重组鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究

为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV排毒率、带毒时间、在不同组织器官的动态分布及其体液和细胞免疫指标的检测以评价该重组融合蛋白抗IBDV的效果。结果显示:与IBDV攻毒对照组相比,融合蛋白与IBDV同时接种组鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间及排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器官带毒时间均显著低于对照组。但试验组鸡的IBDV抗体水平于7 dpc^42 dpc则极显著低于对照组(p<0.01)。然而,其血清中ChIFN-α、ChIFN-γ、ChIL-2、ChIL-6和ChIL-4表达水平(3 dpc^21 dpc)以及外周血T淋巴细胞(PBLC)增殖活性(7 dpc^21 dpc)、脾淋巴细胞增殖活性(7 dpc^14 dpc)均显著高于对照组(p<0.01)。结果表明:融合蛋白可以通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。

2012年河南省猪流行性腹泻病毒分离株S1基因遗传变异分析

为分析2012年河南省猪流行性腹泻病毒（PEDV）的遗传变异情况，本研究设计合成2对扩增s1基因的特异性引物，利用RT—PCR方法，对2012年分离的5株PEDV毒株的S1基因进行扩增、克隆和序列测定，并对其进行遗传进化分析。结果表明，5株PEDVs1基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98．3％～99．5％和97．1％～98．9％；与2011年以来国内登录的PEDV流行变异株核苷酸同源性为88．6％～98．0％，氨基酸同源性为85．3％～98．7％；与经典毒株cV777核苷酸同源性为88．7％～89．1％，氨基酸同源性为87．3％～88．4％。5株分离株s1基因均存在相同的插入和缺失，与2011年以来国内登录的流行变异毒株相比没有大的变异，但与参考毒株CV777相比，在163l66bp处有3个核苷酸插入；在l73l74bp之间有9个核苷酸插人；在405—406bp之间有3个核苷酸插入；在463464bp之间有3个核苷酸缺失，这些位点核苷酸的插入和缺失导致了其编码的氨基酸相应改变。s1基因系统进化树分析结果表明，5株分离株与2011年以来国内登录的流行变异毒株均属于基因Ⅲ群，与2011年国内登录的少部分PEDV基因Ⅰ群流行毒株的核苷酸同源性为88．6％～89．3％，氨基酸同源性为85．3％～86．9％，而经典毒株CV777所在分支群属于基因Ⅱ群。本试验结果表明，2011年以来，中国流行的PEDV毒株中同时有基因Ⅲ和Ⅰ群的存在，但以基因Ⅲ群毒株为主，其致病性和抗原性差异仍有待进一步研究。

鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。

冬季哺乳仔猪球虫病防控的必要性探究

仔猪球虫病由寄生在仔猪肠道上皮细胞的等孢属球虫和艾美耳属球虫引起,以猪等孢球虫最常见,危害最大。夏天高温高湿,适合猪等孢球虫虫卵繁殖,所以球虫卵囊检出率最高的季节是在夏季,因此规模猪场生产管理过程中往往比较重视夏季防控而忽略冬季哺乳仔猪球虫病的防控,本文通过一例冬季猪场球虫检测情况进行分析探究冬季哺乳仔猪球虫病防控的必要性。

重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对传染性法氏囊灭活疫苗的免疫增强机理研究

为了评价重组鸡白细胞介素-6（rChIL-6）蛋白在鸡体内的免疫增强作用机理,本研究将40只7日龄健康SPF鸡随机平均分为4组以进行rChIL-6蛋白对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）灭活疫苗免疫增强作用试验,于14日龄时进行免疫接种和rChIL-6蛋白注射。分别检测4组鸡免疫前和免疫后不同时间血清中IBDV抗体水平、不同细胞因子表达水平、脾淋巴细胞增殖活性和外周血T淋巴细胞增殖活性等指标以揭示rChIL-6蛋白在机体内对疫苗的免疫增强机理。结果表明：免疫后7~49d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组（第4组）鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组（P〈0.01）;免疫后7~35d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2（ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2）和γ干扰素（ChIFN-γ）等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组（P〈0.01）,α干扰素（ChIFN-α）的表达水平于免疫后14~35d期间极显著高于其他3组对照鸡（P〈0.01）;rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后7~14d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡（P〈0.01）;免疫后7~21d,第4组鸡的外周血T淋巴细胞的增殖活性稍高于其他3组对照组（P〉0.05）。结果表明,rChIL-6在体液免疫和细胞免疫水平对鸡传染性法氏囊灭活疫苗免疫后均具有免疫增强作用;对机体体液免疫应答的增强能力高于细胞免疫应答。

河南省某3000头母猪场育成猪伪狂犬gE抗体转阴案例分析

(一)引言伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)引起的母猪繁殖障碍、仔猪腹泻、神经症状为主要特征的一种烈性传染病;通过基因缺失疫苗的广泛应用,我国的猪伪狂犬病曾得到有效控制;但从2011年开始,我国许多地区出现了新的疫情,一些原本阴性的规模化猪场也纷纷转阳,造成严重的经济损失。近几年来,海博莱(中国)对河南省一些规模猪场进行持续跟踪检测。