氧化应激下视网膜色素上皮细胞外泌体对视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子A及丝氨酸／苏氨酸激酶表达的影响

目的 观察氧化应激下视网膜色素上皮细胞（RPE）外泌体对RPE细胞血管内皮生长因子（VEGF）-A 及丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）表达的影响。 方法 培养人RPE（ARPE-19）细胞，细胞培养基中加入浓度为2.5 μmol/L鱼藤酮诱导ARPE-19细胞发生氧化应激损伤。收集上清液，采取梯度超速离心法分离纯化外泌体。应用透射电子显微镜观察外泌体形态；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 ARPE-19 细胞外泌体表面特异性标志蛋白CD63的表达。将氧化应激下ARPE-19细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为实验组，等量正常RPE细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为对照组。采用噻唑蓝比色法检测ARPE-19细胞的细胞活力，以酶联免疫检测仪测量波长570 nm处各孔的吸光度[A，旧称光密度（OD）]值表示；免疫荧光染色法和Western blot检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt 蛋白表达；实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt mRNA表达。 结果 透射电子显微镜观察发现，ARPE-19细胞外泌体呈圆形或椭圆形膜性小囊泡，直径50～150 nm。Western blot检测结果显示，ARPE-19细胞外泌体表面表达特异性标志蛋白CD63。噻唑蓝比色法结果显示，实验组、对照组ARPE-19细胞在波长570 nm处的A 值分别为0.582±0.015、0.787±0.032。实验组ARPE-19细胞在波长570 nm处的A 值较对照组明显降低，差异有统计学意义（t=20.886，P＜0.05）。免疫荧光染色法检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A蛋白表达明显增强，Akt蛋白表达明显减弱。Western blot 检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A蛋白相对表达量明显升高，Akt蛋白相对表达量明显降低，差异均有统计学意义（t=3.822、6.527，P＜0.05）。RT-PCR 检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A mRNA相对表达量明显升高，Akt mRNA 相对表达量明显降低，差异均有统计学意义（t=8.805、？7.823，P＜0.05）。 结论 氧化应激下ARPE-19细胞外泌体可抑制正常AREP-19细胞增生，上调VEGF-A表达，下调 Akt 表达。

微创玻璃体切割术联合硅油填充治疗增殖性糖尿病视网膜病变的临床疗效观察

目的评价微创玻璃体切割手术联合硅油填充对严重增殖性糖尿病视网膜病变的疗效并分析影响疗效的相关因素。方法回顾性系列病例研究。对2012年6月至2015年1月在天津市眼科医院临床确诊为V期与VI期增殖性糖尿病视网膜病变的70例患者91只眼纳入研究。患者均行23G或25G玻璃体切除、膜剥除、曲安奈德（TA）使用、眼内激光及硅油填充手术，约10周后行硅油取出手术，若患者合并白内障则同时行白内障超声乳化＋人T晶状体植入手术。初次手术后平均随访时间（16．23±4．15）月。记录玻璃体手术前后最佳矫正视力（BCVA）、一次性手术视网膜复位率、视网膜脱离再发率及术后并发症等。结果玻璃体手术后1d，所有患眼视网膜均复位，手术后10周，视网膜在位89只眼，占97．8％；牵拉性视网膜脱离2只眼，占2．2％，再次行剥膜＋硅油填充术，随访至今硅油未取出。末次随访时平均视力为（0．93±0．57）LogMAR，与玻璃体切割手术前平均视力（1．84±0．58）LogMAR比较，差异有统计学意义（Z=-7．68，P〈O．05）。结论微创玻璃体切割手术联合硅油填充治疗严重增殖性糖尿病视网膜病变安全有效。

神经干细胞玻璃体腔移植对糖尿病大鼠视网膜功能及结构的影响

目的 观察玻璃体腔注射人脐带间充质干细胞（hUCMSC）体外诱导的神经干细胞（NSC）对糖尿病大鼠视网膜功能及结构的影响。方法 健康雄性Sprague-Dawley大鼠40只，随机分为正常对照组（A组）、糖尿病组，分别为9、31只。糖尿病组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型。成模10周时，将建模成功的27只大鼠随机分为糖尿病对照组（B组）、玻璃体腔注射磷酸盐缓冲液组（C组）、玻璃体腔注射NSC组（D组），各组均为9只大鼠。A、B组不进行干预。干预后2、4、6周A^D组大鼠均行闪光视网膜电图检查，暗适应条件下记录暗适应视杆细胞反应（Rod-R）b波潜伏期和振幅以及最大混合反应（Max-R）a、b波潜伏期和振幅、振荡电位（OPs）总振幅。苏木精-伊红染色观察各组大鼠视网膜形态结构变化。结果 干预后2、4周，A～D组大鼠暗适应Rod-R b波振幅、Max-R a、b波潜伏期及振幅、OPs总振幅比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；D组暗适应Rod-R b波振幅、Max-R b波振幅、OPs总振幅较B、C组提高，差异均有统计学意义（P＜0.05）；Max-R b波潜伏期较B、C组下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。干预后6周，D组暗适应Rod-R b波振幅、Max-R a、b波振幅、OPs总振幅较B、C组提高，差异有统计学意义（P＜0.05）；D组Rod-R、Max-R b波潜伏期较C组下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。建模后10周，与A组比较，糖尿病组大鼠视网膜各层细胞排列紊乱。干预后2周，与A组比较，B、C组视网膜各层细胞排列紊乱，内界膜连续性破坏，局部增厚；4周，D组视网膜各层细胞排列紊乱，视网膜神经节细胞数量较B、C组增多，血管扩张不明显。结论 玻璃体腔注射hUCMSC体外诱导的NSC对糖尿病大鼠视网膜功能及结构均有改善作用。

巩膜扣带术治疗青年人孔源性视网膜脱离的疗效分析

目的观察巩膜扣带术治疗青年人孔源性视网膜脱离的疗效，分析术后视力的影响因素。方法回顾性系列病例研究。对2011年4月至2015年5月在天津市眼科医院确诊为孔源性视网膜脱离并行巩膜扣带术治疗的91例患者95只眼纳入研究，术中均在双目间接眼底镜直视下进行裂孔定位、适量冷冻，术后随访，观察视网膜复位情况，并在术后3月时记录患者最佳矫正视力。亚组分析青年视网膜脱离患者巩膜扣带术后影响视力的因素，包括年龄、病程、术前最佳矫正视力、黄斑区情况等。结果一次性手术复位率100％，87．3％（83／95只眼）的患眼术后视力提高及稳定不变，术前最佳矫正视力、黄斑状态、病程对术后视力影响差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在选定的病例中，巩膜扣带术可以有效治疗青年人孔源性视网膜脱离。术前最佳矫正视力、病程、黄斑状态是巩膜扣带术后影响视力的主要因素，术前最佳矫正视力对其影响最为显著。

精氨酸酶抑制剂对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞的保护作用

目的 观察精氨酸酶（Arg）抑制剂N羟基-正-Ｌ精氨酸（nor-NOHA）对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A细胞）的保护作用。 方法 体外培养RF/6A细胞，并将其分为正常对照组（A组）、高糖对照组（B组）、高糖＋nor-NOHA处理组（C组）、高糖＋二甲基亚砜（DMSO）对照组（D组）。A组细胞以5.5 mmol/L葡萄糖继续培养；B～D组以25.0 mmol/L葡萄糖继续培养，C、D组分别加入125 mg/L的nor-NOHA及1%DMSO。采用噻唑蓝比色法、Transwell小室法和体外成管实验分别检测各组RF/6A细胞增生、迁移和管腔形成能力。采用荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组RF/6A细胞中ArgⅠ、内皮型一氧化氮（NO）合酶（eNOS）、诱导型NO合酶（iNOS）的mRNA相对表达量。采用酶链免疫吸附测定试验（ELISA）检测各组RF/6A细胞培养上清液中NO和白细胞介素（IL）-1b的分泌量。 结果 B组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较A组明显降低，差异有统计学意义（t=2.367、5.633、7.045，P＜0.05）；C组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较B组提高，差异有统计学意义（t=5.260、6.952、8.875，P＜0.05）。RT-PCR检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量升高（t=6.836、3.342），C组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量降低（t=4.904、7.192），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量降低（t=4.165），C组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量升高（t=6.594），差异均有统计学意义（P＜0.05）。ELISA检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量减少（t=4.925），C组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量增多（t=5.368），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量增多（t=5.032），C组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量减少（t=7.792），差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 nor-NOHA对体外高糖培养的RF/6A细胞有保护作用，可提高其增生、迁移及管腔形成能力；其机制可能是通过平衡Arg/NOS的表达从而抑制氧化应激反应。

间充质干细胞调节白细胞介素在糖尿病视网膜病变中作用研究进展

白细胞介素（interleukins，IL）是一类高活性多功能蛋白质多肽分子，其在糖尿病视网膜病变（diabeticretinopathy，DR）发生发展的免疫学机制中起重要作用。IL-1β可引起血-视网膜屏障的损伤，并参与诱导视网膜毛细血管的凋亡。IL-10是一种抗炎因子，还能减缓细胞凋亡进程，改善神经症状。最新研究证实间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）可通过调节IL-1、IL-2、IL-10等的分泌，抑制视网膜细胞的凋亡和新生血管生成，保护视神经，减轻DR炎症反应。因此，有必要对IL-1、IL-2、IL-10在DR发生发展中的作用以及MSCs对其的调节作用进行综述，为深人研究MSCs治疗DR提供理论依据。

人脐带间充质干细胞对高糖环境中恒河猴视网膜血管内皮细胞的免疫调节作用

目的 观察人脐带间充质干细胞（hUCMSC）对高糖培养的恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）的免疫调节作用.方法 利用复合培养体系将hUCMSC加入Transwell系统上层小室,下室加入含有25 mmol/L的葡萄糖及RF/6A细胞;将hUCMSC按照1：1比例与RF/6A细胞共培养.实验分为对照组、高糖组及hUCMSC与高糖共培养组进行,3组RF/6A细胞分别采用Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）/F12完全培养液、DMEM/25 mmol/L D-葡萄糖完全培养液、hUCMSC与25 mmol/LD-葡萄糖完全培养液进行培养.采用噻唑蓝比色法检测共培养后RF/6A细胞的增生活力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测RF/6A细胞中叉头蛋白（Foxp3）的相对表达量;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL）-17的浓度.结果 培养后第1天,对照组、高糖组及hUCMSC与高糖共培养组RF/6A细胞存活率比较,差异无统计学意义（F=0.030,P＞0.05）.培养后第3、7天,高糖组RF/6A细胞存活率较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=36.072、27.890,P＜0.05）;hUCMSC与高糖共培养组RF/6A细胞存活率较高糖组明显提高,差异有统计学意义（t=13.280、19.650,P＜0.05）.Western blot检测结果显示,培养后第7天,高糖组RF/6A细胞中Foxp3蛋白相对表达量较对照组明显下降,差异有统计学意义（t=7.826,P＜0.05）;hUCMSC与高糖共培养组RF/6A细胞中Foxp3蛋白相对表达量较高糖组明显提高,差异有统计学意义（t=19.936,P＜0.05）.ELISA检测结果显示,培养后第7天,高糖组、hUCMSC与高糖共培养组细胞培养上清液中IL-17浓度较对照组明显升高,差异有统计学意义（F=1 267.503,P＜0.05）.hUCMSC与高糖共培养组细胞培养上清液中IL-17浓度较高糖组明显下降,差异有统计学意义（t=17.386,P＜0.05）.结论 hUCMSC能提高被高糖抑制的RF/6A细胞增生活力,可通过调控Foxp3、IL-17表达来平衡修复RF/6A细胞.

蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞分泌外泌体与核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白炎性体的相关性研究

目的观察蓝光诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞外泌体对核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白（NLRP3）炎性体相关因子表达的影响。方法人RPE细胞株贴壁细胞分为实验组和对照组。实验组细胞以蓝光照射6h建立光损伤模型；对照组细胞常规培养。分级低温超速离心法获得两组细胞外泌体，透射电子显微镜观察其形态；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测两组细胞外泌体表面CD63及白细胞介素（IL）-113、IL-18、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-1）蛋白相对表达水平。将两组细胞外泌体作用于正常RPE细胞，据此分为蓝光诱导细胞外泌体＋实验组、正常细胞外泌体＋对照组。培养24h后，Westernblot检测两组细胞外泌体中IL-113、IL．18、caspase．1蛋白表达；荧光实时定量聚合酶链反应检测两组细胞中NLRP3mRNA表达。结果实验组细胞发生损伤失去原有形态；外泌体均呈双凹托盘状，直径50~200nm；实验组细胞外泌体中IL-113（t=18．04）、IL-18（t=-12．55）、caspase-1（t=14．70）蛋白表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．001）。蓝光诱导细胞外泌体＋实验组细胞外泌体中IL．1B（t=-i8．59）、IL．18（t=23．95）、caspase．1（t-=35．27）蛋白表达量明显高于正常细胞外泌体＋对照组，差异均有统计学意义（P〈0．001）；蓝光诱导细胞外泌体＋实验组、正常细胞外泌体＋对照组细胞内NLRP3mRNA相对表达量分别为1．000±0．069、0．200±0．010，两者比较，差异有统计学意义（t=-12．20，P〈0．001）。结论蓝光诱导RPE细胞外泌体可使RPE细胞内NLRP3炎性体相关细胞因子IL．1B、IL．18、caspase-1蛋白和NLRP3mRNA表达上调。

穿透性角膜移植术与板层角膜移植术治疗圆锥角膜术后客观视觉质量比较

目的:探讨采用双通道视觉质量分析系统(OQAS)评估圆锥角膜患者行穿透性角膜移植术(PKP)和板层角膜移植术(LKP)后的客观视觉质量。方法:前瞻性临床研究。收集2016年1月至2017年12月在青岛眼科医院因圆锥角膜行角膜移植的患者40例进行研究,其中PKP组23例(24眼),LKP组17例(19眼),术前2组患者最佳矫正视力、屈光度和临床分期差异均无统计学意义,术后随访并应用OQAS检查术后的客观视觉质量,检查指标包括客观散射指数(OSI)、调制传递函数(MTF)截止频率、客观对比度视力和泪膜质量OSI变化。分类变量比较采用χ^2检验,组间连续变量比较采用独立样本t检验。结果:术后随访23~25个月,PKP组和LKP组患者角膜植片均保持透明状态,2组间最佳矫正视力、球镜度和柱镜度差异均无统计学意义,但PKP组角膜内皮细胞计数明显低于LKP组(t=3.91,P<0.001)。PKP组的斯特列尔比、20%对比度视力、9%对比度视力以及OSI与LKP组相比,差异均无统计学意义。PKP组的MTF截止频率和100%对比度视力较LKP组高,差异均有统计学意义(t=2.58,P=0.01;t=2.66,P=0.01)。泪膜质量OSI在LKP组明显高于PKP组,差异有统计学意义(t=3.48,P<0.001)。结论:双通道OQAS测量结果表明圆锥角膜患者行PKP术后的客观视觉质量优于行LKP术后,PKP术后的MTF截止频率和对比度视力高于LKP术后。