乙型脑炎重组痘苗病毒的抗原表达及其免疫保护性

采用乙型脑炎重组痘苗病毒Ｊ１和Ｊ３株，两者均含乙脑病毒（ＪＥＶ）的Ｅ、ＮＳ１和ＮＳ２Ａ基因，后者还含ＰｒＭ基因，在ＢＨＫ－２１－１５细胞中培养表达，经免疫荧光法（ＩＦＡ）测定，两者均可高效表达ＪＥＶ特异性抗原。用该重组病毒免疫瑞士种小鼠，经ＩＦＡ检测证明Ｊ１、Ｊ３均可诱生抗ＪＥＶ抗体，其中Ｊ３免疫鼠还产生中和抗体（Ｎ）和血抑抗体（ＨＩ），且其抗ＪＥＶ攻击能力显著增高。

痘苗病毒毒力相关基因的研究进展

痘苗病毒毒力相关基因的研究进展娄元梅，阮力，朱既明（中国预防医学科学院病毒学研究所遗传室，北京１０００５２）５２）近十几年来，痘苗病毒已新兴成为一哺乳动物表达载体。但它仍存在一些鲜为人知的毒副作用，特别是免疫缺陷患者，尚有１／百万的机率出现全身性发痘...

流式细胞术检测重组痘苗乙型脑炎病毒抗原的表达

流式细胞术检测重组痘苗乙型脑炎病毒抗原的表达ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＪａｐａｎｅｓｅｅｎｃｏｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓａｎｔｉｇｅｎｓｅｎｐｒｅｓｓｅｄｏｎｔｈｅＢＨＫ２１－１５ｃｅｌｌｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｉｒｕｓｂｙｆｌ...

黄病毒非结构蛋白NS3的蛋白酶特性研究进展

黄病毒科成员多,且其基因组结构同源性高,弄清其结构与功能的关系可大大缩短疫苗研制和使用的进程。黄病毒NS3蛋白为分子量仅次于NS5的非结构蛋白,且具高度保守性。实验表明,NS3蛋白具蛋白酶活性。本文就NS3蛋白的酶活性中心、辅酶成分、底物结合部位及酶特异作用序列等加以阐明。

同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建

利用非复制型痘苗病毒载体，构建了能同时表达乙型肝炎（乙肝）病毒ＳＳ１、麻疹病毒ＨＡ和Ｆ及白细胞介素２（ＩＬ２）的非复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１，及其相应的复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１。这两株重组病毒在ＣＥＦ细胞上连续传至第２５代，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，两株病毒均在Ａ２４、Ａ２７间稳定整合有ＳＳ１基因，非复制型重组病毒Ｃ、Ｋ间基因稳定缺失。经ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测，这两株病毒均可稳定分泌表达ＳＳ１蛋白，其分泌表达的ＳＳ１蛋白与ＣＨＯ细胞表达的ＳＳ１蛋白性质相近，接近于天然。经免疫打点检测，两株病毒均可稳定表达麻疹病毒的ＨＡ与Ｆ蛋白以及ＩＬ２。而且ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１与ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１表达多种外源抗原的水平无显著性差异。ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１经皮内注射免疫家兔，４周后可诱发抗乙肝病毒ＳＳ１、抗麻疹病毒及抗痘苗病毒的特异性ＩｇＧ抗体；加强免疫２周后，特异性抗体滴度可上升４～１６倍，与其初始病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫ诱发的抗体水平相同，比ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１诱发的抗体滴度低０～４倍。非复制型多价重组痘苗病毒的构建，为评价非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载?

非复制重组痘苗病毒天坛株C-K缺失区表达载体的构建及重组病毒生物学性状的研究

将反向串联的痘苗病毒启动子 p11k和 p7.5k表达结构引入非复制痘苗病毒质粒载体 ,得到非复制痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75、pNEOCK75 11β、pNEOCK1175和 pNEOCK75 11。利用载体 pNEOCK11β75、pNEOCK75 11β及 pNEOCK11β75IL6和RVJ12 3重组病毒进行同源重组 ,分别得到非复制重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75、RVJ12 3Δ75 11β及RVJ12 3Δ11β75IL6。Southern blot证实 :重组病毒RVJ12 3Δ11β75C K片段间大片段基因的稳定缺失 ,同时 β 半乳糖苷酶基因插入到缺失区内并稳定表达 ,不影响另外非必需区外源基因的表达 ,缺失区内两外源基因的表达无相互干扰 。

乙型脑炎重组痘苗病毒J_3免疫性的研究

用含有日本脑炎病毒（ＪＥＶ）结构蛋白ＰｒＭ、Ｅ和非结构蛋白ＮＳ１、ＮＳ２Ａ基因的重组痘苗病毒Ｊ３免疫家兔，能较快地诱生抗ＪＥＶ抗体，其滴度可随免疫次数的增加和免疫时间的延长而增高。此抗血清可被动保护不同毒株ＪＥＶ的致死性攻击，该保护作用与其中抗体和血凝抑制抗体有关。

从重组痘苗病毒获得JEV蛋白的分析

本文报告应用免疫过氧化物酶技术（Ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｓｓａｙ，ＩＰＡ）、微斑免疫过氧化物酶技术（Ｍｉｃｒｏｐｌａｑｕｅｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｓｓａｙ，ＭＰＩＰＡ）和免疫印迹试验（Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔａｓｓａｙ，ＩＢＡ）对我室构建的３株含有日本脑炎病毒（ＪａｐａｎｅｓｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＪＥＶ）基因的重组痘苗病毒进行了分析，结果表明，３株重组病毒均可在乳地鼠肾细胞（ＢＨＫ－２１－１５ｃｌｏｎｅｃｅｌｌ）上表达ＪＥＶ蛋白。（１）在感染的细胞浆、细胞膜和微孔板培养的单层细胞上显示特异的免疫酶斑。（２）可于感染６ｈ后的单层细胞上检出ＪＥＶ蛋白。（３）用免疫印迹分析观察到３～４条区带（１９ＫＤ、３７ＫＤ、５１ＫＤ和５６ＫＤ）。

表达乙型肝炎病毒表面抗原的非复制型重组痘苗病毒疫苗株RVJ123ΔCK的构建及其生物学性状鉴定

利用重组质粒 pNeo-CK与 pNeo-CKLacZ和表达乙型肝炎 (乙肝 )病毒S抗原的重组痘苗病毒RVJ12 3[1] ,构建了非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3ΔCK。Southernblot证实 ,非复制型重组病毒RVJ12 3ΔCK基因组C和K片段间与宿主范围和毒力相关的基因稳定缺失 ,同时 ,J片段中插入的乙肝S抗原基因稳定存在。重组病毒RVJ12 3ΔCK在鸡胚成纤维母细胞中可良好繁殖 ,而在人源细胞系中不繁殖或仅低度繁殖 ,但都能表达HBsAg ,并且在病毒一个复制周期内 ,复制型和非复制型病毒HBsAg表达水平无明显差别。

痘苗病毒天坛株非必需区TA25R…TA36L的两步重组表达载体的构建

针对痘苗病毒天坛株非必需区ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ，构建了可去除ＴＡ２６Ｒ至ＴＡ３５Ｌ的１０个ＯＲＦｓ，并同时表达ＬａｃＺ基因的两步重组表达载体ｐＡ２４２７ＬａｃＺ。通过两种方法（一步重组和两步重组）获得了在该区域表达ＬａｃＺ基因的重组痘苗病毒ＲＶＡ２４２７ＬａｃＺ。实验表明，一步重组法获得重组病毒的机率大约为１‰，两步重组法的机率可达６２．５‰。由此可见，两步重组法可显著提高重组病毒的筛选机率。ＬａｃＺ基因可以在该区域中稳定表达，重组病毒与野毒株在繁殖能力上没有明显差别，表明ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ是较稳定的外源基因插入区域。上述结果对于深入研究该非必需区的功能特点。

肾综合征出血热病毒单克隆抗体抗独特型抗体的分类鉴定

肾综合征出血热病毒单克隆抗体抗独特型抗体的分类鉴定娄元梅，朱德钟，刘启富（重庆第三军医大学微生物学教研室，６３００３８）抗独特型抗体（Ａｎｔｉ－Ｉｄ，Ａｂ２）在结合活性和功能特性方面具有高度特异性，对其分类甚为重要。Ｊｅｒｎｅ（１９８２）首先将Ａｂ２...