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发根农杆菌诱导桑树毛状根体系的建立 被引量:13
1
作者 孔卫青 杨金宏 卢从德 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期2317-2320,共4页
应用发根农杆菌ACCC10060,以直接接种和共培养2种方法侵染桑树10 d龄子叶,并将2种处理的外植体分别接种于MS+AS(乙酰丁香酮,100μmol/L)的平板,暗培养2 d后转接至MS+CS(头孢霉素,200 mg/L)平板培养3周,每3 d转接1次以除去其中所含的发... 应用发根农杆菌ACCC10060,以直接接种和共培养2种方法侵染桑树10 d龄子叶,并将2种处理的外植体分别接种于MS+AS(乙酰丁香酮,100μmol/L)的平板,暗培养2 d后转接至MS+CS(头孢霉素,200 mg/L)平板培养3周,每3 d转接1次以除去其中所含的发根农杆菌菌体,结果2种侵染方法均成功诱导桑树产生毛状根,诱导效率分别为14%和17%。在无激素MS培养基上离体培养除菌后的毛状根,呈现旺盛的生长态势和典型的发状根结构特点。CTAB法提取毛状根基因组并进行PCR检测,结果扩增出了423 bp的rolB基因片段,表明Ri质粒的T-DNA已经成功整合到桑树的基因组中。 展开更多
关键词 桑树 发根农杆菌 毛状根 诱导
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家蚕黄酮合酶Ⅰ基因BmFNS Ⅰ的克隆与干涉载体的构建 被引量:5
2
作者 孔卫青 杨金宏 +1 位作者 彭云武 胡必利 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期26-30,共5页
黄酮类化合物广泛存在于动植物中,具有多种生理活性,黄酮合酶Ⅰ基因可以催化多种黄酮类化合物的生物合成。根据NCBI已登录的其他物种黄酮合酶Ⅰ基因的氨基酸序列,与家蚕基因组和EST数据库进行电子克隆获得家蚕的同源基因BmFNS Ⅰ。克隆... 黄酮类化合物广泛存在于动植物中,具有多种生理活性,黄酮合酶Ⅰ基因可以催化多种黄酮类化合物的生物合成。根据NCBI已登录的其他物种黄酮合酶Ⅰ基因的氨基酸序列,与家蚕基因组和EST数据库进行电子克隆获得家蚕的同源基因BmFNS Ⅰ。克隆测序结果表明该基因长1451 bp,7个外显子。根据基因序列推测其编码蛋白由345个氨基酸构成,179~295间氨基酸为一2-氧戊二酸和Fe(Ⅱ)依赖性的加氧酶家族成员的结构域。RT-PCR检测该基因在本试验所调查的家蚕中肠有高表达。最后将该基因片段亚克隆至具有2个反向T7启动子可以用于体外诱导合成dsRNA的L4440载体。 展开更多
关键词 家蚕 BmFNS Ⅰ基因 克隆 组织表达
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桑树肌动蛋白actin基因全长序列的克隆与分析 被引量:9
3
作者 孔卫青 杨金宏 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期362-366,共5页
肌动蛋白在植物的各种生理活动中起着重要作用,是研究基因表达与调控模式的内标参考。通过染色体步移方法获得了桑树肌动蛋白actin基因1612bp的序列,该基因CDS长1312bp(GenBank登录号:HM623866),编码377个氨基酸残基,与水稻、葡萄等的... 肌动蛋白在植物的各种生理活动中起着重要作用,是研究基因表达与调控模式的内标参考。通过染色体步移方法获得了桑树肌动蛋白actin基因1612bp的序列,该基因CDS长1312bp(GenBank登录号:HM623866),编码377个氨基酸残基,与水稻、葡萄等的同源基因的序列一致性在90%以上。基因内含子的数目及其在基因组上的位置也与水稻、葡萄等的相似。对来自不同物种的24个肌动蛋白基因进行聚类分析的结果显示,基因被分为ClassⅠ和ClassⅡ两个明显的亚群。 展开更多
关键词 桑树 肌动蛋白 染色体步移 克隆 序列分析
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桑花叶萎缩类病毒的检测与序列多态性分析 被引量:3
4
作者 孔卫青 杨金宏 +2 位作者 王蓓 朱晓东 雷晓强 《中国农学通报》 CSCD 2014年第28期306-309,共4页
为调查桑花叶萎缩类病毒的多态性,通过RT-PCR技术分离了安康地区桑花叶型萎缩类病毒,并对其基因组进行了克隆测序和序列分析。结果获得4个MMDVd变体,核苷酸长度为356 nt或357 nt,GC含量均约51%,Mfold网站预测二级结构两端为分枝状结构,... 为调查桑花叶萎缩类病毒的多态性,通过RT-PCR技术分离了安康地区桑花叶型萎缩类病毒,并对其基因组进行了克隆测序和序列分析。结果获得4个MMDVd变体,核苷酸长度为356 nt或357 nt,GC含量均约51%,Mfold网站预测二级结构两端为分枝状结构,其中约有58%的碱基配对。 展开更多
关键词 桑花叶萎缩类病毒 检测 序列多态性 二级结构
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家蚕糖转运蛋白BmST1基因的克隆与序列分析 被引量:3
5
作者 孔卫青 杨金宏 卢从德 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第15期1-5,共5页
糖转运蛋白运输葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖等透过细胞膜为机体提供能量。根据GenBank已登陆的其他物种的糖转运蛋白序列与家蚕基因组框架图和EST序列获得家蚕同源糖转运蛋白基因BmST1。基因编码区长1392bp(GenBank登录号:FJ373021),编... 糖转运蛋白运输葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖等透过细胞膜为机体提供能量。根据GenBank已登陆的其他物种的糖转运蛋白序列与家蚕基因组框架图和EST序列获得家蚕同源糖转运蛋白基因BmST1。基因编码区长1392bp(GenBank登录号:FJ373021),编码463个氨基酸,预测蛋白分子质量为51.635kDa。序列分析显示基因有2个外显子,含有11个跨膜结构域。RT-PCR表明该基因仅在此文所检测的家蚕丝腺中表达。 展开更多
关键词 家蚕 糖转运蛋白 BmST1基因 克隆 序列分析
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3种微生物诱导的家蚕attacin基因异常表达形式的研究(英文) 被引量:5
6
作者 孔卫青 杨金宏 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第6期142-145,共4页
[Objective] The aim of this research was to study the expression of silkworm attacin gene induced by some different microorganisms.[Method] Three kinds of microorganism,BmNPV,JM109 and Agrobacterium LBA4404,were inges... [Objective] The aim of this research was to study the expression of silkworm attacin gene induced by some different microorganisms.[Method] Three kinds of microorganism,BmNPV,JM109 and Agrobacterium LBA4404,were ingested to silkworm and the expression profile of attacin gene in hemocyte and fat body was detected by semi-quantitative PCR.And subsequently,the PCR products were cloned and sequenced for further analysis.[Result] A specific band,about 800 bp,appeared in fat body of all induced silkworms.As indicated by the results of cloning and sequencing(GenBank accession number:FJ373019),the band was produced because the 2 introns existing in normal expression form were not spliced.Furthermore,when the extended expression sequence was translated into amino acids,the translation stopped earlier by the stop codon TGA at the 5' end of the first intron of the original sequence,leading the loss of attacin C terminus.[Conclusion] There were two splicesomes of attacin gene,which had reference value to study the role of the attacin gene in silkworm immunity. 展开更多
关键词 SILKWORM ATTACIN Induced expression SPLICING IMMUNITY
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家蚕BmNaPi基因的克隆表达与酵母穿梭表达质粒的构建 被引量:3
7
作者 孔卫青 杨金宏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期51-55,共5页
磷酸盐是蚕必需的无机物,钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白(Na(+)-dependent phosphate cotransporter,Na-Pi)调节磷酸盐在生物体内的代谢和转运。本研究通过生物信息学分析和分子生物学试验获得了家蚕NaPi的同源基因BmNaPi,该基因位于家蚕... 磷酸盐是蚕必需的无机物,钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白(Na(+)-dependent phosphate cotransporter,Na-Pi)调节磷酸盐在生物体内的代谢和转运。本研究通过生物信息学分析和分子生物学试验获得了家蚕NaPi的同源基因BmNaPi,该基因位于家蚕8号染色体,编码区长1 437 bp,有10个外显子,编码478个氨基酸,预测蛋白序列在氨基末端含有一信号肽,序列中间有8个转膜结构域,与登录号为AAF57968、XP_001602874、EAA00281、XP_393759、XP_001950194等同源蛋白的一致性均在70%及以上。RT-PCR检测该基因在5龄3 d家蚕幼虫9种组织中的血液、体壁、生殖腺和头中表达,而中肠、丝腺、马氏管和脂肪体中没有表达。最后成功构建了该基因的酵母穿梭表达质粒pG-BKT7-BmNaPi。 展开更多
关键词 家蚕 BmNaPi 克隆 组织表达 酵母穿梭表达质粒
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家蚕MYST组蛋白乙酰转移酶基因Bm-mof的克隆表达和转录活性检测 被引量:1
8
作者 孔卫青 杨金宏 朱勇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期215-221,共7页
MYST组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase,HAT)广泛存在于从酵母到人的真核生物中,在真核生物的转录调控中起着重要的作用。利用NCBI已登录的其他物种该基因的氨基酸序列与家蚕的基因组框架图和表达序列标签(expres sedsequence... MYST组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase,HAT)广泛存在于从酵母到人的真核生物中,在真核生物的转录调控中起着重要的作用。利用NCBI已登录的其他物种该基因的氨基酸序列与家蚕的基因组框架图和表达序列标签(expres sedsequence tags,EST)数据库进行电子克隆,获得了家蚕中的同源基因。该基因长1575bp(GenBank登录号为DQ442997),开放阅读框(ORF)长1326bp,无内含子。基因编码442个氨基酸,预测蛋白质的分子量为51.4kD。序列中有HAT核心结构域、锌指结构域和染色质域3个保守的结构域,与其他物种同源基因具有较高的序列相似性。RT-PCR结果表明该基因在本实验所检测的家蚕各时期和组织中均有表达。将该基因用亚克隆的方法导入到pET50b载体中并成功地进行了原核表达,表达出了带有6个组氨酸和1个Nus.Tag标签的重组蛋白。 展开更多
关键词 家蚕 MYST组蛋白乙酰转移酶 克隆 序列分析 表达谱
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家蚕糖转运蛋白基因BmST3的克隆及序列分析与表达研究 被引量:2
9
作者 孔卫青 杨金宏 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期604-609,共6页
糖转运蛋白在家蚕体内糖类化合物的转运与代谢过程中发挥重要作用。在电子克隆的基础上,通过RT-PCR方法克隆了家蚕糖转运蛋白基因BmST3(GenBank登录号:GQ871756)。生物信息学分析结果显示,该基因位于家蚕27号染色体,开放阅读框(ORF)长14... 糖转运蛋白在家蚕体内糖类化合物的转运与代谢过程中发挥重要作用。在电子克隆的基础上,通过RT-PCR方法克隆了家蚕糖转运蛋白基因BmST3(GenBank登录号:GQ871756)。生物信息学分析结果显示,该基因位于家蚕27号染色体,开放阅读框(ORF)长1434bp,编码477个氨基酸,预测蛋白有典型的Sugar_tr结构域和12个疏水的跨膜结构域,与埃及伊蚊、致倦库蚊、冈比亚按蚊、赤拟谷盗登录号分别为EAT47626、EDS35465、EAA11457、EFA05337的同源蛋白相似性均在60%以上。RT-PCR检测和基因芯片信号值分析结果显示,BmST3基因的表达具有组织特异性,在家蚕5龄第3天幼虫的9种组织中,主要在马氏管中大量表达,推测其可能在马氏管细胞膜内外物质的跨膜转运中发挥作用。 展开更多
关键词 家蚕 糖转运蛋白基因ST3 克隆 序列分析 组织表达
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桑花叶型萎缩病病原的检测与序列分析 被引量:3
10
作者 孔卫青 杨金宏 《中国农学通报》 CSCD 2012年第36期237-240,共4页
旨在获得安康地区桑花叶萎缩病病原序列,为桑花叶萎缩病的防治提供更多的信息。用RT-PCR技术对安康地区染花叶型萎缩病病株的病原进行了分离,克隆测序并在Mfold网站预测其二级结构。该病的病原为桑花叶萎缩类病毒MMDVd-201110151(GenBan... 旨在获得安康地区桑花叶萎缩病病原序列,为桑花叶萎缩病的防治提供更多的信息。用RT-PCR技术对安康地区染花叶型萎缩病病株的病原进行了分离,克隆测序并在Mfold网站预测其二级结构。该病的病原为桑花叶萎缩类病毒MMDVd-201110151(GenBank登录号:JQ809700),核苷酸长度357bp,GC含量50.7%,219bp后38个碱基与樱桃小圆形类病毒样核糖核酸具有约85%的一致性。Mfold网站预测二级结构有58.3%的碱基配对,两端为分枝状结构。成功分离到安康地区桑花叶型萎缩病病原。 展开更多
关键词 桑花叶型萎缩病 类病毒 序列分析 二级结构
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切割桑花叶萎缩类病毒的12串联体核酶基因克隆与转录载体构建 被引量:1
11
作者 孔卫青 杨金宏 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期638-642,共5页
通过人工合成和PCR扩增,克隆特异性切割桑花叶萎缩类病毒RNA的12串联体核酶基因,用于控制病毒基因的表达。将桑花叶萎缩类病毒正链RNA上10 nt的靶序列连接在锤头型核酶催化区3'端,构成具有自切割功能的核酶基因。克隆该核酶基因并... 通过人工合成和PCR扩增,克隆特异性切割桑花叶萎缩类病毒RNA的12串联体核酶基因,用于控制病毒基因的表达。将桑花叶萎缩类病毒正链RNA上10 nt的靶序列连接在锤头型核酶催化区3'端,构成具有自切割功能的核酶基因。克隆该核酶基因并将其连接于载体pMD18T-SP6。在SP6 RNA聚合酶的作用下对线性化的重组质粒进行体外转录,体外自切割反应显示转录的多体自切割核酶可以通过内部的顺式切割释放出核酶分子。同时,将该12串联体核酶基因导入双元质粒pBI121中,获得重组植物转录载体pBI121-12MRz,为进一步培育抗桑花叶型萎缩病的转基因桑树奠定了基础。 展开更多
关键词 桑花叶型萎缩病 类病毒 12串联体核酶基因 转录载体 切割活性
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克雷伯氏菌果胶酸裂解酶基因K-PGL的获取与序列分析 被引量:1
12
作者 孔卫青 杨金宏 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期274-278,共5页
【目的】研究克雷伯氏菌果胶酸裂解酶基因K-PGL的序列特征及其编码产物的理化性质、结构特征及同源性等。【方法】根据同源序列相似性设计引物,利用PCR、染色体步移等技术获得了基因序列,并对基因信号肽,疏水性和结构域等进行了分析。... 【目的】研究克雷伯氏菌果胶酸裂解酶基因K-PGL的序列特征及其编码产物的理化性质、结构特征及同源性等。【方法】根据同源序列相似性设计引物,利用PCR、染色体步移等技术获得了基因序列,并对基因信号肽,疏水性和结构域等进行了分析。【结果】获得克雷伯氏菌2395 bp序列,其中K-PGL基因开放阅读框1710 bp,编码569个氨基酸,分子质量63.37 kDa,等电点7.17。编码蛋白具有信号肽酶切割位点,效率为0.864,序列中不含有半胱氨酸Cys,平均疏水指数为-0.449,为稳定存在的亲水蛋白。基因编码的蛋白具有内切聚半乳糖醛酸裂解酶基因家族特有的保守结构域,进化上与产酸克雷伯氏菌亲缘关系最近。【结论】获得了K-PGL基因序列及其特征,为进一步研究果胶酸裂解酶的生物学功能和应用提供依据。 展开更多
关键词 果胶酸裂解酶 克雷伯氏菌属 进化 序列分析
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家蚕糖转运蛋白BmST5基因的克隆与转录活性检测 被引量:1
13
作者 孔卫青 杨金宏 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第8期126-129,共4页
根据GenBank已登陆的糖转运蛋白序列与家蚕基因组框架图和EST序列,获得家蚕同源糖转运蛋白基因BmST5。基因编码区长1 527 bp,编码508个氨基酸,预测蛋白分子质量为55.67 kD。序列分析结果显示,该基因有典型的Sugar_tr结构域和12个疏水的... 根据GenBank已登陆的糖转运蛋白序列与家蚕基因组框架图和EST序列,获得家蚕同源糖转运蛋白基因BmST5。基因编码区长1 527 bp,编码508个氨基酸,预测蛋白分子质量为55.67 kD。序列分析结果显示,该基因有典型的Sugar_tr结构域和12个疏水的跨膜结构域,与体虱等同源蛋白的一致性在50%以上。RT-PCR结果表明,该基因仅在家蚕的马氏管、生殖腺和头中有表达,在中肠、丝腺、血液、体壁和脂肪体中不表达。 展开更多
关键词 家蚕 糖转运蛋白 BmST5基因 克隆
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家蚕抗菌肽enbocin基因的一种异常选择性剪接方式 被引量:3
14
作者 孔卫青 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期46-49,共4页
抗菌肽是昆虫抵御外界微生物侵染的主要物质。研究了家蚕经大肠杆菌(JM109)、农杆菌(LBA4404)和家蚕核型多角体病毒(BmNPV)3种外源微生物诱导后,抗菌肽enbocin基因在蚕体血液和脂肪体中的表达。3种外源微生物诱导前、后,抗菌肽enbocin... 抗菌肽是昆虫抵御外界微生物侵染的主要物质。研究了家蚕经大肠杆菌(JM109)、农杆菌(LBA4404)和家蚕核型多角体病毒(BmNPV)3种外源微生物诱导后,抗菌肽enbocin基因在蚕体血液和脂肪体中的表达。3种外源微生物诱导前、后,抗菌肽enbocin基因在蚕体血液中的表达均较弱。在蚕体脂肪体中,抗菌肽enbocin基因的表达在BmNPV诱导前、后差异不大;而JM109、LBA4404菌株诱导后则均出现特异性表达,且特异表达形式的表达量与正常表达具有补偿作用。克隆测序正常转录和诱导后特异转录的条带(GenBank:FJ373019),发现特异转录形式是由于正常表达形式的外显子/内含子的剪接位点发生变化,使2个外显子的序列均包括了中间内含子的部分序列所致,序列的改变也使得特异转录的抗菌肽enbocin基因的翻译发生提前终止,缺失了基因C末端cecropin结构序列。 展开更多
关键词 家蚕 抗菌肽 enbocin基因 选择性剪接
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不同品种桑树根与毛状根总黄酮含量比较 被引量:6
15
作者 孔卫青 《山西农业科学》 2015年第7期828-830,876,共4页
为比较桑树毛状根与不同品种桑树根总黄酮含量的差异,以芦丁为标准品,用分光光度法(波长选择510 nm),以Na NO2-Al(NO3)3-Na OH显色法,对毛状根和陕桑305、湖桑32、沙2、蒙桑4个桑树品种的桑树根总黄酮含量进行了测定。结果发现,桑树毛... 为比较桑树毛状根与不同品种桑树根总黄酮含量的差异,以芦丁为标准品,用分光光度法(波长选择510 nm),以Na NO2-Al(NO3)3-Na OH显色法,对毛状根和陕桑305、湖桑32、沙2、蒙桑4个桑树品种的桑树根总黄酮含量进行了测定。结果发现,桑树毛状根的总黄酮含量最高,为3.28%,其由高到低依次为毛状根>蒙桑根>沙2根>湖桑32根>陕桑305根;差异显著性检验发现,除湖桑32和陕桑305之间差异不显著外,其他样品之间差异均达显著水平。 展开更多
关键词 桑树 毛状根 总黄酮
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家蚕含染色质域基因Bm-msl3的克隆和转录活性检测
16
作者 孔卫青 杨金宏 +1 位作者 艾均文 朱勇 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期181-186,共6页
染色质域是从酵母到哺乳动物的真核生物中普遍存在的一个保守的基因元件,参与染色质重组和基因表达调节。根据NCB I登录的果蝇和人的MSL3序列以及家蚕的基因组与EST数据库克隆了家蚕含染色质域的基因Bm-msl3(GenBank登陆号:DQ887343)。... 染色质域是从酵母到哺乳动物的真核生物中普遍存在的一个保守的基因元件,参与染色质重组和基因表达调节。根据NCB I登录的果蝇和人的MSL3序列以及家蚕的基因组与EST数据库克隆了家蚕含染色质域的基因Bm-msl3(GenBank登陆号:DQ887343)。该基因mRNA序列全长2 356 bp,在2 168 bp处有1个AAATATTA加尾信号,基因的编码区长1 665 bp,包括13个外显子。推定的蛋白质编码554个氨基酸,序列的N端含有一个保守染色质域。RT-PCR检测表明该基因在所调查的家蚕发育时期和组织中均有表达。 展开更多
关键词 家蚕 Bm-msl3基因 染色质域 转录活性
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家蚕Bm-mrg15基因的克隆与序列分析
17
作者 孔卫青 杨金宏 朱勇 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期56-61,共6页
含MRG结构域的基因大多在基因的转录调节中起着重要作用.利用电子克隆,在家蚕中得到了一个含MRG结构域的基因Bm-MRG15,并对其进行了克隆测序和序列分析.该基因cDNA长1113bp,有6个外显子,编码区长1020bp,序列的1091bp处有2个重叠的poly(A... 含MRG结构域的基因大多在基因的转录调节中起着重要作用.利用电子克隆,在家蚕中得到了一个含MRG结构域的基因Bm-MRG15,并对其进行了克隆测序和序列分析.该基因cDNA长1113bp,有6个外显子,编码区长1020bp,序列的1091bp处有2个重叠的poly(A)加尾信号.推定的蛋白质编码339个氨基酸,N端含有一个染色质域,序列内有5个保守的结构域.RT-PCR显示该基因在所检测家蚕的各时期和组织中均有表达. 展开更多
关键词 家蚕 MRG域 染色质域 外显子/内含子
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桑青枯雷尔氏菌MR111的腺苷酸激酶adk基因的克隆和序列分析
18
作者 孔卫青 程煜 陈冰洁 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期143-145,共3页
腺苷酸激酶是广泛存在的一种重要的核苷酸激酶。进行PCR扩增和克隆测序获得桑青枯雷尔氏菌MR111的腺苷酸激酶adk基因长502 bp的序列,NCBI在线BLAST分析其与大肠杆菌、流感嗜血杆菌同源基因的相似性在80%以上,序列编码蛋白有腺苷酸激酶... 腺苷酸激酶是广泛存在的一种重要的核苷酸激酶。进行PCR扩增和克隆测序获得桑青枯雷尔氏菌MR111的腺苷酸激酶adk基因长502 bp的序列,NCBI在线BLAST分析其与大肠杆菌、流感嗜血杆菌同源基因的相似性在80%以上,序列编码蛋白有腺苷酸激酶保守的AMP结合结构域和LID结构域,为长型腺苷酸激酶。聚类分析结果表明,该基因与其他细菌的同源基因聚合在同一分支。 展开更多
关键词 桑青枯雷尔氏菌MR111 腺苷酸激酶 克隆 序列分析
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侵染小构树的双生病毒及其缺陷DNA形式的检测和特征分析
19
作者 孔卫青 杨金宏 +2 位作者 凌君 楚渠 孟刚 《山东农业科学》 北大核心 2022年第9期131-136,共6页
为明确侵染小构树(Broussonetia kazinoki)并引起叶片黄化卷曲症状的病毒种类及其基因组特征,本研究利用转录组高通量测序技术获得病毒基因组,利用PCR扩增和基因克隆技术对病毒基因组及其缺陷DNA进行鉴定。结果表明,通过转录组高通量测... 为明确侵染小构树(Broussonetia kazinoki)并引起叶片黄化卷曲症状的病毒种类及其基因组特征,本研究利用转录组高通量测序技术获得病毒基因组,利用PCR扩增和基因克隆技术对病毒基因组及其缺陷DNA进行鉴定。结果表明,通过转录组高通量测序和无参组装,获得引起小构树叶片黄化卷曲的双生病毒,命名为小构树卷叶病毒2(Kozo leaf curl virus 2,KozoLCV-2)。进一步克隆测序获得的KozoLCV-2基因组全长为3756~3758 bp,其与构树卷叶病毒(Paper mulberry leaf curl virus 2,PMLCV-2)具有相同的基因组结构和较高的序列一致性;病毒正义链编码4个ORF(V1、V2、V3和V4),互补链编码2个(C1和C1:C2),互补链存在选择性剪接。PCR扩增和克隆测序获得了10种KozoLCV-2的缺陷DNA(defective DNA,D-DNA)形式,其中9种完全或部分缺失复制酶区域,4种形式的D-DNAs与来自PMLCV-2-TL RepA第二外显子末端的序列发生了重组。 展开更多
关键词 小构树 转录组 小构树卷叶病毒2 分子特征 缺陷DNA
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家蚕UDP葡萄糖基转移酶Bmugt2基因的克隆与RNA干涉(英文)
20
作者 孔卫青 杨金宏 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期693-698,共6页
糖基化在大多体内复合物的失活和排出过程中起重要的作用。报道家蚕一UDP葡萄糖基转移酶基因Bmugt2的特征和可能的功能。该基因编码序列长1 578 bp(登录号:FJ237534),翻译525个氨基酸,推定的氨基酸与UGT家族的其它氨基酸有约30%的一致性... 糖基化在大多体内复合物的失活和排出过程中起重要的作用。报道家蚕一UDP葡萄糖基转移酶基因Bmugt2的特征和可能的功能。该基因编码序列长1 578 bp(登录号:FJ237534),翻译525个氨基酸,推定的氨基酸与UGT家族的其它氨基酸有约30%的一致性。RT-PCR检测该基因主要在家蚕丝腺中表达,应用体外转录合成的基因dsRNA干涉家蚕后,丝腺中基因的表达明显降低,但对家蚕茧色无明显的可见影响。 展开更多
关键词 家蚕 UDP葡萄糖基转移酶 RNA干涉 微量注射
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