正交设计优化荷花品种ISSR-PCR反应体系

以东方明珠荷花为试验材料,应用L9(34)正交设计,探讨反应体系中引物、Taq DNA聚合酶等4个不同因素的3个水平对荷花品种反应体系的影响,正交设计所用引物为UBC843,PCR结果应用MINITAB软件进行方差分析和极差分析。结果表明,荷花最佳ISSR-PCR反应体系(25μL):2.5μL 10×buffer,2.0 mmol/L Mg2+,0.20 mmol/L d NTPs,0.40μmol/L引物,20~80 ng模板DNA,1.00 U Taq DNA聚合酶。优化的ISSR-PCR反应体系稳定性高、重复性较好,为从分子水平对荷花品种进行各项研究奠定了基础。