TFEB扩增的肾细胞癌2例病例报告

TFEB基因扩增的肾细胞癌是一种罕见的肾癌亚型,2014年由Peckova等[1]首次报道,国内相关文献报道极少。该肿瘤好发于老年人,具有独特的组织学形态特征以及高度侵袭的生物学行为,患者生存率低,治疗以根治性手术切除为主。该肾细胞癌的特征性分子改变是存在高水平TFEB基因的拷贝数增加[2]。

肺癌患者外周血中 MDR －1及 MRP 基因在化疗前后的表达及意义

目的：探讨肺癌患者化疗前后外周血淋巴细胞中多药耐药基因（ MDR－1）和多药耐药相关蛋白（ MRP）的表达及意义。方法分别于化疗开始前及化疗周期结束后第3周收集肺癌患者外周血标本。采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法检测39例肺癌患者外周血中MDR－1mRNA和MRP mR-NA的表达情况，并与20例健康体检者进行对比。结果病例组化疗前MDR－1 mRNA和MRP mRNA的阳性表达率与健康对照组相比差异没有统计学意义（P＞0．05）；各种病理类型的肺癌患者外周血MDR－1mRNA和MRP mRNA的阳性表达水平随着化疗次数的增多而增强，其中小细胞肺癌患者化疗后MDR－1 mRNA和MRP mRNA的表达水平均高于化疗前，差异具有统计学意义。结论化疗可诱导肺癌患者外周血淋巴细胞MDR－1mRNA和MRP mRNA的表达水平增强；应用外周血评估MDR－1mRNA和MRP mRNA的方法简单可靠，创伤性小，可能成为预估肺癌患者化疗疗效的有效指标。

mdr-1基因表达的荧光定量RT-PCR法检测

目的:建立用实时荧光定量RT-PCR法在mRNA水平上检测肿瘤细胞中多药耐药基因(mdr-1基因)表达的方法。方法:利用RT-PCR方法从耐药肿瘤细胞MCF-7/ADR中扩增出目的基因片段,用TA克隆的方法将基因片段插入到PGEM-T质粒载体中,在Line-gene荧光定量检测系统上建立检测mdr-1基因表达的标准曲线。结果:成功构建了mdr-1基因的质粒重组子,建立了在mRNA水平定量检测mdr-1基因的标准曲线,相关系数为0.997,可稳定检测出40μL体系中102拷贝数的模板。重复5次实验组内和组间变异系数均<1.0%。结论:用基因克隆法可快速准确地构建mdr-1基因的标准曲线,定量检测mdr-1基因的表达,简单易行,重现性好。

液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片方法学的建立及免疫组化染色应用

目的应用液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片,以期建立更加简单直观且能够与分子生物学相结合的外周血淋巴细胞形态学检查方法。方法利用Ficoll-hypaque密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞,液基细胞保存液中过夜保存,液基薄层涂片技术制作细胞涂片,并通过SP免疫组化染色观察T淋巴细胞及B淋巴细胞表面抗原CD3和CD20在涂片淋巴细胞中的表达,并通过表达部位获取两种抗原的免疫表型保存情况。结果对5名健康者外周静脉血制作淋巴细胞涂片,淋巴细胞获得率达95%以上,形态保存完好,SP免疫组化法显示,CD3和CD20抗原均清晰表达在相应淋巴细胞亚群的细胞膜上,通过免疫组化法计数的淋巴细胞亚群比例和文献结果相一致。结论与传统外周血手工涂片相比,液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片可快速有效地应用于外周血淋巴细胞形态学观察和免疫组化染色,对临床淋巴细胞亚群分类、淋巴瘤分型及预后判断有重要的应用价值。

乳腺癌中淋巴管生成与SOX2和血管内皮生长因子-C的关系

目的探讨乳腺癌中淋巴管生成与SOX2和血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的关系,以及SOX2、VEGF-C、淋巴管生成与乳腺癌临床病理参数的关系。方法收集青岛市市立医院病理科2013年1月~2014年4月乳腺癌组织标本90例,采用免疫组化SP法检测各乳腺癌组织中SOX2、VEGF-C及Podoplanin的表达。比较分析不同临床分期及病理组织学分级的乳腺癌组织中SOX2、VEGF-C及淋巴管密度值（LVD）的表达情况。结果 90例乳腺癌组织中,淋巴结转移者SOX2、VEGF-C和LVD的阳性率分别为84.62%、76.92%和61.54%,高于无淋巴结转移者（44.00%、48.00%、32.00%）,差异均有统计学意义（χ2=15.23、7.05、6.33,P=0.00、0.01、0.01）。组织学分级Ⅱ~Ⅲ级者SOX2、VEGF-C的阳性率分别为82.35%、76.47%,高于组织学分级Ⅰ级者（45.45%、45.45%）,差异均有统计学意义（χ2=11.57、7.46,P=0.00、0.01）。SOX2、VEGF-C阳性者LVD阳性率分别为60.60%和61.29%,高于SOX2、VEGF-C阴性者（33.33%、35.71%）,差异均有统计学意义（χ2=5.26、5.07,P=0.02、0.02）。SOX2阳性者VEGF-C阳性率为75.76%,高于SOX2阴性者（50.00%）,差异有统计学意义（χ2=5.45,P=0.02）。结论 SOX2、VEGF-C、LVD阳性表达提示肿瘤的高侵袭性,且三者间均存在一定的相关性。SOX2在肿瘤中可能通过促进VEGF-C分泌诱导淋巴管生成。

小细胞肺癌组织中神经细胞黏附分子、嗜铬蛋白A及突触素的表达及临床相关分析

目的检测神经细胞黏附分子(NCAM/CD56)、嗜铬蛋白A(CgA)及突触素(Syn)在小细胞肺癌(SCLC)组织中的表达,探索其在SCLC组织中表达的意义与价值。方法应用组织反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学方法检测CD56、CgA及Syn在15例SCLC、15例非小细胞肺癌(NSCLC)和10例正常组织中的表达,并应用Fisher确切概率法检验分析表达结果。结果 CD56、CgA、Syn基因在SCLC组织中表达的阳性率高于NSCLC及正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05);3项指标联合检测SCLC的敏感性为93.3%,特异性为96.0%,准确性为90.0%;CgA基因在SCLC广泛期的表达(77.8%)高于局限期的表达(0.0%),在有淋巴结转移组织的表达(70.0%)高于无淋巴结转移组织的表达(0.0%)。CD56和Syn蛋白在SCLC组织中的表达高于NSCLC组织和正常组织(P<0.05);但是CgA蛋白在SCLC、NSCLC及正常组织中表达的阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CD56、CgA、Syn的检测对SCLC的诊断具有重要意义,CgA基因的表达水平可以间接反映SCLC分期。

荧光定量RT-PCR检测OATP-E基因表达

目的:建立荧光定量RT-PCR检测肿瘤细胞有机阴离子转运多肽E(organic anion transportingpolypeptide-E,OATP-E)mRNA的方法,了解乳腺癌细胞株MCF-7和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中OATP-E mRNA的表达水平。方法:构建重组质粒,绘制荧光定量RT-PCR检测OATP-E mRNA的标准曲线,并运用此方法检测MCF-7/ADR和MCF-7细胞株中OATP-E mRNA的表达。结果:荧光定量RT-PCR检测MCF-7和MCF-7/ADR细胞OATP-E的基因表达,重复10次实验所得结果平均分别为5.47×105拷贝数/μgRNA和2.82×104拷贝数/μg RNA,两者相差约19.4倍,P<0.05。结论:成功建立了荧光定量RT-PCR检测OATP-E基因表达的方法,检测结果用绝对拷贝数表示,定量准确可靠,并有利于标准的统一。初步应用发现乳腺癌耐药株MCF-7/ADR中OATP-E mRNA的表达量比不耐药株MCF-7减少。

乳腺癌中SOX2表达与血管生成的关系及意义

目的探讨乳腺癌中SOX2表达与血管生成的关系及意义。方法采用免疫组化SP法检测90例乳腺癌中SOX2的表达，并用CD105标记血管。结果SOX2阳性率、MVD值在淋巴结转移组为84．6％、11．51±2．11，无淋巴结转移组为44％、10．00±1．63，差异显著（P〈0．01）。SOX2阳性率、MVD值在组织学分级Ⅱ～Ⅲ组为82．4％、11．40±2．13（P〈0．01），I级组为45．5％、10．14±1．67（P〈0．05），差异均显著。MVD值在SOX2阳性组为11．62±2．05，阴性组为9．63±1．41，差异显著（P〈0．01）。结论SOX2阳性提示肿瘤的高侵袭性。SOX2可能通过促进血管生成导致肿瘤淋巴结转移。

肺癌组织P-gp、GST-Ⅱ和TOPO-Ⅱ表达及与Ki-67相关性

目的探讨多药耐药(MDR)基因产物P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶Ⅱ(GST-Ⅱ)、DNA拓扑异构酶(TOPO-Ⅱ)在肺癌组织中的表达及其与细胞核增殖抗原(Ki-67)相关性。方法采用免疫组织化学方法检测63例肺癌组织中P-gp、GST-Ⅱ、TOPO-Ⅱ和Ki-67的表达情况。结果 P-gp、GST-Ⅱ、TOPO-Ⅱ和Ki-67在肺癌组织中的阳性表达率分别为61.9%、63.5%、77.8%和39.7%。P-gp、GST-Ⅱ、Ki-67的表达与肺癌病理组织学分型、分化程度有关(χ2=6.733～22.532,P<0.01)。TOPO-Ⅱ在鳞癌和小细胞癌中的阳性表达率明显高于腺癌(χ2=8.259、4.189,P<0.01、0.05)。两个或两个以上MDR基因产物共表达率合计为90.5%,明显高于单独基因产物P-gp和TOPO-Ⅱ的表达率(χ2=59.660,P<0.01)。P-gp、GST-Ⅱ的表达与Ki-67之间无显著相关性(P>0.05),TOPO-Ⅱ的表达与Ki-67呈明显正相关(r=0.380,P<0.01)。结论 P-gp、GST-Ⅱ、TOPO-Ⅱ在不同肺癌类型中均有不同水平表达,且呈共同表达,它们的表达对肺癌的耐药起重要作用,因此联合检测有助于判断化疗疗效及预后。

心源性猝死者窦房结组织病理学观察及其Cx40和Cx45表达与意义

目的观察心源性猝死者窦房结病理学改变及连接蛋白Cx40、Cx45的表达及其意义。方法应用苏木精-伊红染色及Masson染色方法,对14例心源性猝死者的窦房结组织进行病理学观察,并行Cx40、Cx45免疫组织化学染色。以交通事故损伤致死8例、心脏破裂4例、肝破裂3例、脾破裂2例(共17例)作为对照组。结果两组窦房结组织病理改变相比较无明显差异。心源性猝死者窦房结Cx40和Cx45表达与对照组相比均显著减少,差异有显著性(Z=3.548、2.757,P<0.01),且两者呈正相关(r=0.551、0.562,P<0.05)。结论心脏传导系统病理改变是引起心源性猝死的重要原因之一,Cx40和Cx45表达的改变与心源性猝死的发生显著相关。

小细胞肺癌组织CD56、CgA、Syn及TTF-1表达及联合诊断意义

目的研究神经细胞黏附分子(CD56)、嗜铬蛋白A(CgA)、突触素(Syn)与甲状腺转录因子-1蛋白(TTF-1)在小细胞肺癌(SCLC)中的表达,探讨其表达在SCLC中的意义及联合诊断价值。方法应用免疫组化SP法,检测CD56、CgA、Syn及TTF-1在62例SCLC及40例非小细胞肺癌(NSCLC)(包括腺癌22例,鳞癌12例,大细胞癌6例)组织中的表达,并对表达结果进行分析。结果 SCLC组织中CD56、CgA、Syn及TTF-1的阳性表达率分别为93.5%、9.7%、87.1%、80.6%;NSCLC组织中CD56、CgA、Syn及TTF-1的阳性表达率分别为7.5%、0、15.0%、47.5%。CD56、Syn及TTF-1在SCLC与NSCLC组织中的阳性表达率比较差异均有显著性(χ2=12.21～74.89,P<0.01);CgA在两者中的阳性表达率比较差异无显著性(P>0.05)。SCLC中4项指标的表达在不同病理学参数间差异均无显著性(P>0.05)。结论 CD56、CgA、Syn及TTF-1在SCLC与NSCLC组织中的表达存在差异,其联合检测对SCLC的诊断有重要价值。

肥厚型心肌病患者超极化激活环核苷酸门控阳离子通道mRNA的表达

目的探讨肥厚型心肌病患者超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN4)的表达。方法构建重组质粒,用梯度稀释的质粒模板建立SYBRGreen荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测HCN4的标准曲线,利用建立的RT-PCR体系对肥厚型心肌病和正常心肌组织标本的左室HCN4mRNA进行检测。结果成功构建了质粒重组子,并建立用SYBRGreen荧光染料在RNA水平检测HCN4通道的标准曲线。HCN4通道在肥厚型心肌病中的表达水平高于正常心肌。结论肥厚型心肌病患者HCN4mRNA的表达较正常人增高。

采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道

目的建立用SYBR Green荧光染料检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN4)的实时定量RT-PCR方法。方法提取窦房结细胞的总RNA,反转录成cDNA后,应用RT-PCR法检测HCN4的表达,通过琼脂糖凝胶回收PCR产物并构建重组质粒,用梯度稀释的质粒模板建立荧光定量RT-PCR法检测HCN4的标准曲线,并检测心脏组织中HCN4的表达水平。结果成功构建了质粒重组子,并建立用SYBR Green荧光染料在RNA水平检测HCN4通道的标准曲线,相关系数为0.997重复6次实验组内和组间变异系数均<1.0%。心脏组织中窦房结HCN4表达量最高,心室表达量最低。结论基于SYBR Green荧光染料建立的定量RT-PCR体系敏感性高,线性范围广,重复性好,可快速准确地检测HCN4的表达。

结肠癌组织中OTUB1的表达及其临床意义

目的探讨OTUB1在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时定量PCR和免疫组化SP法检测OTUB1在结肠癌组织和癌旁组织中的表达。结果 OTUB1 mRNA在结肠癌组织中的表达较癌旁组织高3.5倍,癌组织中OTUB1的蛋白表达水平也明显高于癌旁组织(P<0.05),且呈现癌旁组织、腺瘤、结肠癌逐渐递增的趋势(P<0.05)。OTUB1高表达与肿瘤大小、分化程度和淋巴结转移密切相关。结论 OTUB1在结肠癌的发生、发展过程中发挥重要作用。

心脏性猝死病人心肌组织CX43和CX40的表达

目的观察心脏性猝死病人左、右心室肌及室间隔肌缝隙连接蛋白43（CX43）及缝隙连接蛋白40（CX40）的表达,探讨CX43、CX40表达与心脏性猝死的关系。方法应用免疫组化及Simple PCI图像分析系统,分析比较心脏性猝死与非心脏性猝死病人心室肌及室间隔肌CX43、CX40的表达,并用SPSS 13.0统计软件对数据进行统计分析。结果非心脏性猝死病人CX43、CX40主要表达于心肌细胞闰盘处,少数表达于细胞侧面连接及胞浆中。心脏性猝死病人CX43、CX40多数弥散于胞浆及细胞侧面连接处,表达于闰盘的数量减少。心脏性猝死病人CX43在左心室、室间隔及右心室的表达明显低于对照组（t=2.09~8.01,P均〈0.05）;心脏性猝死病人CX40在左心室、室间隔及右心室的表达也明显低于对照组（t=3.24~9.40,P均〈0.05）。结论CX43、CX40表达部位的改变与表达数量的减少,可能与心脏性猝死有一定关系。

树突状纤维黏液样脂肪瘤的临床病理学分析

目的：探讨树突状纤维黏液样脂肪瘤（dendritic fibromyxolipoma,DFML）的临床病理学特征,并探讨容易与其混淆的软组织肿瘤的鉴别诊断。方法：收集5例树突状纤维黏液样脂肪瘤患者的临床资料,观察并分析其临床特征、组织病理学特征及免疫表型,并复习相关文献。结果：患者均为中老年男性,年龄45~80岁,平均59岁,肿瘤位于颈部、背部或肩胛部的浅表皮下或肌筋膜内。临床表现主要为局部肿块及其压迫症状。肿瘤直径3~8 cm,与周围组织界限清楚。大体观察为圆形或类圆形肿物,有完整包膜,切面灰黄色,部分呈黏液样或胶冻样。显微镜下肿瘤内增生的小梭形或星状细胞弥漫分布,成熟脂肪细胞掺杂其中,无不成熟的脂肪母细胞,间质多呈黏液样。高倍镜下,瘤细胞的胞质呈细长分支状突起,无细胞异型性及病理性核分裂象。此外,该肿瘤也含有较丰富的丛状小血管和毛细血管。免疫组织化学染色标记瘤细胞显示：5例肿瘤的Vimentin、CD34和BCL-2均呈阳性,S-100、CK均呈阴性,Ki-67阳性率小于2%或为阴性。结论：树突状纤维黏液样脂肪瘤是一种好发于中老年男性的特殊亚型脂肪瘤,其生物学行为属于良性,与梭形细胞脂肪瘤等多种软组织肿瘤的病理学特征极为相似,免疫组织化学染色有助于诊断与鉴别诊断。

Cdc42在舌鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 :探讨舌鳞癌组织、癌旁组织以及正常舌组织中细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)的表达及临床意义。方法:选择青岛大学附属青岛市市立医院口腔颌面外科2014—2016年手术切除的舌鳞癌原发灶42例,采用免疫组织化学和免疫印迹法检测患者的组织标本(舌鳞癌、癌旁组织和正常舌组织)中Cdc42蛋白的表达水平,并分析其与临床病理参数的相关性。采用SPSS 13.0软件包对相应资料进行t检验与秩和检验。结果:Cdc42蛋白在舌鳞癌以及其癌旁组织中的阳性率分别为80.95%和52.38%,均高于正常舌组织(11.90%),2组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Cdc42蛋白的表达与舌鳞癌的病理分化程度无关(P>0.05),Cdc42蛋白定位在胞核的阳性分度与舌鳞癌的病理分化程度相关(P<0.05);与患者的年龄、性别无关(P>0.05);与颈淋巴结转移及舌鳞癌的临床分期呈正相关(P<0.05)。结论:Cdc42蛋白在舌鳞癌组织及癌旁组织中表达增高,与舌鳞癌的发生、发展密切相关。

伴重度异型增生的乳头状唾液腺瘤1例并文献复习

目的探讨伴重度异型增生的乳头状唾液腺瘤(sialadenoma papilliferum,SP)的临床病理学特征及分子改变。方法回顾性分析1例SP的临床病理特征、免疫表型及分子检测,并复习相关文献。结果患者女性,61岁,发现磨牙后区肿物3年。镜下肿物呈双相生长模式,表面复层鳞状上皮呈乳头状增生,下方为大小不等的腺腔样结构,肌上皮完整,腔内可见乳头状突起,鳞状上皮与腺上皮相互延续。高倍镜下部分区域细胞核增大,异型性明显,可见较多核分裂象。免疫表型:腺上皮CK7强阳性,鳞状上皮CK5/6、p63阳性,腺腔周围肌上皮p63强阳性,Ki-67增殖指数约为5%。分子检测示肿瘤存在BRAF V600E突变。结论口腔SP是一种罕见的良性肿瘤,其形态与皮肤乳头状汗腺囊腺瘤相似,预后良好。伴重度异型增生者需明确肌上皮的存在,并与浸润性癌鉴别。

DNMT3L在卵巢恶性生殖细胞肿瘤中的表达及其临床病理特征

目的:探讨DNMT3L(DNA methyltransferase 3-like)蛋白在不同种类卵巢恶性生殖细胞肿瘤中的表达及其在生殖细胞肿瘤发生发展过程中的作用。方法:收集卵巢恶性生殖细胞肿瘤59例,包括原始生殖细胞肿瘤52例及未成熟性畸胎瘤7例,原始生殖细胞肿瘤包括胚胎性癌10例,卵黄囊瘤22例,无性细胞瘤13例,混合性生殖细胞肿瘤7例;同时收集非生殖细胞肿瘤17例,包括浆液性癌5例,颗粒细胞瘤5例,卵泡膜细胞瘤7例,采用SP免疫组织化学方法检测肿瘤组织中的DNMT3L蛋白的表达情况,并结合临床病理特征及组织学类型进行统计学分析。结果:DNMT3L主要在原始生殖细胞肿瘤表达,总体阳性率为73.1%(38/52),其中混合性生殖细胞肿瘤阳性表达率为85.7%(6/7),无性细胞瘤阳性表达率为84.6%(11/13),卵黄囊瘤中阳性表达率为68.2%(15/22),胚胎性癌阳性表达率为60%(6/10)。DNMT3L在7例未成熟畸胎瘤及17例非生殖细胞肿瘤中均未见阳性表达。临床病理特征分析显示DNMT3L阳性表达率与原始生殖细胞肿瘤的FIGO分期有关,与年龄及肿瘤大小等无关。结论:DNMT3L在原始生殖细胞肿瘤阳性表达率高,对其诊断具有较好的敏感性和特异性,DNA甲基化的改变可能在卵巢原始生殖细胞肿瘤的发生过程中起到重要作用。

DNA甲基转移酶在胚胎停育绒毛组织中的表达差异及临床意义

目的:探讨胚胎停育绒毛组织中DNA甲基转移酶(DNMTs)4种亚型DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L的mRNA及蛋白表达差异,并探讨其临床意义。方法:随机选取2013年1月-2014年6月在青岛市立医院妇产科门诊就诊的经B型超声(B超)证实为胚胎停育而行清宫术的40例患者为观察组,并选取同期正常早孕要求人工流产的40例患者为对照组。1采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测2组患者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L mRNA的表达量;2用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP法)及蛋白质印迹法(Western blot)检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L蛋白在观察组和对照组患者绒毛组织中的表达部位及定量差异。结果:1qRT-PCR结果显示,2组患者绒毛中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L mRNA的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);2免疫组化结果显示,DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L在2组绒毛滋养细胞的细胞核或细胞质呈不同程度的阳性染色,同时,半定量分析结果显示观察组的DNMT3A蛋白表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3Western blot分析结果显示,观察组患者绒毛中DNMT3A蛋白的相对表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);4胚胎停育绒毛组织中DNMT3A蛋白的表达量与DNMT1、DNMT3B和DNMT3L蛋白表达量之间无明显关联(均P>0.05)。结论:胚胎停育绒毛组织中,DNMT3A蛋白水平的低表达可能参与了胚胎停育的发病机制。