瘤内原位转导UPRT基因治疗小鼠胃癌的实验研究

背景与目的:5-FU是临床上重要的化疗药物,但总体疗效有限,如何提高其抗癌疗效一直是临床上亟待解决的难题。本研究采用基因治疗的原理与方法,探讨UPRT(uracilphosphoribosyltransferase)基因对5-FU杀伤效应的增敏作用。方法:采用PCR技术从大肠杆菌K12基因组中扩增UPRT基因,并构建pLXSN逆转录病毒表达载体,进一步转染小鼠胃癌细胞株MFC。采用MTT法检测转导UPRT基因前后MFC对5-FU敏感性的变化。建立615小鼠胃癌皮下移植瘤模型,瘤内反复多次注射携带UPRT基因的浓缩、纯化的逆转录病毒,同时腹腔内给予5-FU,观察抑瘤效果。结果:体外MTT法检测结果显示,转导UPRT基因后可使MFC对5-FU的敏感性提高约17.26倍。以逆转录病毒介导UPRT基因瘤内原位转导,同时联合应用5-FU进行治疗,结果肿瘤生长明显受抑(P<0.005),抑瘤率为87.18%。结论:UPRT基因修饰小鼠胃癌细胞株MFC,能明显提高MFC对5-FU杀伤的敏感性,以逆转录病毒载体介导UPRT基因肿瘤原位基因转导,同时联合应用5-FU,能获得良好的抑瘤效应。

PRT/5-FU前药转换酶系统对小鼠胃癌治疗的实验研究

目的 探讨UPRT/ 5 FU前药转换酶系统对小鼠胃癌细胞MFC的杀伤效应。方法 采用PCR技术从大肠杆菌K12基因组中扩增UPRT基因 ,并构建pLXSN逆转录病毒表达载体 ,进一步转染MFC细胞。采用MTT法检测转导UPRT基因前后 ,MFC对 5 FU的敏感性的变化。建立 6 15小鼠胃癌皮下移植瘤模型 ,腹腔内给于 5 FU ,观察治疗效果。结果 体外MTT法检测结果显示 ,转导UPRT基因后可使MFC对 5 FU的敏感性提高约 17.2 6倍。动物实验的结果表明 ,转导UPRT基因不影响MFC的致瘤性 ;经 5 FU治疗后 ,转UPRT基因的肿瘤 ,生长明显受抑 (P <0 .0 0 0 5 ) ,抑瘤率为 89.6 2 %。结论 UPRT基因修饰小鼠胃癌细胞株MFC ,能明显提高MFC对 5 FU杀伤的敏感性 ,增强 5 FU的抗瘤效应。

UPRT基因修饰对肿瘤细胞化疗增敏性的研究

5-FU是临床上应用最广泛的抗肿瘤化疗药物之一,但总体疗效仅为20％～30％,其毒副反应高,疗效不理想是妨碍其更广泛采用的主要原因。多年来,人们尝试通过改变给药方法和途径、采用生物调节剂以及改变其分子结构来提高其疗效,取得了一定的效果。近年来研究发现,通过转导外源药敏基因,可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本研究拟以尿嘧啶磷酸核糖转移酶(UPRT)基因修饰肿瘤细胞,探讨UPRT基因修饰肿瘤细胞对5-FU的增敏效应。

基因修饰对消化道肿瘤细胞化疗药敏感性的影响

目的:探讨UPRT基因修饰消化道肿瘤细胞后对5-氟脲嘧啶(5-FU)杀伤效应的增强作用。方法:采用PCR技术从大肠杆菌K12菌株基因组中扩增UPRT基因,并构建pLXSN逆转录病毒表达载体,进一步转染人胃癌细胞株SCG7901、大肠癌细胞株Lovo以及肝癌细胞株7721。采用MTT法检测转导UPRT基因前后,肿瘤细胞对5-FU敏感性的变化。结果:通过逆转录病毒载体介导UPRT基因修饰肿瘤细胞,体外MTT法检测结果显示,转导UPRT基因后可使SCG7901、Lovo及7721对5-FU的敏感性分别提高约21.07、30.25及35.19倍。结论:UPRT基因修饰肿瘤细胞,能明显提高其对5-FU杀伤的敏感性,增强5-FU的抗瘤效应。

IL-12抗肿瘤免疫治疗及其基因治疗的研究进展

IL12是近年来研究最热门的细胞因子,具有多种重要的生物学活性,参与机体免疫调节的许多方面,因而具有重要的抗炎、抗肿瘤作用。目前应用重组IL12治疗肿瘤已经进入临床试验阶段,有关其基因治疗的初步方案也已经提出。本文将近年来有关IL12免疫治疗及其基因治疗方面的研究进展作一综述。

CD/5-FC系统对小鼠胃癌细胞杀伤作用的研究

目的 探讨CD5-FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞的体外杀伤作用及其机制。方法以逆转录病毒载体介导CD基因转导小鼠胃癌细胞株MFC,采用MTT法测定CD5-FC系统的体外杀伤作用及其“旁观者”效应;利用Hoechst33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡细胞,同时采用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因的表达。结果转导CD基因可使MFC对5-FC高度敏感,并且显示出强大的“旁观者”效应。经5-FC作用后,荧光染色可见到典型的凋亡细胞核形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯度,同时发现凋亡相关基因bcl-2基因表达下调,而bax与caspase-3基因表达上调。结论CD5-FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞MFC具有强大的杀伤作用。

肿瘤的自杀基因治疗现状

近年来,随着分子生物学、肿瘤免疫学等领域技术的进步与发展,相关基因的克隆及表达成功,使肿瘤的基因治疗成为可能,并有望成为继手术、放疗、化疗以及免疫治疗之后又一重要的生物治疗手段.肿瘤基因治疗的方案有很多,归纳起来可以概括为以下几类.(1)抗肿瘤血管形成的基因治疗;(2)免疫基因治疗;(3)自杀基因治疗;(4)阻断浸润转移基因治疗;(5)反义核酸治疗;(6)抑癌基因治疗;(7)多药耐药基因治疗;(8)基因标记等[1].不少动物实验及部分基因治疗的临床试验均取得了令人瞩目的成效,显示出良好的应用前景.

血清K-ras基因突变检测联合CA19-9测定在胰腺癌诊断中的应用

背景与目的:胰腺癌早期诊断困难,常用的肿瘤标记物如CA19-9,虽敏感度较高但特异性较差,胰腺癌中常有K-ras基因的突变,而且特异性较高,我们通过检测血清DNA中K-ras基因的突变以及测定血清CA19-9的含量,以探讨两者联合检测在胰腺癌诊断中的临床意义。方法:取39例胰腺癌患者的血清,抽提DNA,采用突变富集聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测K-ras基因第12密码子突变,同时应用放免法测定血清CA19-9的含量,并与17例其他胰腺疾病患者和21例健康者的血清检测结果作对照,分析两者联合应用的临床诊断价值。结果:在28例胰腺癌和2例其它胰腺疾病患者血清中检测到K-ras基因突变,阳性率分别为71.79%和11.76%;而血清CA19-9测定的阳性率则分别为71.79%和41.18%。平行法联合检测K-ras和CA19-9诊断胰腺癌时敏感性增至94.87%,系列法联合检测时特异性增至94.12%。21例健康对照者血清中K-ras基因与CA19-9均无异常。结论:联合血清K-ras基因突变检测与CA19-9测定可提高胰腺癌诊断的特异性和敏感性,具有一定的临床应用价值。

低氮低热量肠外营养对腹部手术病人疗效及预后影响的Meta分析

目的:系统评价低氮低热量肠外营养对腹部手术病人的疗效及疾病预后的影响。方法:检索7个生物医学数据库(CBM、Medline、Cochrane Library、Web of Science、CNKI等)的文献资料。按照Cochrane系统评价员手册,进行纳入随机对照研究的方法学质量评定,应用Rev Man 5.2软件进行Meta分析。结果:共纳入7项符合标准的临床随机对照试验(RCT)相关文献(n=565)。Meta分析显示,低氮低热量试验组可较好地控制血糖水平,较对照组降低1.36 mmol/L,95%CI[-2.01,-0.72],P<0.000 1,差异有统计学意义;试验组血清清蛋白含量平均增加1.31g/L,95%CI[-3.11,5.74],P=0.56,无显著性差异;低氮低热量肠外营养可减少病人术后并发症的发生率(平均为35%),95%CI[0.19,0.63],P=0.000 5,差异有统计学意义;卫生经济学方面,试验组住院天数平均缩短2.41天,95%CI[-3.80,-1.02],P=0.000 7,差异有统计学意义,试验组病人营养药品费用较对照组降低,合并SMD=-2.53,95%CI[-7.18,2.11],P=0.28,差异无统计学意义。结论:腹部术后病人早期给予低氮低热量肠外营养支持,可较好地控制血糖水平、降低并发症的发生率,同时减少术后住院时间,降低病人的医疗费用,有利于病人术后康复。

腹腔镜直肠癌根治术的解剖及操作要点分析

目的近年来,腹腔镜结直肠手术已广泛开展,文中探讨腹腔镜结直肠癌根治术的入路选择、镜下解剖及操作要点。方法回顾性分析68例腹腔镜直肠癌根治患者的临床资料及手术录像。结果 64例手术成功,4例中转开腹,64例平均手术时间165min,平均出血量120ml,平均住院11d。术后大出血1例,不全性肠梗阻1例,肠管损伤1例,无吻合口漏及切口感染,无围手术期死亡病例。结论腹腔镜直肠癌根治术效果较好;良好的暴露、恰当的入路、正确的层次和熟练的镜下操作是手术成功的关键。

谷氨酰胺强化的营养支持对围手术期肿瘤患者预后影响的Meta分析

目的系统评价谷氨酰胺(Gln)强化的营养支持对围手术期肿瘤患者预后的影响。方法检索6个生物医学数据库(《Pubmed数据库》、《Springer Link数据库》、《中国生物医学文献数据库》、《Cochrane Library》、《中国学术期刊全文数据库》等)的文献资料。按照Cochrane系统评价员手册,对纳入随机对照研究进行方法学质量评定,应用Rev Man 5.2软件进行Meta分析。结果共纳入9项符合标准的RCT相关文献(n=921)。Meta分析显示,谷氨酰胺增强化的实验组与对照组比较可使患者临床感染率降低至65%,95%CI[0.47,0.90],P=0.010,具有统计学意义;患者总住院时间平均缩短1.95 d,95%CI[-3.03,-0.87],P=0.000 4,具有统计学差异;患者的IgG平均增加1.27 g/L,95%CI[0.80,1.73],P<0.000 01,具有统计学意义。结论谷氨酰胺强化的营养支持,能有效地降低外科腹部手术患者术后感染风险,提高免疫功能,缩短患者住院时间,具有一定的卫生经济学意义。谷氨酰胺强化的营养支持是一种安全有效的营养治疗方法 ,有利于围手术期肿瘤患者的康复。

选择性痔上黏膜切除钉合术治疗痔病的临床疗效观察

目的观察选择性痔上黏膜切除钉合术（TST）治疗痔病的临床疗效。方法选择198例Ⅲ~Ⅳ痔病患者,随机分为2组,治疗组108例采用TST治疗,对照组90例采用传统外剥内扎治疗。观察两组患者术中出血及术后出血症状的疗效以及手术持续时间、住院时间、费用、手术副作用（肛门疼痛、肛门水肿、尿潴留）等情况,并进行统计学分析比较。结果治疗组住院时间、费用、手术时间、术中出血量、肛门狭窄疼痛、水肿发生率与对照组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。结论 TST手术治疗痔病是一种操作简便、手术和住院时间短、疗效满意、并发症少、恢复较快的术式,,值得推广。

CD/5-Fc联合β射线治疗小鼠胃癌的初步研究

目的 探索放射治疗联合自杀基因CD治疗小鼠胃癌,以加强自杀基因的抗肿瘤疗效。方法 分别以自杀基因CD/5-Fc、β在射线及二者联合治疗小鼠胃癌模型,比较治疗效果。结果 CD基因联合放射治疗对肿瘤有明显抑制作用,而且能延长荷瘤鼠的生存期,与CD基因或放疗单独应用相比具有明显差异(P<0.05)。结论 放疗能增强自杀基因的疗效,二者联合治疗可以作为肿瘤综合治疗的补充方法。

中国人大肠癌患者生活质量评分表的建立及初步应用

目的 初步建立符合我国国情的大肠癌患者的生活质量评分表。方法 随机对 2 43名成人进行问卷调查 ,对筛选出的各项目以 5、3、1分量化其不同程度以建立生活质量评分表 ;应用该评分表随机对 65例大肠癌患者、13 5例假想大肠癌者及 43例非大肠癌的其他消化系肿瘤患者进行生活质量评分。结果 筛选百分率超过 5 0 %者纳入大肠癌生活质量评分表 ,共计指标 2 0项 ,各指标组间筛选百分率的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。根据分类、量化评估指标建立大肠癌患者生活质量评分表。 65例大肠癌患者与 13 5例假想大肠癌患者及 43例其他消化系肿瘤患者生活质量评分的差异有显著性 (P <0 .0 0 1和 0 .0 5 )。结论 该评分表符合我国的评分习惯 ,能反映大多数大肠癌患者的生活质量 ,具有一定的普遍性及特异性 ,对全面了解患者的健康状况。

荷胃癌小鼠自杀基因治疗后宿主免疫功能观察

目的研究自杀基因疗法是否能诱导肿瘤宿主产生免疫应答。 方法将小鼠前胃癌细胞株 (MFC)接种于小鼠背部制作肿瘤模型 ,以单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV -tk)和大肠杆菌胞嘧啶脱氧基酶基因 (CD)注射于瘤体内 ,并于瘤体周围注射mIL - 2和mGM -CSFDNA及向腹腔内注射前药 9-丙氧乌苷 (GVC)和 5 -Fc。治疗第5周取肿瘤消退小鼠的脾细胞测自然杀伤细胞 (NK)和LAK活性 ;第 12周取PBL和脾细胞测NK和细胞毒细胞(CTL)活性。 结果在TK/CD基因联合细胞因子及前药治疗后第 5周 ,实验组脾细胞NK和LAK活性均明显高于荷瘤鼠对照 (P <0 .0 1)。 12周后 ,实验组PBL的NK和CTL活性均显著高于正常对照组 (P =0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;而脾细胞NK活性与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。 结论自杀基因疗法能较长时间提高宿主抗肿瘤免疫反应。

nm23-H_(1)在胃癌中表达的研究

目的 分析nm2 3 H1(简称nm2 3 H1)在胃癌分化、浸润转移中的作用及其表达的临床意义。方法 应用ABC免疫组化方法 ,研究 46例原发性胃癌组织及其转移淋巴结nm2 3 H1的表达。结果 45 .6 % (2 1/ 46 )的胃癌nm2 3 H1表达下降。nm2 3 H1的阳性表达与Borrmann分型、组织学分型无关 (P >0 .0 5 ) ,而与肿瘤大小、胃癌浸润深度、临床病理分期、淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 )。 5 4%的胃癌原发灶nm2 3 H1蛋白呈阳性表达 ,只有 37.5 %的淋巴结转移灶nm2 3 H1蛋白呈阳性表达。结论 nm2 3 H1可能对胃癌的浸润。

肝硬化患者血浆吲哚青绿测定及其临床意义

我们应用国产吲哚青绿ＩＣＧ测定了３０例失代使期肝硬化患者和１０例正常人１５分钟的血浆潴留率（Ｒ１５１ＣＧ），同时对肝硬化患者Ｒ１５１ＣＧ与血清胆红素、白蛋白、谷丙转氨酶、白球蛋白比例以及腹水之间的关系进行了初步的探讨，结果在明，Ｒ１５１ＣＧ可以准确反映肝硬化患者肝脏的储备功能，并且对肝硬化患者预后的判断有一定意义。

联合胞嘧啶脱胺酶与尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因治疗小鼠胃癌

目的探讨联合应用尿嘧啶磷酸核糖转移酶(UPRT)基因对胞嘧啶脱胺酶(CD)/氟胞嘧啶(5-FC)前药转换酶系统抗瘤作用的增强效应。方法将携带UPRT基因和CD基因的逆转录病毒载体通过PA317细胞包装成完整的病毒颗粒并浓缩和纯化。建立615小鼠胃癌皮下移植瘤模型,瘤内反复多次注射携带UPRT和CD基因的逆转录病毒,同时腹腔内给予5-FC,观察抑瘤效果。结果逆转录病毒介导CD基因瘤内原位转导,同时联合应用5-FC进行治疗,结果发现,在肿瘤接种后第12天,对照组肿瘤体积为(2.367±0.371)cm3,而CD/5-FC治疗组肿瘤体积大小为(0.704±0.358)cm3,肿瘤生长明显受抑(P<0.0005)。联合转导UPRT基因后,于肿瘤接种后第16天,肿瘤体积为(0.731±0.255)cm3,而单独应用CD基因治疗组肿瘤体积为(1.455±0.370)cm3,从而证实联合转导UPRT基因可进一步增强CD/5-FC自杀基因系统的抑瘤作用(P<0.001)。结论联合转导UPRT基因,可显著增强CD/5-FC自杀基因系统的抗瘤效应。