MAPK通路参与小鼠骨实质来源间充质干细胞向成骨的分化

本研究探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路对间充质干细胞(mesen-chymal stem cell,MSC)向成骨分化的影响。采用骨片法分离培养C57/BL小鼠骨实质来源的MSC;取第4代MSC进行成骨诱导,利用Westernblot检测在MSC向成骨分化过程中MAPK所包含的细胞外信号调节激酶(ex-tracellul arsignal-regulated kinase,ERK)、c-JunN端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38通路磷酸化水平的变化,以及分别加入3种相应通路抑制剂PD98059、JNKII和SB203580后碱性磷酸酶(ALP)和钙沉积的相应变化。结果表明:MSC在向成骨分化过程中MAPK通路所包括的ERK、JNK和p38通路均发生活化;加入PD98059后,ALP的表达在诱导早期显著提高,而后无显著改变;加入JNKII后不影响ALP和钙的沉积;而加入SB203580后,可显著抑制MSC中ALP的表达和钙的沉积。结论:p38通路在MSC向成骨分化中起正调控作用,ERK通路可能在早期起负调控作用,而JNK通路在其中未见显著作用。

间充质干细胞的免疫调节功能及间充质干细胞在治疗自身免疫疾病中的应用

间充质干细胞(MSC)是一类可从多类成体组织中分离的能向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞等分化的成体干细胞,是组织工程细胞的一个理想来源。它能够与免疫系统相互作用,抑制T细胞、B细胞和NK细胞的功能,影响DC的活性。输入体内后,MSC可诱导外周免疫耐受并且可迁移到受损组织,抑制促炎症因子表达,促进受损细胞的存活。近年来MSC应用于对移植物抗宿主疾病(GVHD)的治疗,很好的降低了GVHD发生率和进程。MSC的这种免疫调节作用对治疗自身免疫疾病应该有良好的应用前景。本文主要综述MSC的免疫调节机制和MSC对自身免疫疾病的治疗进展。

不同TOAST亚型脑卒中患者动脉硬化负担分级比较

目的按照TOAST分型标准对急性脑梗死患者进行病因学分型,并评价各类型患者的动脉硬化负担分级。方法选取2014-01—2016-05我院收治的急性脑梗死患者160例,并对其临床资料进行回顾性分析;按照TOAST标准进行病因分型,并根据动脉硬化负担分级对各亚型卒中患者进行分级评价,比较各亚型卒中患者的动脉硬化负担分级。结果 TOAST分型结果:心源性栓塞型(CE)24例(15.38%),大动脉粥样硬化型(LAA)54例(34.62%),小动脉闭塞型(SAO)28例(17.59%),其他明确病因型(ODC)20例(12.82%)及不明原因型(UND)30例(19.23%);动脉硬化负担分级结果:心源性栓塞型患者、大动脉粥样硬化型患者与小动脉闭塞型患者的动脉硬化负担分级程度高于其他明确病因型与不明原因型,差异有统计学意义(P<0.05)。结论心源性栓塞型、大动脉粥样硬化型与小动脉闭塞型患者的病因均与血管性因素有关,通过动脉硬化负担分级有利于血管性脑卒中患者的病因诊断。

重组腺病毒载体Ad5-hTRX-EGFP的构建及其表达

本研究旨在构建并制备人硫氧还蛋白(hTRX)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因腺病毒载体Ad-hTRX-EGFP,感染HEK293细胞,为基因治疗提供实验基础。设计含有NotⅠ和EcoRⅤ酶切位点的引物,PCR扩增hTRX,将扩增产物连接到带有EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP,利用Lipofectamine2000脂质体的方法将AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒pBHG lox_E1,3Cre和穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP共转染入HEK293细胞,进行同源重组,得到腺病毒重组质粒pAd-hTRX-EGFP,并在其中包装扩增病毒,用氯化铯高速梯度离心、纯化病毒,测定病毒颗粒数及滴度。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用流式细胞仪测定感染HEK293细胞的效率,Western blot方法验证细胞表达hTRX蛋白。结果显示,重组腺病毒质粒经PCR和NotⅠ、EcoRⅤ酶切鉴定,证实含有hTRX基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达5.558×1010pfu/ml。病毒成功感染HEK293细胞,MOI=100时,感染效率达92.25%。经Western blot方法验证表明,感染后的HEK293细胞高表达hTRX蛋白。结论:应用细胞内同源重组方法成功构建了含hTRX基因的重组腺病毒载体,制备获得高滴度的病毒,能高效感染HEK293细胞并表达目的蛋白,为后续研究奠定了基础。

耳前平行皮瓣一期修复感染期耳前瘘管切除术后大面积皮肤缺损

目的探讨先天性耳前瘘管感染期手术皮肤缺损的修复方式。方法对2007年1月～20 1 0年5月收治的1 6例长期反复感染的先天性耳前瘘管患者实施手术治疗的临床资料进行回顾性分析。所有患者均采用耳前平行皮瓣进行皮肤缺损的修复。结果1 6例患者全部一期愈合,随访1～3年均无复发。结论耳前平行皮瓣修复感染期耳前瘘管切除术后大面积皮肤缺损,效果满意,对临床治疗具有指导意义。

无血清培养基SYL-SF对间充质干细胞的培养和扩增作用

目的 探讨新型无血清培养基SYL—SF对脐带间充质干细胞的体外培养和扩增作用。方法机械分离方法获得脐带间充质干细胞，从P1代开始将含小牛血清的原代培养基SYL-NBCS更换为实验组SYL-SF和对照组MSCM-SF两种无血清培养基对细胞进行培养、传代、扩增和维持。利用Alexa Fluor 488 annexin V检测细胞凋亡率，CCK-8法比较传代细胞的增殖效率，并对细胞进行形态、表型、染色体核型和分化能力等方面的检测和评价。结果分离得到的单个脐带问充质干细胞在原代培养基SYL-NBCS中培养8-15d可获得原代（P0）细胞，更换为无血清培养基后，SYL-SF组细胞凋亡率明显低于MSCM-SF组；在细胞传代过程中SYL—SF组细胞增殖能力较强且维持MSCs特异性表面标志和向脂肪、骨、软骨等多向分化的潜能，并且在传代过程中维持正常染色体核型。结论SYL—SF无血清培养基可以对UC-MSCs进行良好地体外扩增和维持。

自体骨髓单个核细胞移植对脑梗死大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的影响

目的研究骨髓单个核细胞对脑梗死后脑源性神经营养因子（BDNF）及室管膜下区神经干细胞增殖的影响,探讨骨髓单个核细胞对脑梗死治疗作用的可能机制。方法成年雄性SD大鼠72只,体质量250-300g。梯度离心法分离骨髓单个核细胞,流式细胞术检测细胞纯度,将由模型动物股骨骨髓腔内分离出的单个核细胞经尾静脉途径移植到大鼠体内;线栓法制作脑梗死动物模型,分别于脑梗死后24h、72h通过Western blot技术检测脑部BDNF的表达;室管膜下区神经干细胞的增殖情况于脑梗死7d时通过BrdU/Nestin免疫荧光双染技术进行检测。结果经骨髓单个核细胞移植24h、72h时,BDNF表达的水平在脑梗死大鼠脑部明显增高,与模型组及溶剂组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。自体骨髓单个核细胞移植还促进了脑梗死7d时室管膜下区神经干细胞的增殖,骨髓单个核细胞移植组与模型组以及溶剂治疗组比较,差异亦具有统计学意义（P〈0.01）。结论自体骨髓单个核细胞移植可以显著增加脑梗死大鼠脑部BDNF的表达、并促进室管膜下区神经干细胞的动员。骨髓单个核细胞促进神经干细胞增殖的作用可能与骨髓单个核细胞的神经保护作用有关。

利用动员的外周血造血干细胞建立人源化小鼠模型

目的:观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的人外周血中CD34^+造血干细胞(HSC)在免疫缺陷NPG^(TM)(NOD.Cg-Prkdcscid II2rgtm1vst/vst)小鼠模型上造血重建的水平。方法:用免疫磁珠分选G-CSF动员人外周血CD34^+的造血干细胞,经骨髓腔移植到亚致死剂量照射的NPG小鼠。移植后2、4周观察小鼠血象恢复情况;移植后4、6、8、10、12周用流式细胞仪动态监测小鼠外周血人源CD45^+、CD19^+细胞表达;12周后处死各组小鼠,检测骨髓、肝脏、脾脏中细胞表面CD45^+、CD19^+细胞表达;用PCR方法检测小鼠骨髓细胞人Alu基因的有无。结果:免疫磁珠分选人的CD34^+造血干细胞纯度可达96.3%;NPG小鼠经过照射后骨髓腔内有核细胞及巨核细胞数量均明显减少或消失,达到了清髓的效果;移植组小鼠4周外周血各系血细胞恢复到移植照射前水平;所有小鼠全部存活,移植组小鼠在4、6、8、10、12周均检测到人源CD45^+、CD19^+细胞;应用PCR方法检测移植组小鼠人Alu基因均为阳性。结论:经骨髓腔途径移植G-CSF动员的人外周血CD34^+干细胞至NPG小鼠,可以建立人鼠嵌合模型。

低温冻存对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

目的比较人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)冻存前与复苏后的生物学特性,为规模化储备UC-MSCs提供试验支持。方法采用胶原酶消化法从脐带中分离UC-MSCs,贴壁培养传代,将第3代UC-MSCs利用程控降温仪冷冻,置于-196℃液氮中冻存6个月后复苏,比较冻存前和复苏后UC-MSCs的细胞形态、生长曲线、免疫表型及多向分化潜能等生物学特性。结果复苏后UC-MSCs仍呈成纤维样形态生长,生长曲线与冻存前相似;免疫表型仍高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、CD45、CD40、CD80、CD86、CD154、HLA-DR;在特定的体外诱导条件下,仍可以向骨、脂肪、软骨分化。结论冻存复苏后UC-MSCs的生物学特性仍保持稳定。

思想政治教育对象主体性探究

主体是思想政治教育中的一个基本的范畴,传统的思政教育理论认为,教育者在教育、教学的过程中具有支配力与权威性,是教育的唯一主体,教育对象只是消极被动的客体。其实,思想政治教育的教育者和对象都是具有主体性的人,都是教育、教学的主体。深入研究思想政治教育对象的主体性,对于增强思想政治教育的针对性及有效性、满足人们提高思想道德教育的需要、促进人和社会的全面进步有着十分重要的意义。

奥扎格雷钠治疗短暂性脑缺血的疗效观察

有统计表明,短暂性脑缺血（TIA）病史者发生脑梗死的危险性是正常中老年人的10倍。因此,TIA是各类脑血管病的危险因素,早期的诊断和治疗,对预防脑血管病的进一步发展有着积极的意义。目前用于治疗该病的药物较多,但疗效不一。我科对2006-10—2010-05住院的56例TIA患者应用奥扎格雷治疗,效果满意。

慢病毒表达双报告基因载体系统的构建及病毒制备

本研究旨在构建萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,FLUC)和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双基因表达的慢病毒载体,并转染特定细胞系(HeLa),观察双基因的表达。采用PCR技术分别扩增FLUC和RFP报告基因,再将报告基因连接到慢病毒表达载体pLenti-Bi-cistronic中,获得具有双报告基因的慢病毒重组质粒pLenti-FLUC-RFP。然后,用脂质体将该慢病毒重组质粒转染293T细胞,收集纯化慢病毒颗粒。最后,测定病毒滴度,并用所获慢病毒感染HeLa细胞,采用荧光显微镜和荧光素酶报告基因检测试剂盒检测RFP和FLUC的表达。结果表明,酶切和测序证明RFP和FLUC基因成功连入目的载体,所构建的pLenti-FLUC-RFP慢病毒重组质粒序列符合预期。经纯化获得的慢病毒滴度为1×107TU/ml。将pLenti-FLUC-RFP转染HeLa细胞系后,在荧光显微镜下可见大量细胞表达RFP,荧光发光检测仪也检测到转染细胞具有较高的荧光素酶活性。结论:本研究成功构建了具有双报告基因的慢病毒重组质粒pLenti-Ⅲ-FLUC-RFP,经纯化获得了高滴度的慢病毒颗粒,该病毒颗粒具有很好的感染活性,为研究间充质干细胞在体内的动态分布奠定了基础。

浅析云班课混合式教学在技工院校思想政治理论课教学中的应用

互联网时代下,将信息化手段引入教学对于技工院校思想政治课教学改革具有积极的推动作用。思想政治课教师要顺应改革潮流,逐步实现思想政治课“立德树人”的教学目标。文章主要从云班课混合教学模式入手,探讨思想政治课教学改革方式。

手足口病护理心得

目的探讨对手足口病病人的护理措施，为手足口病的护理提供病历依据。方法对我院收治的350例手足口病病人给予消毒隔离、饮食护理、皮肤护理、口腔护理、心理护理、病情观察、健康指导等护理措施。结果通过对手足口病的护理，发现积极有效到位的护理措施是提高治愈率的重要保证。结论护理在手足口病的治疗中是极其重要的一环，不仅影响疾病的转归，还能切断手足口病的传播途径，易于集中管理控制手足口病的爆发流行，保护易感人群，进行正规治疗，提高治愈率。

外伤性截瘫病人的早期护理体会

目的:通过对30例外伤性截瘫病人的早期护理,初步探讨外伤性截瘫病人的早期护理心得。方法:对30例外伤性截瘫患者进行心里护理、基础护理、预防并发症等早期护理。结果:经过早期护理措施,不但可减少外伤性截瘫病人的死亡率,还可提高病人的自理、生存能力。结论:外伤性截瘫病人的早期护理尤为重要,是病人战胜疾病的关键。

公平责任之合理性质疑

公平责任是侵权法中一种损失分担形式,我国法律中公平责任条款最早见于《民法通则》第132条,《侵权责任法》第24条沿袭了上述规定,将"分担责任"改为"分担损失",从立法层面明确了公平责任是一种分担损失的方式,并非独立的归责原则。由于"公平责任"的正当性在理论上存在一定疑问,纳入侵权法体系弊大于利,本研究考虑用保险和社会保障制度替代"公平责任"在侵权法中的作用,以弥补侵权法中行为人双方对损害事实均无过错但损害发生时无法确定损失归属的制度缺陷。

差异化表决权的正当性分析

《科创版首次公开发行股票注册管理办法(试行)》规定科技企业可以在首次公开发行时采用差异化表决权的股票发行方式。此前我国一直是"一股一权"的上市规则,差异化表决权是否合理,是否突破一股一权原则,进行法理的正当性探析确有必要。股份有限责任公司的差异化表决权的正当性在于其符合不同股东偏好产生的市场需求、股东异质化现实下体现出的实质平等及公司法背后蕴含的涉及公司治理的私法自治原则。

“互联网+”背景下初中道德与法治教学新取向及路径选择

在当前新的教育教学形势下,初中道德与法治教师需要不断转换教学理念与模式,在课堂教学中进一步运用“互联网+”技术,把一些枯燥乏味的道德与法治知识,生动化与形象化地展现给学生,进一步提高初中生参与道德与法治课堂教学的自主性与积极性。同时,初中道德与法治是一门生活化非常强的学科,在传统的初中道德与法治课堂教育活动中存在一些不足之处,教师的教育理念较为落后,导致课堂教学氛围较为枯燥,无法构建高效的道德与法治课堂。针对以上问题,初中道德与法治教师可以运用网络新媒体,在课堂中引入一些学生比较感兴趣与熟悉的生活化素材,让学生对道德与法治知识更容易理解与接受,进而帮助他们构建完整的道德与法治知识体系,进一步加深对所学知识的理解与记忆,提高课堂教学质量。

技工院校思政课实践教学的困境及对策

开好思政课不仅是要站好理论小讲堂,更重要的是把理论小讲堂与社会实践的大讲堂结合起来,在理论与实践中进行铸魂育人。思政课实践教学恰恰在连接理论与实践的过程中扮演了重要角色。为了顺应时代要求,技工院校也在积极探寻如何提升思政课的实效性尤其是实践教学效果。文章主要从技校思政课的现状及相关对策进行探讨。

浅析如何在英语教学中渗透中国文化

在跨文化交流中英语教学的作用已经忿发的重要，这也引起外语工作者的高度关注。而在中国英语教育的过程中，文化教育却存在着一些比较偏激现象。在全社会重视英语的同时，很容易忽视汶语的学习。英语教学中的中国文化渗透是非常必要的，而这是汉语教学无法替代的。