼠肠黏膜屏障变化的实验研究

目的建立冷-束缚应激(CRS)诱导肠功能紊乱大鼠模型,探讨肠黏膜屏障变化在肠功能紊乱发病机制中的可能作用。方法选取2个月龄Wistar大鼠40只,随机分成模型组和正常对照组。模型组采用寒冷加束缚为应激源实施干预,对照组不予任何干预。实验期间观察两组大鼠粪便性状,应用Bristol分型进行评分,通过直结肠扩张(CRD)实验测定内脏敏感性,取大鼠远端结肠及回肠黏膜行病理组织学检查。采用气相色谱法(GC)测定两组大鼠5 h尿液中乳果糖(L)与甘露醇(M)排泄率(L/M)比值,反映肠黏膜屏障的变化情况。结果模型组粪便多为软的团块状或泥浆样,对照组多为柔软的香肠状或团块状,两组大鼠Bristol分型评分比较有显著性差异(P<0.05);模型组初始感觉阈值、疼痛感觉阈值、最大耐受阈值分别较对照组显著降低(P<0.05);两组肠黏膜病理检查均未见明显异常;模型组大鼠5 h尿液中L与M排泄率比值(L/M)较对照组显著增大(P<0.05)。结论肠功能紊乱大鼠肠黏膜通透性增大,肠黏膜屏障受损可能与肠功能紊乱发病机制有关。

急性应激诱导肠功能紊乱后大鼠肠道协同刺激分子的表达

目的应用冷-束缚应激方法 ,诱导建立大鼠肠功能紊乱动物模型,了解与应激有关的肠功能紊乱时,肠道协同刺激分子CD80、CD86以及炎症因子VIP、IL-1β的表达,探讨大鼠肠道免疫耐受的变化。方法将60只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,建立冷-束缚应激动物模型。应用Bristol分型进行评分、于应激第6天利用直结肠扩张实验测定内脏敏感性,第7天行肠道黏膜病理检查。免疫组化法检测肠道CD80、CD86以及VIP、IL-1β表达。结果实验组大鼠在应激后第6天大便性状发生改变,肠道感觉阈值比对照组明显下降(P<0.05),组织病理学检查无异常改变。免疫组化显示:在回肠末端,与正常对照组比较,实验组大鼠CD80和CD86的表达差异无统计学意义(P>0.05);实验组大鼠VIP、IL-1β表达均较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),并且VIP的表达与IL-1β呈正相关(r=0.78,P<0.01)。在远端结肠,实验组大鼠CD80、CD86以及VIP的表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);而IL-1β表达较对照组差异无统计学意义(P>0.05);并且CD80的表达与VIP呈正相关性(r=0.70,P<0.01),CD86的表达与VIP的表达呈正相关性(r=0.34,P<0.05)。结论冷-束缚应激后肠功能紊乱大鼠中,末端回肠和远端结肠黏膜存在轻度的炎症反应,CD80和CD86分子在远端结肠的免疫调节过程中发挥了重要作用。

功能性便秘肛门直肠动力学和敏感性研究

目的:探讨功能性便秘(FC)患者肛门直肠动力学和直肠感觉特征。方法:采用肛门直肠测压方法检测44例FC患者的肛门直肠静息压、缩榨压、直肠初始感觉阈值、排便感觉阈值、窘迫感觉阈值和最大耐受容量指标,并与14例健康人做对照。结果:FC患者肛门静息压、最大缩榨压均较对照组明显降低,差异有显著性(P<0.05);但FC患者的初始感觉阈值、排便阈值、窘迫阈值和最大耐受容量均高于对照组(P<0.05)。模拟排便时,FC组31.82%的患者在直肠收缩时伴有肛管括约肌的矛盾收缩。结论:功能性便秘患者存在肛门直肠动力和感觉异常,可能与FC发病相关。

IGHG1对急性髓系白血病THP-1细胞增殖、凋亡和侵袭的机制研究

目的 探讨免疫球蛋白γ-1重链恒定区(immunoglobulin γ-1 heavy chain constant region,IGHG1)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)THP-1细胞中的表达以及调控转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad通路对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 以9例AML患儿的骨髓标本、8例骨折患儿的骨髓标本、人骨髓基质细胞HS-5及人AML细胞THP-1、HL60为研究对象,Western blot检测IGHG1蛋白表达;将THP-1细胞分组为空白(细胞未经任何处理)、si-NC、si-IGHG1-1、si-IGHG1-2、si-IGHG1-3、TGF-β、si-IGHG1-1+TGF-β、si-IGHG1-1+TGF-β+LY364947(TGF-β/Smad通路抑制剂)组。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术和Transwell实验分别测定细胞凋亡和侵袭;Western blot评估细胞中IGHG1、TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果 与骨折患儿骨髓比较,AML患儿骨髓中IGHG1蛋白((0.24±0.03)vs(0.87±0.12))表达水平显著升高(P<0.05);与HS-5细胞比较,THP-1、HL60细胞中IGHG1蛋白((0.89±0.14)(0.75±0.08)vs(0.21±0.02))表达升高(P<0.05);与空白组比较,si-IGHG1-1组THP-1细胞OD_(450)值(24、48、72 h)、侵袭细胞数目、TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率升高,TGF-β组对应指标呈相反变化(P<0.05);TGF-β逆转了沉默IGHG1对THP-1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响;与si-IGHG1-1+TGF-β组比较,si-IGHG1-1+TGF-β+LY364947组TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白、OD_(450)值(24、48、72 h)及侵袭细胞数目显著降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论 IGHG1在AML细胞中高表达,沉默IGHG1可抑制AML细胞增殖及侵袭,并促进AML细胞凋亡,该机制可能与抑制TGF-β/Smad通路有关。

miR-22靶向FMNL2对儿童急性髓系白血病细胞迁移和凋亡的影响

目的:探讨miR-22靶向同源形成素样蛋白2(FMNL2)对儿童急性髓系白血病(AML)细胞迁移和凋亡的影响。方法:以11例AML患儿、10例免疫性血小板减少患儿的外周血标本以及人AML细胞系TF-1a、HL-60、THP-1和人骨髓基质细胞HS-5为研究对象,UniCel DxH 800型全自动血液分析仪检测外周血标本的血小板数、血红蛋白、白细胞数,RT-q PCR检测外周血标本和AML细胞中miR-22表达;利用LipofectamineTM 2000试剂盒对HL-60细胞进行转染,实验分为空白(细胞未转染)、miR-NC、miR-22 mimics、si-NC、si-FMNL2、miR-22 mimics+OE-NC和miR-22 mimics+OE-FMNL2共7组,RT-q PCR检测各组细胞miR-22表达;Transwell检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-22与FMNL2靶向关系;Western blot检测FMNL2蛋白表达情况。结果:与对照组比较,AML患儿外周血中白细胞数显著升高(P<0.001),血红蛋白浓度及血小板数显著降低(P<0.001);AML患儿外周血中miR-22的表达水平显著低于对照组(P<0.001);与HS-5细胞比较,TF-1a、HL-60、THP-1细胞中miR-22的表达水平均显著降低(P<0.05),且HL-60细胞中的miR-22的表达水平最低,因此,选择HL-60细胞进行后续实验;上调miR-22或沉默FMNL2均可降低迁移细胞数目,提高细胞凋亡率(P<0.05);miR-22靶向负调控FMNL2的表达;FMNL2过表达逆转了上调miR-22对HL-60细胞迁移和凋亡的影响。结论:miR-22通过靶向下调FMNL2表达,抑制HL-60细胞迁移、促进细胞凋亡。

手足口病患儿血清生长激素释放肽变化特点及意义

目的探讨手足口病患儿血清生长激素释放肽变化特点及意义。方法收集2020年3月至2021年10月本院收治的手足口病患儿65例为手足口病组。分为普通组(出疹期、恢复期)22例,重症组(神经系统受累期)20例,危重症组(心肺功能衰竭前期、心肺功能衰竭期)23例;另收集健康儿童30例为健康对照组。采集各组空腹外周静脉血3 ml,分离血清,检测生长激素释放肽、内毒素、D-乳酸、降钙素原水平;同时进行胃肠功能障碍评分。结果手足口病组患儿生长激素释放肽水平明显低于健康对照组,胃肠功能障碍评分以及内毒素、D-乳酸、降钙素原水平明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。生长激素释放肽、胃肠功能障碍评分、内毒素、D-乳酸、降钙素原在不同病变严重程度患儿间比较差异均有统计学意义(均P<0.01);其中危重症型组生长激素释放肽水平明显低于重症组和普通组,胃肠功能障碍评分、内毒素、D-乳酸、降钙素原水平明显高于重症组和普通组;重症组生长激素释放肽水平明显低于普通组,胃肠功能障碍评分、内毒素、D-乳酸、降钙素原水平明显高于普通组。Pearson相关性分析,手足口病患者血清生长激素释放肽与胃肠功能障碍评分、内毒素、D-乳酸、降钙素原均呈负相关(均P<0.01)。ROC曲线分析显示,生长激素释放肽、胃肠功能障碍评分、内毒素、D-乳酸、降钙素原单独和联合检测对儿童手足口病均具有较高的诊断价值(均P<0.05);其中生长激素释放肽、胃肠功能障碍评分、内毒素、D-乳酸、降钙素原联合检测的诊断价值最高(AUC=0.916),灵敏度明显高于各指标单独检测。结论手足口病患儿血清生长激素释放肽与病情严重程度和胃肠功能密切相关,可用于病情诊断和预后评估。