反义寡核苷酸处理伊马替尼耐药慢粒细胞后Bcl-x剪接异构体的变化

目的探讨反义寡核苷酸Vivo-Morpholinos(vMO)处理对伊马替尼(Imatinib,IM)耐药慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞中Bcl-x基因选择性剪接的影响。方法将IM(1μM)组、荧光标记的vMO、IM联合vMO组(IM+vMO)、空白对照组分别与IM耐药CML细胞株K562/G01细胞进行共培养48h,通过RT-PCR和Western Blot分别检测K562/G01细胞胞内Bcl-x剪接异构体Bcl-xL/Bcl-xS mRNA和蛋白比值变化。结果分别与IM组和vMO组处理K562/G01细胞相比,IM+vMO组的Bcl-xL mRNA和蛋白表达量显著降低,同时Bcl-xS mRNA和蛋白表达量明显升高,而对照组中Bcl-x剪接异构体变化不明显。结论 K562/G01细胞在vMO处理后Bcl-xL/Bcl-xS mRNA和蛋白比值显著下调。

脂肪干细胞来源外泌体携带miR-27抑制白色脂肪的棕色化

目的探讨脂肪干细胞(ASC)来源的外泌体在白色脂肪棕色化中的作用.方法分离培养并鉴定小鼠ASC细胞;慢病毒转染构建过表达miR-27的ASC细胞;超高速离心提取正常及过表达miR-27的ASC细胞分泌的外泌体,实时荧光定量核酸扩增(qRT-PCR)分析外泌体中miR-27的表达量;高脂喂食构建肥胖小鼠模型,分别注射过表达miR-27外泌体(过表达组)、正常ASC外泌体(正常表达组)及生理盐水(对照组),在寒冷暴露条件下监测体质量变化;剥离小鼠附睾皮下脂肪组织和肩胛骨脂肪组织,比较组织大小,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测解偶联蛋白1(UCP1)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)、含PR结构域的锌指蛋白16(PRDM16)、过氧化物酶体增殖子激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的表达.结果成功提取ASC及其外泌体,并成功转染miR-27;ASC及其外泌体中的miR-27显著高于白色脂肪组织(P<0.05).与对照组相比,过表达组及正常表达组的小鼠体质量下降幅度小,随时间的增加效果更加明显(P<0.05).过表达组及正常表达组的小鼠的附睾皮下脂肪组织较对照组的小鼠要稍大;而肩胛骨脂肪组织的大小无明显变化.正常表达组与过表达组的UCP1、PPARγ、PRDM16及PGC-1α的表达水平较对照组下降(P<0.05).结论脂肪干细胞来源外泌体能够抑制白色脂肪细胞的棕色化.

PKM剪接体在伊马替尼敏感及耐药慢粒细胞中的差异表达

目的探讨丙酮酸激酶剪接体M1型(PKM1)和M2型(PKM2)在不同慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞中的表达情况及意义。方法收集南昌大学第二附属医院确诊的伊马替尼(Imatinib,IM)敏感(n=23)和IM耐药(n=7)CML患者外周血或骨髓,采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法检测IM敏感CML细胞系K562、IM耐药CML细胞系K562/G01及30例临床样本中PKM1和PKM2表达水平。结果与K562细胞相比,K562/G01细胞中PKM2/PKM1的比值明显升高;IM耐药CML患者PKM2/PKM1的比值较IM敏感者显著上调。结论 PKM发生异常剪接可能与CML细胞IM耐药相关。

乳酸代谢相关基因预测肝细胞癌预后的风险评分模型的构建

目的鉴定肝细胞癌相关乳酸代谢基因,并基于相关基因构建风险评分模型预测肝细胞癌预后。方法使用TCGA数据库收集了377例肝细胞癌患者的临床信息和转录组数据,通过Cox单因素分析、Lasso回归筛选乳酸代谢相关基因,构建肝细胞癌患者预后多因素风险评分模型,采用TCGA内部验证数据集验证一致性。结果在获取的303个乳酸代谢相关基因中,从肿瘤组和正常组中筛选了91个差异表达大于2倍的基因;训练组中通过Cox单因素分析、Lasso回归筛选出3个差异表达基因ACTN3、DTYMK和HTRA2,3个基因的高表达均与HCC患者不良预后相关,基于3个代谢基因的表达构建肝细胞癌患者预后预测模型对各肿瘤样本评分,其中年龄、分期和风险评分均为HCC患者OS的独立预测因素,TCGA内部验证数据集(n=192)验证不同风险评分对患者生存的影响,结果与训练集一致。进一步分析发现高风险评分组患者的IFN反应力更低。结论基于乳酸代谢相关基因构建的风险评分模型可较好地预测HCC患者预后,乳酸代谢基因的研究有助于深入理解HCC发生发展的分子机制,为HCC患者治疗提供新的潜在靶点。

免疫原性细胞死亡基因风险模型的建立及其对肝细胞癌预后和肿瘤微环境特征的预测价值

目的鉴定肝细胞癌(HCC)免疫原性细胞死亡(ICD)相关基因,并基于相关基因构建评分模型预测HCC的预后和肿瘤微环境特征。方法通过癌症基因组图谱数据库获取HCC数据集,采用热图展示了HCC中57个ICD相关基因的表达。基于ICD相关基因表达进行聚类分析,对2种ICD相关亚型(ICD低表达组和ICD高表达组)进行基因本体富集、京都基因和基因组百科全书富集、体细胞突变差异、免疫细胞浸润差异分析。构建LASSO Cox回归风险预后模型,验证其临床应用价值。构建列线图模型,预测患者1、3和5年的生存率。此外,采用qRT-PCR验证模型中关键基因的表达水平。两组间比较采用成组t检验,采用单因素和多因素Cox回归分析确定临床病理特征中的预后因素。采用Kaplan-Meier生存曲线进行预后分析。采用Spearman秩相关进行相关性分析。结果ICD低表达组预后较差,ICD高表达组与良好的临床结果相关(P=0.004)。进一步研究表明ICD高表达组与免疫活性微环境相关,且ICD高表达组的基因主要富集于免疫相关通路(免疫球蛋白受体结合、造血细胞谱系和B淋巴细胞受体信号通路)。体细胞突变结果显示,ICD高表达组的CD274、CTLA4、HAVCR2、TIGIT、PDCD1和PDCD1LG2的基因表达水平较高(P值均<0.05)。利用8个ICD相关基因(HSP90AA1、ATG5、BAX、PPIA、HSPA4、TLR2、TREM1、LY96)建立风险预后模型,该模型在不同临床特征中均有较好的预测价值。单因素和多因素Cox回归分析表明,在训练集中,年龄和风险评分是总生存期的独立预后因素(P值均<0.05)。qRT-PCR结果表明,HSPA4和REM1在HCC肿瘤样本中的相对表达水平显著高于瘤旁组织(P值均<0.001)。ICD风险评分升高的患者与γδT淋巴细胞(r=-0.29)、浆细胞(r=-0.3)和CD8+T淋巴细胞(r=-0.37)呈负相关(P值均<0.05),与记忆B淋巴细胞(r=0.38)、静止树突状细胞(r=0.47)和M0型巨噬细胞(r=0.49)呈正相关(P值均<0.05)。结论本研究确定了与HCC预后相关的ICD基因,为理解不同ICD表达谱相关的免疫特性提供了见解。构建的风险模型和列线图对于预测HCC患者的预后预测和免疫治疗指导具有重要的价值。