贝纳柯克斯体重组抗原Com1和急性Q热抗原A(adaA)的纯化和鉴定

目的原核表达并纯化2种贝纳柯克斯体(C.burnetii)抗原主要外膜蛋白质Com1和急性Q热抗原A(adaA),并对重组Com1和adaA进行质谱鉴定以及抗原性鉴定。方法全基因合成编码Com1和adaA的基因序列,并将其分别构建到原核表达载体pET-20b(+),将构建好的载体分别转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组Com1和adaA。通过镍亲和柱层析纯化重组Com1和adaA,切取纯化的蛋白质条带进行质谱鉴定。将纯化的重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清进行Western blot分析,检测其免疫反应特性。结果构建了原核表达载体pET-20b(+)-Com1以及pET-20b(+)-adaA,重组抗原Com1和adaA均以可溶形式得到了高效地表达和纯化,SDS-PAGE结果显示其相对分子质量(Mr)分别为27 000与25 000,质谱鉴定结果确证其为C.burnetii的抗原蛋白Com1和adaA。重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清均有阳性反应条带,条带Mr大小与SDS-PAGE结果一致。结论成功高效表达了可溶重组Com1和adaA并证实其免疫反应特异性。

田鼠巴贝西虫截短型分泌抗原1的原核表达与抗原性鉴定

目的对田鼠巴贝西虫(Babesia microti)的诊断抗原分泌抗原1(Babesia microtisecreted antigen 1,BmSA1)的截短部分(tBmSA1)进行克隆构建、原核表达与纯化,并对重组tBmSA1进行质谱鉴定以及抗原性鉴定。方法通过PCR扩增截短型tBmSA1基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组tBmSA1,使用AKTA进行镍亲和层析纯化,并对纯化的重组tBmSA1进行质谱分析,通过Western Blot和ELISA鉴定重组tBmSA1的抗原性。结果成功构建了重组质粒pET-30a(+)-tBmSA1,重组tBmSA1得到高效表达和纯化,质谱分析验证了其正确性,Western Blot和ELISA结果显示其具有较好的抗原性。结论实现了田鼠巴贝西虫tBmSA1的原核高效表达,并验证了其诊断价值,为田鼠巴贝西虫感染诊断奠定了基础。

江苏地区无偿献血人群巴贝虫感染调查

目的了解江苏地区无偿献血人群巴贝虫感染情况,为输血安全提供科学依据。方法2017年2–5月对江苏省血液中心采集的950人份无偿献血者血样,以巴贝虫分泌抗原(BmSA1)为诊断靶标分子,采用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单份血清标本靶向巴贝虫特异性总抗体水平,对抗体阳性样品制作血涂片进行镜检,并提取DNA进行巢式PCR扩增确认寄生虫血症;分析不同性别、年龄和职业献血者巴贝虫抗体阳性率。结果江苏地区950人份无偿献血人群巴贝虫抗 BmSA1抗体阳性率为0.53%,5例巴贝虫抗 BmSA1抗体阳性血样镜检和巢式PCR结果均为阴性。不同性别(χ^2=0.01,P=0.92)和年龄(χ^2=0.11,P=0.95)献血者巴贝虫抗 BmSA1抗体阳性率间差异均无统计学意义,但不同职业献血者巴贝虫抗 BmSA1抗体阳性率间差异具有统计学意义(χ^2=11.93,P<0.05)。结论江苏地区无偿献血者中有巴贝虫感染者,应予以重视。