PRPS1基因突变致综合征性耳聋一家系遗传学分析

耳聋是严重的致残性疾病,可导致言语交流障碍,影响全球0.1%~0.3%的婴儿[1]。据第2次全国残疾人抽样调查报告,我国听力残疾者有2 780万人,占残疾人总数的33.51%[2]。中国7岁以下的耳聋患儿约有80万,且以每年3万例的速度增长[3]。耳聋的病因复杂,包括遗传因素和环境因素,其中遗传因素约占60%以上。根据是否伴随其他系统症状,遗传性耳聋又可分为综合征性耳聋和非综合征性耳聋,其中综合征性耳聋约占30%。

橙皮甙抗LDL氧化及对MCP-1 mRNA转录的影响

目的 研究橙皮甙体内外抗脂质氧化作用及其对兔食饵性动脉斑块中单核细胞趋化蛋白 1mRNA转录的影响。方法 ①采用一次性密度梯度超速离心法制备正常人低密度脂蛋白 ,Cu2 + 诱导其氧化 ,测定不同药物浓度和作用时间体系中丙二醛含量。②采用高脂饮食加免疫损伤的方法建立家兔动脉粥样硬化模型 :将 18只家兔随机化分为正常对照组、模型组、橙皮甙组。每组 6只 ,分别给予普通饲料 (正常对照组 )和高脂饲料 (模型组 )喂养 ,橙皮甙组在喂高脂饲料的同时 ,加橙皮甙 ( 2g d)一同喂养。建模 10周末耳缘静脉采血 ,检测各组动物血清中丙二醛和一氧化氮的含量。而后处死动物 ,取胸主动脉 ,用逆转录聚合酶链反应技术检测动脉壁细胞中单核细胞趋化蛋白 1mRNA的转录水平。结果 体外实验中 ,橙皮甙显著抑制丙二醛的生成 ,并呈一定浓度依赖关系 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 0 1)。体内实验中 ,橙皮甙明显降低血浆丙二醛的含量 (P <0 .0 1)和一氧化氮的水平 (P <0 .0 0 1) ;并对胸主动脉壁细胞单核细胞趋化蛋白 1mRNA的转录有明显抑制作用 (P <0 .0 5 )。结论 橙皮甙在体内外均有抗氧化作用 ,其下调单核细胞趋化蛋白

HNF1α对人FXR启动子的调控作用

为探讨肝细胞核因子1α(HNF1α)对人胆汁酸受体(FXR)转录激活的作用及机制,将含HNF1α的真核表达载体(pcDNA3·1(+)HNF1α)和含有FXR启动子的荧光素酶报告基因载体共转染人肝癌细胞系HepG2,检测转染细胞中荧光素酶活性并用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测FXR的表达.QuikChange法对FXR启动子HNF1α可能结合位点进行突变,将包含突变点的重组荧光素酶报告质粒单独或与pcDNA3.1(+)共同转染HepG2细胞,检测各组荧光素酶活性.根据凝胶电泳迁移率变化,分析HNF1α与FXR启动子区域的结合.结果发现,转染pcDNA3.1(+)HNF1α可以上调FXR在HepG2细胞中的表达,并增强FXR启动子活性且具有剂量依赖性;-65^-48区域的点突变,导致FXR启动子活性明显降低,共转染pcDNA3.1(+)HNF1α也不具有增强作用.结果提示,转录因子HNF1α能调控FXR基因表达,其机制为:HNF1α与FXR启动子区域-65^-48区域的反向半位点结合,发挥其反式激活作用.

人FXR基因5′调控区功能分析

为研究人法尼酯衍生物X受体(FXR)基因5′调控区的功能,在对人FXR基因进行生物信息学分析的基础上,用5′RACE法确定该基因的转录起始位点碱基是A.采用PCR技术,扩增人基因组DNA中FXR基因5′上游序列,构建了5种含不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达体系.将它们瞬时转染HepG2细胞,检测其荧光素酶活性.结果表明,-1651^+200、-1496^+200区域的启动子活性无明显区别,-847^+200区域的启动子活性最高,-544^+200区域启动子活性较前显著降低.研究提示,FXR基因转录所必需的基因启动子序列在-847^-544范围内.

MCP-1及其在相关疾病中的治疗措施

单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)属于趋化因子的CC亚家族 ,MCP 1与其受体CCR2相结合 ,参与了多种炎性疾病的发生。该文从抑制MCP 1的表达、MCP 1的拮抗剂、CCR2的拮抗剂、DNA疫苗几方面综述了针对MCP

开设生物化学第二课堂,提高医学生科研能力

生物化学教验室在深化教育改革,全面推进素质教育的过程中,将科研课题移植到第二课堂教学中,开展"基因表达调控与疾病"的论坛,为提高学生对科研的认识,培养医学生的科研思维能力以及提高他们的自身素质做了一次有益的尝试,并取得了良好的效果。

生物化学与分子生物学教学初探

本文总结了多年从事生物化学的教学经验,从如何做好准备工作(掌握丰富的专业知识、制定教学目标,因人施教、合理组织教学内容,认真制作多媒体教案)和怎样提高课堂教学效果(激发学生学习生化的兴趣、明确学习目标,抓住规律、采用不同教学方法)这两方面着手,对生物化学教学进行了探讨,希望对生物化学教学有所帮助.

果柚对家兔实验性高脂血症的降血脂作用

目的 观察果柚对家兔实验性高脂血症的影响。方法 将 2 4只家兔随机分为正常对照组、模型组、果柚组和橙皮甙组 ,每组 6只。正常对照组给予普通饲料 ,模型组给予高脂饲料喂养 ,实验组在喂高脂饲料的同时 ,分别加果柚汁或橙皮甙一同喂养。每组在实验前耳缘静脉注射牛血清白蛋白。实验 3wk及 6wk后耳缘静脉取血 ,检测血脂水平。结果 实验 3wk及 6wk后 ,果柚组及橙皮甙组与模型组比较 ,动物血清总胆固醇 (serumtotalcholesterol,TC)明显降低 (P <0 .0 1) ,甘油三脂 (triglyceride ,TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (lowdensitylipoproteincholesterol,LDL C)也有显著降低 (P <0 .0 5 ) ,高密度脂蛋白胆固醇 (highdensitylipoproteincholesterol,HDL C)无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 果柚、橙皮甙能降低血清TC、TG、LDL -C水平。

人HNF1α真核表达载体的构建及表达

目的构建人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor1α,HNF1α)真核表达载体,在体外表达并检测。方法提取HepG2总RNA,用RT-PCR方法制备HNF1α cDNA,进行T-A克隆。HindⅢ/EcoRⅠ双酶切测序正确的重组质粒,回收HNF1α cDNA片段,将其亚克隆于pcDNA3.1(+)载体的多克隆位点内。将构建好的真核表达质粒用脂质体法转染HepG2细胞,RT-PCR和免疫印迹法检测HNF1α的表达。结果正确构建了pcDNA3.1(+)-HNF1α重组载体,并且在转染该质粒的HepG2细胞中检测出了HNF1α的高表达。结论成功地构建了人HNF1α真核表达载体,其可以在体外表达。

医学院校生物化学课程中糖脂代谢章节的教学探讨

糖脂代谢是生物化学课程中的重点、难点内容之一。从概括代谢的学习规律和特点，提出学习方法；针对每章或节设计问题，引起学生注意，激发学习兴趣；指出每一节的目的和意义，使学生从整体上把握学习内容等方面进行了教学探讨，期望能使学生在有限的时间内较好地、全面地、系统地掌握糖脂章节的相关知识。

橙皮苷与芦丁体外抗高密度脂蛋白氧化修饰的作用

目的 :探讨橙皮苷、芦丁体外抗高密度脂蛋白 (highdensitylipoprotein ,HDL)氧化的作用。方法 :采用一次性密度梯度超速离心方法分离血清HDL ,Cu2 + 诱导HDL氧化 ,检测反应体系中的丙二醛 (malondialdehyde ,MDA) ,观察橙皮苷、芦丁对HDL氧化的抑制作用。结果 :橙皮苷、芦丁对Cu2 + 诱导的HDL氧化有明显的抑制作用 ,且呈剂量依赖关系。结论 :橙皮苷、芦丁体外抗HDL的氧化作用是它们抗动脉粥样硬化的机制之一。

乳腺癌miRNAs表达谱检测及初步分析

目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱。结果成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达。结论建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。

乳腺癌细胞中PNRC基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的研究乳腺癌细胞中富含脯氨酸核受体辅活化子(proline-rich nuclear receptor coactivator protein,PNRC)基因启动子CpG岛的甲基化状态及在PNRC转录调节中的作用。方法应用PT-PCR检测PNRC基因在正常乳腺细胞与乳腺癌细胞中的表达情况,并运用"MethPrimer"软件对PNRC启动子区进行分析,预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测PNRC启动子区CpG岛的甲基化状况;PT-PCR及Northern杂交检测乳腺癌细胞经甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dc)作用后,PNRC基因mRNA的表达情况;Westernblot检测5-Aza-dc干预对PNRC蛋白表达的影响;将含PNRC启动子序列的报告质粒转染乳腺癌细胞,再经5-Aza-dc处理后,检测PNRC基因启动子的活性。结果PNRC基因在乳腺癌细胞中的表达较正常乳腺细胞明显降低;乳腺癌细胞PNRC基因启动子区存在CpG岛甲基化;乳腺癌细胞经5-Aza-dc处理后,PNRC基因mRNA及蛋白表达水平显著增加,其PNRC基因启动子的活性也明显增强。结论PNRC基因启动子区的高甲基化导致PNRC在乳腺癌细胞中表达降低。

应用微阵列比较基因组杂交技术产前检测室间隔缺损胎儿2p16.3微缺失的临床研究

目的了解心脏室间隔缺损胎儿基因组拷贝数变化,寻找其致病的遗传学基础,探讨微阵列基因组杂交技术在产前诊断中应用的可行性。方法用G显带核型分析技术分析胎儿及其父母外周血染色体,用微阵列比较基因组杂交技术(ArrayCGH)进行患儿及其父母DNA拷贝数变异分析,经数据库比对和文献分析明确异常缺失区域的病理意义。结果患儿父母外周血染色体核型分析未见异常;Array-CGH检测患儿发现染色体2p16.3区存在640×103 bp的缺失,15q11区存在2 028×103 bp的缺失,20p13区存在535×103 bp的重复。结论经查数据库及相关文献发现染色体2p16.3区域微缺失可能与胎儿室间隔缺损相关。

人PNRC基因启动子的初步鉴定

PNRC(proline-rich nuclear receptor coactivator)是最近发现的一种新的核受体辅活化子,它是以牛类固醇生成因子-1(SF1)作诱饵,利用酵母双杂系统从人乳腺cDNA表达文库中筛选得到的.为了研究人PNRC基因的表达调控机制,在对人PNRC基因的生物信息分析的基础上,采用5′RACE法确定了PNRC基因的转录起始位点,克隆了人PNRC基因的5′侧翼区,并对该区进行功能分析.分别构建了11种含不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒,将它们瞬时转染HepG2细胞,检测其荧光素酶活性.结果发现,PNRC的5′侧翼区的-323^+27、-323^+57、-123^+57、-123^+27区域的启动子活性显著升高,其中-323^+27区域的启动子活性最高.研究表明,人PNRC基因启动子的最小区域位于PNRC的5′侧翼区的-123^+27区域.

胆汁酸G-蛋白偶联受体通过p38 MAPK通路诱导巨噬细胞IL-1β、TNF-α和IL-6的转录

目的观察胆汁酸G-蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor for bile acids,TGR5)被齐墩果酸(oleanolicacid,OA)激活后对RAW264.7细胞白细胞介素-1(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)转录的影响及其机制的探讨。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR法检测OA作用不同时间RAW264.7细胞和原代枯否细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达;并进一步分析在RAW264.7细胞中加入3种不同信号通路的抑制剂对上述3种炎症因子mRNA表达的影响。OA作用RAW264.7细胞和原代枯否细胞不同时间后,Western blot分析p38 MAPK的磷酸化水平。结果 OA刺激RAW264.7细胞6、12、24 h后,IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达明显升高。OA作用于分离的原代枯否细胞3 h和6 h后,也可观察到相同的结果。p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可以明显地抑制OA诱导的RAW264.7细胞内IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,但PKA和NF-κB的抑制剂无此作用。RAW264.7细胞和原代枯否细胞经OA刺激后,p38 MAPK磷酸化水平明显增强。结论 TGR5可能通过活化p38 MAPK磷酸化诱导炎症细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,提示TGR5在无其他刺激因素作用下,具有诱导炎症因子表达的作用。

PNRC多肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的:根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2/SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则,我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽(PTD-PARP),研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性。方法:用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD-PARP和其单独的PTD多肽。以PTD多肽为对照,将增加浓度的PTD-PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育,采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况。用PTD-PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物,采用PI3K,Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力。Western blot检测PTD-PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响。采用软琼脂克隆形成实验考察PTD-PARP对BT474细胞体外增殖的影响。结果:PTD-PARP能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合,它与Grb2的结合具有特异性,PTD-PARP能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化,并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成。结论:PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖。

造血干细胞相关microRNAs的筛选及其促分化研究

为了获得人脐血造血干细胞(HSCs)的microRNAs(miRNAs)表达谱,并对相关miRNAs功能进行初步鉴定.利用免疫磁珠(MACS)和流式细胞仪(FACS)细胞分选技术分离人脐血造血干细胞(HSCs),分别提取细胞总RNA并分离小分子RNA,经荧光标记后与miRNAs基因芯片杂交,获得HSCs的miRNAs表达谱,集落形成实验(CFC)研究在HSC中高表达miR-520h对HSC的促分化作用.成功分离人脐血CD34+细胞和HSC,经基因芯片杂交获得31个造血干细胞相关miRNAs,其中22个为低表达,9个为高表达;经实时定量RT-PCR验证miR-520h显著升高,CFC实验表明其可增加多种集落形成,具有促进HSC向祖细胞分化的作用.上述结果表明,人脐血HSC具有自身特征性miRNAs,参与并调控HSC生物学功能,为深入探讨miRNAs在造血系统发育中的作用打下基础.