禽多杀性巴氏杆菌PtfA重组亚单位疫苗免疫效果的检测

为评价禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)PtfA重组蛋白(rPtfA)的免疫效果,本研究通过PCR扩增禽P.multocida的ptfA基因,将其克隆于pET-32a载体中并在大肠杆菌中表达。表达的rPtfA纯化后制备油乳剂亚单位疫苗,经3次免疫20只4周龄雏鸡,并设弱毒活疫苗组和PBS对照组。免疫后定期采血检测免疫鸡体液和细胞免疫水平,并进行攻毒试验评价rPtfA保护效率。结果显示动物免疫后,rPtfA免疫组和弱毒活疫苗免疫组血清抗体水平持续上升,与PBS对照组相比差异极显著(p<0.01),并且弱毒活疫苗组血清抗体水平高于rPtfA免疫组。淋巴细胞增殖和IFN-γ分泌试验的结果也表明,rPtfA组和弱毒活疫苗组的SI值及分泌的IFN-γ水平均极显著高于对照组(p<0.01),并且弱毒活疫苗组稍高于rPtfA组。攻毒后rPtfA组和弱毒活疫苗组的保护率分别为40%和70%,表明rPtfA亚单位疫苗虽然可为免疫鸡提供一定的保护,但效果不及弱毒活疫苗,仍需采取措施进一步增强其免疫保护效果。

禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果

为评价禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本实验以壳聚糖为佐剂制备ptfA基因的壳聚糖纳米DNA疫苗,检测其形态及抗DNA酶降解的能力,随后进行动物免疫实验,检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌情况和抵抗强毒菌株攻击和免疫保护率。实验结果显示,ptfA基因壳聚糖纳米DNA在透射电镜下呈现较为规则的圆球型,粒径约为200 nm,可以有效抵抗DNAaseⅠ的降解。间接ELISA检测结果显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA组的血清抗体水平均呈现上升趋势,明显高于空载体对照组和PBS对照组,且壳聚糖纳米DNA疫苗组的抗体水平稍高于裸DNA疫苗组。淋巴细胞增殖试验和IFN-γ分泌试验结果也显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA疫苗组的SI值与IFN-γ分泌水平极显著高于两对照组(p<0.01),但两种DNA疫苗组之间差异并不显著(p>0.05)。强毒菌株攻击后壳聚糖纳米DNA疫苗组的保护率优于裸DNA疫苗组,在一定程度上增强了禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因裸DNA疫苗的免疫效果。从而为禽多杀性巴氏杆菌新型DNA疫苗的研究奠定了基础。

禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因PCR检测方法的初步建立

为建立一种禽多杀性巴氏杆菌的PCR检测方法,本研究根据GenBank中已发表的禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因序列,设计与合成了一对特异性引物,建立了一种基于禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因的PCR检测方法,并优化了反应条件,检测了该方法的特异性和敏感性。结果显示,该方法可成功扩增出禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因片段,而鸡致病性大肠杆菌、鸡金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门菌均未扩增出相应片段。敏感性试验表明该方法可检测最低浓度为1pg/μL的禽多杀性巴氏杆菌基因组DNA。

改善烟叶品质微生物的筛选及其作用效果研究

[目的]本文旨在从不同种类的烟叶表面分离鉴定能有效降低烟叶中淀粉、纤维素、木质素、蛋白质及果胶含量的细菌菌株,并研究菌株在最佳产酶条件下产生的降解酶对烟叶品质的改善效果。[方法]通过测定分离株降解淀粉、纤维素、木质素、蛋白质及果胶的能力以及菌株产生的各种降解酶活性筛选具有高效降解能力的菌株。通过优化发酵时间、发酵温度、pH值、接种量、培养基装液量及摇床转速等条件使菌株产酶效率达到最高,将最佳产酶条件下生产的发酵液和烟叶共同发酵,测定发酵前、后烟叶中大分子化合物及香气成分的含量变化以评价菌株对烟叶品质的改善效果。[结果]在分离得到的87株菌株中,菌株yc10被鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.),可以同时降解烟叶中淀粉、纤维素、木质素、蛋白质和果胶,且产生的各种降解酶活性均处于中高水平。菌株yc10的最佳产酶条件为:发酵时间36 h,发酵pH值7,发酵温度37℃,接种量6%(体积分数),装液量80 mL,摇床转速200 r·min-1。在最佳产酶条件下培养菌株yc10,并将其粗酶液作用于4种烟叶A、B、C、D,结果发现4种烟叶中淀粉、纤维素、木质素、蛋白质和果胶均被降解,且烟叶中总糖含量增加。烟叶A经过菌株yc10发酵后,酮类、酸类、酯类、杂环类、醇类和醛类物质的含量均增加。[结论]从烟叶表面分离得到1株假单胞菌yc10,可产生多种降解酶;优化发酵条件后,对烟叶中淀粉、纤维素、木质素、蛋白质和果胶的降解效果均有提升,发酵液作用于烟叶48 h后可使大分子化合物含量降低、总糖含量增加、烟叶中香气成分含量增加,起到提质增香的效果。

大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒的组建及活菌检测

该研究组建了基于高分辨熔解曲线分析的大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒,对试剂盒的灵敏度、特异性、抗干扰能力和检测人工污染样品的情况进行了评估,并在组建试剂盒的基础上,利用叠氮溴化丙锭(PMAxx)对活/死细胞的选择性,构建了大肠杆菌O157:H7活菌定量检测技术。结果显示,试剂盒特异性强,仅大肠杆菌O157:H7血清型有阳性扩增;最低检测限为84CFU/m L;在四种常见食源性致病菌干扰下能准确检测出大肠杆菌O157:H7;在人工污染食品样品的实际检测中,可检测到初始污染量为7.97×10^(0)CFU/m L的样品;通过单因素变化试验对PMAxx处理的各项参数进行优化,确立了曝光时间11 min、暗孵育时间20min、PMAxx浓度30μmol/L的最优反应体系,并与本研究组建的实时荧光定量PCR试剂盒相结合,建立了在3.4×10^(7)-3.4×10^(2)CFU/m L浓度范围内Ct值与菌液浓度线性关系良好的大肠杆菌O157:H7活菌定量检测方法,为食源性致病菌快速定量检测提供技术支持。

即食果蔬中金黄色葡萄球菌选择增菌培养基的研究

[目的]本文旨在研究一种新型的金黄色葡萄球菌选择性增菌培养基(SSA)。[方法]试验模拟即食果蔬加工环境的低热杀菌环境探索金黄色葡萄球菌亚致死情况,并以此为条件选出最优的基础培养基。挑选3种促进剂、6种抑制剂进行单因素筛选,从中选出4种因素进行响应面设计,得到最优配方组合。随后对优化得到的配方进行重复性、特异性、亚致死恢复验证试验与人工污染即食果蔬培养试验。[结果]优选出的最佳方案为以Luria-Bertani(LB)培养基为基础,向其中加入葡萄糖、丙酮酸钠、萘啶酮酸和苯乙醇分别至1.73 g·L^(-1)、12.52 g·L^(-1)、3.82 mg·L^(-1)和1.60 mL·L^(-1)。热损伤金黄色葡萄球菌在SSA中培养120 min后的修复率达到100%,显著优于LB培养基(89.2%)与75 g·L^(-1)氯化钠肉汤的修复率(51.2%),金黄色葡萄球菌在SSA中培养的终浓度高于LB培养基,生长速度大于75 g·L^(-1)氯化钠肉汤,而非金黄色葡萄球菌在SSA中的生长被抑制。[结论]SSA培养基能够有效抑制非目标菌的生长,同时促进金黄色葡萄球菌的生长,SSA培养基与分子检测法结合可以提高检测准确性,并在10 h内得到检测结果。

鼠伤寒沙门氏菌生物被膜的清除效果研究

目的:比较食品工业中常用的消毒剂、常用的防腐剂及几种天然成分对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)生物被膜的影响。方法:通过在培养过程中添加不同种类、不同浓度的清除剂,测定所选清除剂对生物被膜形成过程的影响;用所选的清除剂对成熟生物被膜进行浸泡处理,评估每种清除剂不同含量下的清除效果;利用噻唑蓝(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法测定经不同清除剂处理后生物被膜菌内细胞的代谢活性;采用稀释平板涂布法计算不同物质处理后生物被膜内细菌的存活数。结果:消毒剂乙醇(50%)、过氧化氢(1%)、苯扎氯铵(0.6%)、苯扎溴铵(0.6%),天然成分香芹酚、肉桂醛和百里香精油(1.0μL/mL)在较低浓度下即可有效抑制S.typhimurium CDC3和S.typhimurium ST34生物被膜的产生;消毒剂洗洁精、过氧化氢和天然成分香芹酚、肉桂醛和百里香精油在清除成熟生物被膜方面表现出了一定的优势,其中清除效率最理想的是过氧化氢,最大可达90%左右,洗洁精最大清除率可至80%,香芹酚、肉桂醛和百里香精油可达70%左右;消毒剂乙醇、苯扎氯铵和苯扎溴铵,以及天然成分香芹酚、肉桂醛和百里香精油可以明显降低生物被膜菌的细胞代谢活性及活菌存活数,可将生物被膜内活菌数降低2~3个lg值。结论:对于成熟生物被膜的清除,在初始的培养中添加清除剂或是天然成分可以更加完全有效地控制生物被膜的产生。

枣皮红色素提取及成分分析

[目的]以灰枣为原料,初步分析其提取、分离工艺及其活性成分。[方法]通过酸化乙醇提取法对枣皮红色素进行提取,采用单因素试验考察不同pH对枣皮红色素提取效果的影响。在此基础上,利用pH梯度萃取法将枣皮红色素粗提物依次经过5%Na HCO3溶液、5%Na2CO3溶液、1%Na OH溶液进行萃取,得到不同萃取组分。并采用颜色反应和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对萃取物进行初步分析。[结果]通过单因素试验判定出pH=0.5的盐酸乙醇溶液对枣皮红色素提取效果最佳;碱液颜色反应和盐酸共沸颜色反应结果显示,枣皮红色素可能为蒽醌类化合物和多酚类化合物;高效液相色谱法(HPLC)对不同萃取物组分进行初步分析,得出枣皮红色素存在于Na HCO3萃取组和Na2CO3萃取组,并且主要集中于Na HCO3萃取组分。[结论]该研究为枣皮红色素的开发提供理论依据。

关联理论视角下的《人间天堂》两个译本的对比分析

小说《人间天堂》作为美国作家菲茨杰拉德的代表作之一,具有重要的文学价值。这部作品中有众多文学技巧和英语文化的体现,将其译成中文需要进行大量的翻译策略选择,故这部作品的中译本值得我们去研究、去比较分析。关联理论是认知语用学的理论基础,它的目的是识别人类心理的内在机制,以便揭示人类如何交际。这种理论基于认知理论,具有强大的解释力和说服力。本文从关联理论的视角分析了《人间天堂》两个中译本在语义层面与风格层面的得失,评判出了更好的译本,同时证明了关联理论对于文学类文本译本分析的适用性。

禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因壳聚糖纳米DNA疫苗的制备与检测

为制备禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因壳聚糖纳米DNA疫苗,PCR扩增获得ptfa基因片段,克隆于真核表达载体pcDNA3.1（＋）中构建重组质粒,以复凝聚法制备ptfa基因的壳聚糖纳米DNA疫苗。通过凝胶阻滞试验确定壳聚糖与DNA分子完全结合时的N/P比值;测定纳米DNA疫苗的包封率;透射电镜观察纳米DNA疫苗的形态;同时检测其抗DNA酶降解的能力及稳定性。结果成功构建禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因的裸DNA疫苗并制备出纳米DNA疫苗,该纳米DNA疫苗的N/P比值为2.5,包封率为95.3%,经电镜观察显示其形态大多呈规则的球状,粒径为200nm左右,且具有较好的稳定性,可有效抵抗DNA酶Ⅰ的降解。从而为进一步研究其免疫保护效果奠定了一定的基础。