尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达

目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径及早期生长反应因子1(Egr-1)在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。方法:以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs:(1)采用Brd U掺入实验测定不同浓度(1μmol/L、0.1μmol/L和0.01μmol/L)UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs增殖的影响;(2)采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、应激活化蛋白激酶(SAPK)、p38 MAPK及Egr-1mRNA表达的影响;(3)采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响。结果:(1)UⅡ在一定浓度范围(1μmol/L、0.1μmol/L和0.01μmol/L)呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P<0.01或P<0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P<0.05);(2)UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P<0.01或P<0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P<0.01或P<0.05),但对p-p38 MAPK无影响;(3)UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P<0.01或P<0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结论:UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖。

心率及血压变异系数对可疑直立不耐受患儿快速识别的临床价值

目的探讨心率及血压变异系数在可疑直立不耐受(OI)患儿快速识别中的临床应用价值。方法回顾性研究。选取2015年1月至2020年1月山东大学齐鲁医院儿科诊治的379例因OI症状入院患儿为病例组;选取20名无晕厥及晕厥先兆症状的门诊健康查体儿童为无症状对照组。病例组根据直立试验及直立倾斜试验(HUTT)结果分为HUTT阴性组、血管迷走性晕厥(VVS)组、体位性心动过速综合征(POTS)组、POTS合并VVS组。分析所有入组儿童试验过程中的血压及心率数据,分别计算各组研究对象卧立位及卧立倾斜位收缩压变异系数(SBPCV)、舒张压变异系数(DBPCV)及心率变异系数(HRCV)。5组研究对象各项指标的组间比较采用Kruskal-Wallis检验,组间两两比较采用Dunnett′s T3法;5组内卧立位与卧立倾斜位变异系数比较采用配对样本t检验。通过受试者工作特征(ROC)曲线对卧立位心率及血压变异系数的预测价值进行评估。结果379例患儿中,HUTT阴性组79例、VVS组208例、POTS组52例、POTS合并VVS组40例,无症状对照组20名。无症状对照组、HUTT阴性组、VVS组、POTS组、POTS合并VVS组患儿卧立位SBPCV分别为(3.8±1.0)%、(5.3±2.2)%、(6.6±3.4)%、(5.9±3.6)%、(6.9±2.8)%,卧立倾斜位SBPCV分别为(4.5±0.8)%、(6.0±1.9)%、(7.1±2.6)%、(6.0±2.1)%、(7.3±2.5)%,卧立位DBPCV分别为(7.3±1.2)%、(9.1±3.7)%、(9.1±4.9)%、(9.1±4.8)%、(11.6±4.6)%,卧立倾斜位DBPCV分别为(7.4±1.1)%、(9.4±2.9)%、(10.1±3.8)%、(9.2±3.3)%、(11.0±4.7)%,卧立位HRCV分别为(7.6±2.6)%、(12.9±3.7)%、(16.2±4.3)%、(21.2±5.9)%、(24.9±5.3)%,卧立倾斜位HRCV分别为(8.1±1.6)%、(10.1±2.7)%、(14.1±4.3)%、(15.6±3.7)%、(18.9±4.0)%,各项指标的5组间比较差异均有统计学意义(χ^(2)=21.91、25.47、19.82、14.65、104.52、92.51,均P<0.05);ROC曲线分析显示当卧立位SBPCV及HRCV分别为4.4%及10.5%时,曲线下面积分别为0.713及0.877,其对HUTT阴性组预测价值的灵敏度分别为58.2%及78.5%,特异度分别为80.0%及95.0%。结论心率及血压的变异系数可作为OI患儿自主神经功能评价的一项参考指标;当卧立位SBPCV≥4.4%或HRCV≥10.5%时,建议行HUTT检查。

尾加压素Ⅱ对大鼠肺动脉平滑肌细胞胶原合成的影响

目的研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂Urantide(UR)对培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法以组织贴块法培养的大鼠PASMCs为研究对象,采用BrdU掺入实验观察不同浓度UⅡ(1×10-10～1×10-7mol/L)及Urantide对PASMCs增殖的影响;采用Western blotting及Real-timePCR法,分别在蛋白和基因水平检测不同浓度UⅡ及Urantide对Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。结果 UⅡ(1×10-9～1×10-7mol/L)浓度依赖性地促进PASMCs增殖(P<0.05,P<0.001,P<0.001),增加PASMCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达(P<0.01,P<0.001),而1×10-10mol/L UⅡ对PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ胶原基因和蛋白表达无明显作用(P>0.05);UⅡ受体拮抗剂Urantide可拮抗UⅡ的上述作用(P<0.01)。结论 UⅡ通过与大鼠PASMCs的UⅡ受体UT结合而发生一系列诱导作用,最终引起PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,Urantide通过竞争性结合UT而阻断UⅡ与UT的结合,使UⅡ无法发挥诱导作用。

波生坦治疗婴儿先心病合并肺动脉高压的临床观察

目的探讨波生坦治疗3月龄以下小婴儿先天性心脏病相关性肺动脉高压(CHD-PAH)有效性及安全性。方法选择2012年1月至2013年12月在山东大学齐鲁医院和齐鲁儿童医院治疗的3月龄以下CHD-PAH患儿60例,随机分为波生坦组和卡托普利组,每组30例;同期选择年龄3个月以下健康查体婴儿30例(正常对照组)。采用ELISA法、超声心动图检测波生坦组、卡托普利组和对照组治疗前、治疗后4、8周血浆内皮素-1(ET-1)水平及平均肺动脉压(m PAP)的变化;检测波生坦组和卡托普利组治疗前、后肝酶变化;通过60 m L奶液喂养时间的变化评估患儿运动耐量。结果波生坦组和卡托普利组治疗前血浆ET-1含量、m PAP较正常对照组明显升高(P<0.05);波生坦组治疗后4、8周m PAP及血浆ET-1水平较治疗前明显下降(P<0.01),卡托普利组治疗后m PAP较治疗前下降(P<0.05),血浆ET-1水平无明显变化;波生坦组与卡托普利组治疗后4、8周血浆ET-1含量及m PAP比较明显下降(P<0.05);波生坦组治疗前后肝酶差异无统计学意义(P>0.05);波生坦组治疗后4周60 m L奶液喂养时间较治疗前明显缩短(P<0.01)。结论波生坦可有效降低先心病患儿平均肺动脉压,提高运动耐量。短期应用波生坦治疗小婴儿先天性心脏病相关性肺动脉高压安全、有效。

剪切力对肺微血管内皮细胞凋亡的早期生物学效应

目的观察剪切力对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)凋亡的早期生物学效应及PMVECs抗凋亡相关基因BCL-2表达的变化,探讨其在高血流性肺动脉高压早期发病机制中的作用。方法用自制的多层流动腔对体外培养的大鼠PMVECs施加剪切力作用,采用Annexin V/PI双染法检测剪切力作用不同时间PMVECs凋亡的变化;采用实时荧光定量PCR及Western blotting法分别从mRNA及蛋白水平上检测不同实验组PMVECs抗凋亡相关基因BCL-2表达的变化。结果剪切力可引起PMVECs凋亡增加,且随着剪切力作用时间的延长,PMVECs凋亡率逐渐增加。抗凋亡相关基因BCL-2在剪切力作用0.5 h组中的相对表达量低于对照组,随着剪切力作用时间的延长,BCL-2的相对表达量逐渐增高。结论剪切力对于PMVECs凋亡有促进作用,且能够改变抗凋亡相关基因BCL-2的表达。

儿茶酚胺与儿童直立不耐受的关系

直立不耐受最常见类型是血管迷走性晕厥和体位性心动过速综合征。儿茶酚胺包括去甲肾上腺素和多巴胺等。去甲肾上腺素主要由交感神经的末端作为化学传递物质而被分泌,可致心率增快、心肌及血管收缩增强;多巴胺是体内合成NE的前体物质,由中枢神经系统及神经节分泌的神经递质之一,与人体的情绪及感觉有关。该文主要介绍儿茶酚胺与血管迷走性晕厥及体位性心动过速综合征发病之间的关系。

miR-1/133对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞离子通道表达的影响

目的探讨miR-1/133是否参与病毒性心肌炎心肌细胞钾离子、钙离子通道基因表达的调节。方法建立Balb/c小鼠急性病毒性心肌炎模型。将小鼠分为对照组、心肌炎组、心肌炎+miR-1/133mimics组、心肌炎+miR-1/133 NC组,每组10只。采用苏木精-伊红染色法观察心肌形态学改变;采用qRT-PCR法检测心肌中miR-1、miR-133及Kcnd2、Irx5、Kcnj2和α1c的相对表达量;采用Western blotting法检测心肌中蛋白Kv4.2、Kir2.1、Cav1.2的相对表达量。结果苏木精-伊红染色显示对照组心肌细胞排列整齐,间质无炎性细胞浸润;心肌炎组与心肌炎+miR-1/133 NC组心肌细胞水肿、排列紊乱,炎性细胞浸润间质;心肌炎+miR-1/133mimics组心肌细胞排列较整齐,无细胞水肿,间质少量炎性细胞浸润。与对照组相比,心肌炎组与心肌炎+miR-1/133 NC组心肌miR-1、miR-133及Kcnd2、Kcnj2表达下调,蛋白Kv4.2、Kir2.1的表达下调(P<0.01);Irx5、α1c及蛋白Cav1.2表达均上调(P<0.01);心肌炎+miR-1/133 mimics组较心肌炎组与心肌炎+miR-1/133 NC组相比,miR-1、miR-133及Kcnd2、Kcnj2表达上调,蛋白Kv4.2、Kir2.1表达上调(P<0.05),Irx5、α1c及蛋白Cav1.2表达均下调(P<0.01)。结论 miR-1/133参与病毒性心肌炎心肌细胞钾离子和钙离子通道基因表达的调节。

实时荧光定量PCR检测儿童肺炎支原体16S rRNA的临床意义

目的探讨实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)检测肺炎支原体(MP)16S核糖体RNA在儿童支原体肺炎诊治中的临床意义。方法收集70例支原体肺炎患儿的临床及实验室资料,将其分为轻症组及重症组。采用RTFQ-PCR测定肺炎支原体16S核糖体r RNA的表达并比较痰液及咽拭子标本阳性率的差异。对检测阳性患儿给予大环内酯类抗生素为主的方案治疗,根据临床症状的缓解及用药疗程复查,分析RTFQ-PCR定量指标与临床治疗效果的相关性。结果痰液MP RTFQ-PCR阳性率高于咽拭子(92.86%vs.54.29%),支原体肺炎轻症组MP RTFQ-PCR转阴时间短于重症组[(2.78±0.42)周vs.(5.34±1.04)周],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RTFQ-PCR检测肺炎支原体定量指标可以指导大环内酯类药物应用时间,减少副作用产生,具有重要的临床指导意义。