直接药敏试验在血流感染诊断中的应用

目的 分析在血流感染(bloodstream infection,BSI)中的细菌直接药敏试验(rapid antimicrobial susceptibility testing,RAST)与常规药敏试验之间的关联性,可快速地评价抗菌药物的敏感性并为早治疗提供指导。方法 收集2022年2—12月常州市武进人民医院镜检为革兰阴性杆菌的血培养阳性培养物56株,按照CLSI指南进行RAST试验,并将RAST试验结果与Vitek 2 Compact药敏试验结果进行比较,评估各类药物的一致性。结果 56例血培养阳性标本中大肠杆菌26株(46.4%)、肺炎克雷伯菌20株(35.7%)和其他肠杆菌目细菌10株(17.9%)。两种方法的比对结果显示氨苄西林、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松和甲氧苄啶-磺胺甲恶唑的符合率均≥90.0%,一般错误率均≤10.0%,严重错误率均≤3.0%,未发现极严重错误,差异无统计学意义(P>0.05)。依据阿米卡星、左氧氟沙星以及亚胺培南的可接受的符合率以及错误率提示了可能的折点。结论 依据CLSI标准对血培养阳性的肠杆菌目细菌进行RAST显示不同药物的分类一致性较好,可针对性的指导用药。评估指南中没有的3类药物的可能敏感折点,可更好地指导临床用药。

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药机制及研究进展

铜绿假单胞菌又称为绿脓杆菌,是一种分布极为普遍的细菌类型,是常见的致病菌。在自然环境中具有广泛的存在于土壤、空气以及水源中,并能够在人体的皮肤、肠道系统以及呼吸系统中存在,是一种存在于潮湿环境的细菌类型。铜绿假单胞菌是一种很典型的条件致病菌,为非发酵类型的革兰氏阴性杆菌。铜绿假单胞菌相对细长,其长度并不一致,为杆状、线状形态,一般会成对排列,部分铜绿假单胞菌呈短链形态排列。铜绿假单胞菌一端存在单鞭毛,通过暗视野显微镜等设备能够观测到其运动十分活泼。此外,铜绿假单胞菌属于专性需氧类细菌,其生长温度一般需要达到25℃至42℃之间,而25℃-30℃之间为铜绿假单胞菌最适宜的生长环境,同时当环境温度下降到4℃时铜绿假单胞菌进入休眠状态,不会继续生长,而在42℃环境下依旧可以继续生长。一般通过碳青霉烯类等抗生素展开治疗,碳青霉烯类抗生素具有最广泛的抗菌谱,是杀菌效果最强的β-内酰胺类抗生素,碳青霉烯类抗生素具有对β-内酰胺酶稳定的优势,同时药物毒性相对较低,现阶段成为细菌感染治疗中最常用的抗生素药物。碳青霉烯类抗生素的结构和青霉环有一定的相似性,常见的品类包括美罗培南、亚胺培南、多尼培南等。药物在进入机体后能够有效降低胞壁粘肽合成酶水平,进而使细菌等致病菌的细胞壁出现缺损,造成菌体膨胀,致使细菌细胞溶解,达到杀灭细菌的作用。可当前临床治疗中抗生素药物的应用愈加频繁,导致很多致病菌也有着较高的耐药性。其中,铜绿假单胞菌在使用抗生素治疗时也会存在治疗效果不佳的情况,这就需要对铜绿假单胞菌展开更为详细的研究,更好的让抗菌药物发挥作用,提升其疗效。

干扰EV71病毒2A^(pro)基因的siRNA具有潜在的抗病毒作用

目的:探讨以肠病毒71(entrovirus 71,EV71)2A蛋白酶(2Apro)基因为靶序列合成的siRNA是否具有潜在的抗病毒作用。方法:用Lipofectamine 2000脂质体分别将40、60、80 nmol/L FITC标记的BLOCK-iT Fluorescent Oligo转染RD细胞,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率。将化学合成的3个siRNA-2Apro(siRNA-69、294、319)和阴性对照的乱序si-RNA(siRNA-SCS)转染RD细胞,siRNA-2Apro为实验组,siRNA-SCS为阴性对照组,另设模拟转染组,仅用脂质体处理;用EV71分别感染各组RD细胞,观察细胞形态学改变,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测病毒RNA和VP1蛋白。结果:当siRNA浓度为60 nmol/L时转染效率最高,达87%。细胞形态学结果显示,与对照组比较,实验组细胞只发生了轻微的病变。荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,siRNA-2Apro组的病毒RNA和VP1蛋白明显低于对照组(P<0.01)。结论:以EV71 2Apro基因为靶序列化学合成的siRNA能有效地抑制病毒的复制。

肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达

目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化。方法首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFast Bac1中,构成重组质粒pFast Bac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFast Bac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞。通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白。结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致。Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70μg/m L,纯化度达90%。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白。

恒温扩增芯片法在病原菌检测中的应用价值

探讨恒温扩增芯片法(LAMP)对病原菌检测的作用,为其早期诊断和治疗奠定理论基础。方法 收集常州市武进人民医院2021年12月至2022年12月共714份肺炎可疑病人的肺部喷雾剂和肺泡灌洗标本。无菌体液标本57例,分泌物2例。采取恒温扩增芯片法和微生物分离培养法进行病原菌分析。比较两种检测方法的阳性检出率和病原菌检测结果一致性。同时比较LAMP、结核T-SPOT法、结核抗体及抗酸染色四种方法评价结核分枝杆菌感染。 结果 LAMP共检出178例阳性,检出率23.0 %,分离培养法共检出病原菌 193例,检出率 25.0 %,对于总的阳性检出率两种方法的一致性较好。对于部分苛养菌及肺炎支原体等难以培养细菌,LAMP阳性率高。结核分枝杆菌的检测中4种方法的阳性检出率分别为7(0.9%)、43(13.9%)、5(0.7%)、6(12.2%),LAMP可较好的诊断结核感染。结论 LAMP用于感染性病原菌的检测高效、便捷,为临床明确病原菌类型及诊疗提供了有效依据。