肌苷单磷酸脱氢酶在卵清蛋白诱导过敏性哮喘中的作用

目的探讨肌苷单磷酸脱氢酶(inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)在卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导过敏性哮喘发生发展中的作用。方法将36只BALB/c雌性小鼠随机分为健康对照组、OVA哮喘组和IMPDH抑制剂(利巴韦林)干预组,每组12只。收集每只小鼠的肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、肺组织、外周血及脾脏,采用苏木精-伊红染色分析肺组织病理改变,免疫组织化学法检测肺组织内CD3的表达情况,血球分析仪检测BALF和外周血中白细胞总数及分类计数,qRT-PCR和Western blot分别检测肺组织IMPDH mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光法检测肺组织IMPDH蛋白定位和表达情况,流式细胞术检测外周血和脾脏淋巴细胞亚群及其细胞内IMPDH蛋白表达水平。结果与健康对照组相比,OVA哮喘组小鼠肺内小气道周围及肺泡间隔大量炎症细胞浸润,BALF和外周血中白细胞总数均显著增加,以中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞的数量增多为主(均P<0.05),且肺组织内IMDPH蛋白水平显著升高(P<0.05),炎症细胞胞质内明显增多的IMPDH蛋白呈分散模式。给予利巴韦林干预后哮喘小鼠肺部炎症明显减轻,尤以BALF中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞显著减少为特征(均P<0.05),同时肺部IMPDH蛋白水平降低(P<0.05),炎症细胞胞质内IMPDH表达减少,但细胞核内出现较多IMPDH丝状结构。此外,OVA哮喘组小鼠脾脏中B细胞占比明显增多(P<0.05),但利巴韦林干预后哮喘小鼠脾脏中B细胞占比显著减少,而NK、CD3^(+)T和CD8^(+)T细胞占比较OVA哮喘组明显增高(均P<0.05)。同时利巴韦林干预组脾脏NK细胞内IMPDH蛋白表达水平较健康对照组升高,而CD8^(+)T细胞内IMPDH蛋白表达水平降低。结论抑制IMPDH可有效缓解以啫酸性粒细胞为主的气道及全身炎症反应,同时还能降低脾脏B细胞免疫应答,增强NK及CD8^(+)T细胞等杀伤细胞的免疫应答效应,其潜在的机制可能与炎症细胞内IMPDH表达量及其形成的丝状结构有关。

胞苷三磷酸合成酶在过敏性哮喘肺部炎症中的表达变化

目的探讨胞苷三磷酸合成酶(cytidine triphosphate synthase,CTPS)在过敏性哮喘发生的致敏和激发两个阶段肺组织内的变化情况。方法将36只BALB/c雌性小鼠随机分为卵清蛋白(ovalbumin,OVA)哮喘组、OVA致敏组和健康对照组,每组12只。采用HE和PAS染色法分析肺组织炎症和粘液分泌量,血球分析仪检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞分类及计数,ELISA法检测肺匀浆IL-5、IL-13和补体因子D(complement factor D,CFD)水平,RT-PCR、Western blot和免疫荧光法检测肺内CTPS mRNA和蛋白的表达及定位。结果OVA致敏和哮喘组的小鼠肺部炎症、粘液分泌、IL-5和CFD的水平都显著高于健康对照组(P<0.05),且OVA哮喘组高于OVA致敏组(P<0.05)。与健康对照组相比,OVA哮喘组BALF中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞数量及肺匀浆IL-13表达量均显著升高(P<0.05),且肺组织、肺内气道上皮细胞、肺部炎症区域内的细胞以及BALF中CD3^(+)T细胞内的CTPS蛋白表达量都显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05),部分细胞内CTPS蛋白呈棒状、条状、“C”型或月牙形等“细胞蛇”结构。结论CTPS仅在OVA诱导的激发哮喘阶段发生显著升高,其表达量的增加及形成的“细胞蛇”结构可能与肺部炎症细胞尤其是CD3^(+)T细胞的增多密切相关。