人肺癌裸小鼠模型活体成像的动态观察

目的：建立稳定表达绿色荧光蛋白的人肺癌细胞系，并探讨小动物活体荧光成像系统在肺癌皮下移植瘤模型中的应用。方法：用慢病毒转染的方法建立表达绿色荧光蛋白的人肺癌细胞系NCI-H460．GFP，接种至裸小鼠体内建立皮下移植瘤模型，通过小动物活体成像系统连续5周观察肿瘤在小鼠皮下的动态生长情况。结果：建立了转染率接近100％的人肺癌NCI-H460-GFP细胞系，在体外及裸小鼠体内均能够长期稳定表达绿色荧光蛋白。活体荧光成像观察发现，1～4周随着肿瘤体积逐渐增大，平均荧光光子数逐渐增加；5周时随着肿瘤出现明显坏死，平均荧光光子数呈现下降趋势。结论：稳定表达绿色荧光蛋白的NCI—H460-GFP细胞系及其动物模型可以为肺癌研究提供理想的实验材料，应用小动物活体成像系统能够客观定量评价肿瘤在动物体内的生长情况。

肺腺癌骨转移裸小鼠模型的建立及MicroCT观察

背景与目的骨转移占晚期肺癌的50%-70%。本研究以体外侵袭、迁移能力不同的肺腺癌细胞系A549、H1299、SPC-A-1、XL-2为基础建立肺腺癌骨转移裸小鼠模型,MicroCT观察骨转移情况。方法将50只6 w-8 w龄裸小鼠随机平均分为5组,4个实验组左心室分别注射相应四种细胞悬液(0.2 mL/只);对照组左心室注射等量生理盐水。注射后第二周起定期对各组小鼠进行MicroCT扫描,当小鼠明显消瘦时此组观察结束,结束前行骨组织病理学检查;对各实验组出现的骨转移部位按中轴骨和四肢骨归类,比较这两种部位之间的转移率;根据各组出现骨转移所用平均时间、骨转移率,对各细胞系骨转移能力进行统计分析。结果经MicroCT、病理学检查确定,各实验组出现不同骨转移率,对照组小鼠无骨转移现象;各实验组中轴骨转移率均明显高于四肢骨,这与临床上肺癌骨转移规律一致,模型建立成功。各实验组间发生骨转移的小鼠数目及出现转移所用平均时间无明显差异。结论MicroCT能清晰地检测到骨质破坏,利于骨转移情况的判断;我们成功建立了肺腺癌骨转移模型,为以后探索出新的肺腺癌乃至肺癌骨转移临床预防和治疗方案提供基础;4种肺腺癌细胞系体外侵袭、迁移能力强弱不等,但体内骨转移能力没有明显差异,其原因还有待进一步的探索。

人肺癌高转移动物模型的筛选及其细胞系的建立

目的:建立人肺癌小鼠高转移模型及高转移细胞系,同时观察相关生物学特性,为肺癌转移机制和防治等研究提供有用的实验工具。方法:切除首代小鼠移植瘤,以延长动物生存时间而获得转移灶,从第二代起采用肺转移灶→皮下移植→肺转移灶→皮下移植的体内循环筛选方法建立NOD/SCID小鼠人肺癌细胞SPC-A-1皮下移植瘤高转移模型,并进行肿瘤的生长和转移情况、组织病理学观察,同时建立相应的高转移细胞系,进行各种相关生物学特性观察。结果:第一代移植瘤切除后转移率达66.7%,通过4代体内反复筛选建立了100%肺转移NOD/SCID小鼠模型及相应高转移细胞系,细胞生长行为和染色体分析等生物学特性观察表明该细胞系保持了原有的人肺腺癌的生物学特性。结论:应用体内筛选的方法成功建立了人肺癌皮下移植瘤高转移模型及高转移细胞系,为肺癌防治研究及抗转移实验治疗提供了理想的动物模型。

裸小鼠人肺癌术后转移模型的建立及动态观察

目的:建立裸小鼠人肺癌术后转移模型,动态观察肿瘤转移情况,为研究肺癌转移机制和术后抗转移治疗提供动物模型。方法:采用组织块法建立裸小鼠人非小细胞肺癌NCI-H460皮下移植瘤模型。4周后,随机挑选25只裸小鼠作为手术组切除肿瘤组织,建立术后转移模型,其余15只裸小鼠作为对照组。每2周两组各处死5只裸小鼠,动态观察其远处各脏器转移情况。动物明显消瘦时结束实验,并采用免疫组化法检测MMP-2、OPN、CD44v6、CD62等蛋白在转移灶及原发灶的表达情况。结果:对照组裸小鼠10周时所携瘤体严重坏死,并出现明显消瘦,解剖发现各阶段均无转移。手术组裸小鼠于10周、12周各发现1例肺转移(1/5),14周时裸小鼠明显消瘦,肺转移率达100%(5/5),有肉眼明显可见的肺转移结节,其他脏器未见转移。免疫组化结果表明,MMP-2、OPN、CD44v6、CD62、E-cadherin、TIMP-2在肺转移灶内的表达明显高于原发灶,CD54和MMP-9在转移灶内的表达则低于原发灶。结论:本模型模拟了临床肿瘤根除术后发生远处转移的过程,结果提示肺癌转移的发生可能与部分粘附分子的表达异常相关,同时为研究肺癌转移机制和术后抗转移治疗提供了理想的动物模型。

BNX小鼠人胃癌原位移植模型的建立及其生物学特性的观察

目的 应用T、B、NK细胞联合免疫缺陷的BNX小鼠建立人胃癌原位移植高转移模型。方法 将MKN 4 5细胞株接种至BNX小鼠皮下 ,成瘤后将肿瘤组织剪成小块通过手术移植至BNX小鼠的胃壁 ,观察肿瘤生长与转移情况 ,8周后对动物进行解剖。结果 胃壁原位移植瘤浸润破坏胃壁各层组织结构 ,并直接扩散至周围脏器。肿瘤的移植成功率为 10 0 % ( 2 3/ 2 3) ,表现出很高的侵袭和转移特性 :原位肿瘤平均体积 2 837.0 7± 10 4 4 .0 4mm3 ,局部和远处淋巴结转移率达 83% ( 19/ 2 3) ,肝转移率为 83% ( 19/ 2 3) ,肺转移率为 6 5 % ( 15 / 2 3) ,膈转移率为 39% ( 9/ 2 3) ,发生腹腔种植与腹水的动物为 35 % ( 8/ 2 3) ,此外 ,还有个别脾转移。结论 通过T、B、NK细胞联合免疫缺陷的BNX小鼠建立人胃癌原位移植模型可以更好地模拟人胃癌侵袭与转移本身的自然过程 。

复合麻醉对免疫缺陷动物麻醉效果的比较

用生理盐水即时配取不同浓度的盐酸氯胺酮和咪达唑仑复合麻醉剂,根据体重对裸小鼠和NOD/SCID小鼠进行腹腔注射麻醉,观察并记录麻醉诱导期、浅外科期、深外科期和恢复自主意识的时间,评价联合应用盐酸氯胺酮和咪达唑仑对免疫缺陷动物的麻醉效果。结果表明:复合麻醉剂对裸小鼠具有较好的麻醉效果,具有诱导时间短,起效快,能使动物很快地恢复自主意识,麻醉效果呈剂量依赖性的特点。但不同浓度的复合麻醉剂都会导致不同周龄的NOD/SCID小鼠出现死亡。因此,盐酸氯胺酮配伍咪达唑仑的复合麻醉是一种理想的麻醉方法,适用于对不同周龄的裸小鼠进行短期麻醉,但不适合对NOD/SCID小鼠进行麻醉。

裸小鼠人胃癌肝转移模型的筛选和建立

目的通过筛选建立裸小鼠人胃癌肝靶向高转移模型。方法采用原位移植技术,将组织学完整的MKN-45肿瘤组织块移植至裸小鼠胃壁上,按照胃原位移植→肝转移→皮下扩增→胃原位移植方法进行反复筛选,观察肿瘤原位移植成瘤率、侵袭和转移及形态学特征(光镜、电镜)。结果筛选出一个裸小鼠人胃癌肝靶向高转移模型,将其命名为MKN-45sci,已传至第5代。肿瘤的原位移植成瘤率、肝转移率和腹腔淋巴结转移率皆为100%,部分动物伴发肺、脾、膈等脏器转移及血性腹水。组织病理学和电镜观察结果证明其特征与原肿瘤相似。结论建立的裸小鼠人胃癌肝转移模型完整地再现了胃癌患者的临床过程。

裸小鼠人结肠癌术后转移模型的建立

将人结肠腺癌细胞株HCT-116接种于裸小鼠右侧背部近腋部皮下,得到皮下移植瘤,肿瘤在体内适应后用28只裸小鼠采用组织块法建立皮下移植瘤模型。4周后随机挑选15只裸小鼠作为实验组切除肿瘤组织,建立裸小鼠人结肠癌术后转移模型,其余13只裸小鼠作为对照组,观察动物生存情况及肿瘤远处转移情况。对照组裸小鼠9周时出现恶病质,解剖检查肺转移率为23%(3/13);实验组裸小鼠术部无肿瘤复发,17周后肺转移率达到100%(15/15),淋巴结转移率100%(15/15),脾脏转移率33.3%(5/15)。本模型模拟了临床肿瘤根除术后发生远处转移的过程,可为研究结肠癌转移机制和术后抗转移治疗提供理想的动物模型。

黑色素瘤小鼠高转移模型体内筛选和细胞系的建立

目的采用体内综合筛选的方法建立B16黑色素瘤小鼠高转移模型和相应细胞系,为系统性研究肿瘤转移机制和临床肿瘤治疗提供动物模型。方法首先将小鼠黑色素瘤B16移植于T、B、NK免疫细胞缺陷的BNX小鼠皮下,通过皮下移植→肺转移→皮下移植→肺转移的体内循环筛选方法筛选。在前三代筛选过程中,肿瘤直径达1.5 cm时切除皮下瘤,延长小鼠寿命以获得明显肺转移灶。在后三代体内筛选过程中,待小鼠自然濒死时,剖解获得肺转移灶。共通过体内筛选的方法筛选六代,建立高转移细胞系。同时进行肿瘤的生长和转移情况观察、病理组织学、细胞生长曲线测定、流式细胞术分析、染色体分析和细胞侵袭基底膜实验。结果BNX小鼠切瘤筛选3代后肺转移率达80%,转移程度达+++,转移天数平均达45 d。直接皮下筛选第一代转移程度和转移率有所下降,但三代后,转移率也达到91.7%(11/12),转移程度也达到+++,转移天数缩短至35 d。病理组织学、细胞生长曲线、流式细胞术和染色体分析等结果表明与黑色素瘤生物学特性相似。结论本研究建立了一个肺转移率高、转移特性稳定、直观性好、操作简便的小鼠黑色素瘤B16自发高转移模型及相应的细胞系,为探讨肿瘤转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的动物模型。

micro-CT法观测雌性小鼠股骨骨参数的分析

目的 利用小动物CT（micro-CT）收集正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的影像学数据.方法 BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠各15只,雌性,10～12周龄,取股骨后用micro-CT进行扫描,将得到的数据进行系统分析.结果 成功收集了正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的CT影像学数据.通过数据分析,发现两者在皮质骨相对骨体积上具有显著差异,在骨小梁相对骨体积、骨表面积与组织体积比值和骨密度也有显著差异.结论 micro-CT可以对雌性小鼠股骨的各项参数进行定量分析.

人肺癌不同转移潜能细胞株的建立及其特性分析

目的:建立人肺癌不同转移潜能细胞株,并对其转移特性进行初步研究,为肺癌转移机制的研究提供模型。方法:采用有限稀释单细胞克隆培养的方法,从已建立的人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci中分离出的不同单克隆细胞,通过体外损伤愈合、迁移与侵袭实验,体内皮下移植瘤自发性转移实验,比较分离出的不同细胞株之间以及与亲代高转移细胞株SPC-A-1sci之间运动、迁移、侵袭及转移能力的差异。结果:从SPC-A-1sci细胞株中成功分离出3株单克隆细胞(命名为SPC-A-1sci-C5、SPC-A-1sci-F3、SPC-A-1sci-C2),均具有特异性形态学特征;与亲代高转移细胞株SPC-A-1sci相比,SPC-A-1sci-C5细胞株的体外侵袭能力明显增强,其他2株细胞的体外侵袭能力则明显降低;3株单克隆细胞在细胞形态和体外侵袭能力方面存在明显差异,SPC-A-1sci-C5的体外侵袭能力明显高于其他2株细胞。体内皮下移植瘤自发性转移试验显示,SPC-A-1sci-C5细胞不仅转移发生时间较早,而且肺转移程度(包括转移灶数量及大小)亦较其他2株细胞增多。结论:成功建立了具有相同遗传背景、不同转移潜能的3株人肺癌细胞,为肺癌转移的进一步研究提供了理想模型。

BNX小鼠生物学特性及其肿瘤模型的初步应用

目的观察BNX小鼠生物学特性及肿瘤生长转移情况,为BNX小鼠的推广与应用提供基础资料。方法应用定期测定BNX小鼠体重、统计繁殖特性和检测BNX小鼠血液生理与生化指标的方法,初步探索BNX小鼠的生物学特性;应用原位移植和皮下移植的方法分别研究BNX小鼠在人胃癌(MKN-45)和人黑色素瘤(SCI-375)肿瘤动物模型研究中的应用。结果4～30周龄BNX小鼠的体重性别间差异有统计学意义(P<0.05);外周血常规指标中BNX小鼠的白细胞数只及正常小鼠的25%,而外周血清生化指标与正常小鼠相比没有明显的差异;人胃癌(MKN-45)BNX小鼠原位移植瘤模型和人黑色素瘤(SCI-375)BNX小鼠皮下移植瘤模型的转移率分别高于T细胞免疫缺陷的裸小鼠和T、B细胞联合免疫缺陷的SCID小鼠。结论BNX小鼠比一般的免疫缺陷动物更适合应用于肿瘤转移模型的研究。

人黑色素瘤SCID小鼠高转移模型的筛选和建立

利用人黑色素瘤 scid小鼠皮下移植实验中偶尔发现的肺转移瘤组织 ,接种至 scid小鼠皮下 ,经体内反复筛选 ,成功建立了一株人黑色素瘤高转移模型 SCI-3 75,至今在体内筛选 2年共 2 1代 ,表现为移植瘤局部侵润、1 0 0 %自发肺转移合并 79%腋下淋巴结转移 ,组织病理学观察和染色体分析表明 ,该模型保持了人黑色素瘤的基本特征。同时 ,利用筛选的肿瘤组织在体外初步建立了一个相应的细胞系 ,经体内移植实验证实 ,细胞系保持了原模型的高转移特性。本模型的建立 。

人肺腺癌转移相关基因的初步筛选及验证

目的 利用建立的人肺癌高转移细胞系筛选转移基因,为研究肺癌转移的分子标志奠定基础. 方法 人肺癌细胞系SPC-A-1和相应的高转移细胞系SPC-A-1sci常规培养后提取总RNA,采用cDNA芯片技术检测两种细胞中差异表达基因,对部分有差异表达的基因进行蛋白免疫印迹（Western blot）分析验证. 结果 通过基因芯片技术筛选出了7 649个可能与肺癌转移相关的基因,其中上调基因3 891个,下调基因3 758个,功能涉及细胞黏附、凋亡、转录、信号传导、细胞周期和代谢等.经过Western分析,CD44与CDC42EP3在SPC-A-1sci中的表达明显高于SPC-A-1,而FNI的结果则相反.这与基因芯片的结果相一致. 结论 基因芯片高通量筛选提示7600余条基因可能与人肺癌转移相关,为进一步研究肺癌的转移机制和发现新的转移相关基因提供了较为有价值的线索.

人脑星型胶质母细胞瘤裸小鼠术后转移模型的建立

目的建立人脑星型胶质母细胞瘤裸小鼠术后转移模型,为脑胶质瘤的基础和临床研究提供理想的实验动物模型。方法首先建立27只裸小鼠人脑星型胶质母细胞瘤U87MG皮下移植瘤模型,待肿瘤长至20 mm左右时18只裸小鼠手术切除皮下肿瘤建立术后转移动物模型,其余9只作为对照组,动物处于濒死状态时进行大体解剖观察远处脏器转移,并观察组织病理学改变。结果成功建立了人脑星型胶质母细胞瘤术后转移模型,动物的平均寿命约67.3 d,肺表面可见若干个大小不等的透明结节,平均肺重为0.83±0.30 g,肺转移率达100%(18/18),胸腔淋巴结转移率达66.67%(12/18),1只动物出现心内转移。对照组动物的平均荷瘤寿命为56 d,1只动物出现肺转移,肺转移率为11.11%(1/9),平均肺重为0.41±0.12 g。结论本模型较好地模拟了临床肿瘤根除术后发生自发远处转移的过程,为脑胶质瘤的转移机理及抗转移治疗等相关实验研究提供了理想的动物模型。

两种免疫缺陷动物人胃癌原位移植模型的肿瘤生物学特性研究

目的探讨裸小鼠和SCID小鼠两种免疫缺陷动物人胃癌原位移植后肿瘤生长和转移等生物学特性的差异。方法将MKN-45细胞株接种至裸小鼠皮下,成瘤后采用组织学完整的组织块移植于裸小鼠和SCID小鼠胃壁建立原位移植模型,观察所建模型的原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况。结果①两种免疫缺陷动物的原位成瘤率都为100%;②裸小鼠原位移植瘤平均体积2884±1337mm3,腹腔淋巴结、肝、肺、膈转移率分别为67%、83%、33%和8%;③SCID小鼠原位移植瘤平均体积4582±1326 mm3(P<0.05),肝转移率90%(P>0.05),与裸小鼠较为接近, 腹腔淋巴结转移率90%,肺和膈转移率分别为100%(P<0.01)和60%(P<0.05)。结论证明应用T、B细胞联合免疫缺陷的SCID小鼠较裸小鼠更适用于建立胃癌的原位移植模型。

SCID小鼠的繁育及其在肿瘤研究中初步应用

采用ＳＰＦ屏障系统繁育ＳＣＩＤ小鼠３７７胎共１６３１只，两种不同的繁育方法比较结果证明１雄×２雌交配法优于１雄×１雌交配法。ＳＣＩＤ小鼠离乳后的体重增长，雄性大于雌性，３～８周龄增重较快，８周龄后体重增长趋缓。经寄生虫和微生物检测，符合ＳＰＦ小鼠标准。将人体肿瘤Ｈ１２８小细胞肺癌、ＳＧＣ７９０１胃腺癌、Ｕ２５１脑瘤、ＢＥＬ７４０２和ＳＭＭＣ７７２１肝癌移植于ＳＣＩＤ小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠皮下，发现ＳＣＩＤ小鼠的成瘤率和瘤体积明显高于ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠，ＳＭＭＣ７７２１肝癌在ＳＣＩＤ小鼠身上出现局部浸润、肝转移和淋巴结转移，发生率分别为４６．４３％、３２．１４％和３９．２９％。ＳＧＣ７９０１胃腺癌在ＳＣＩＤ小鼠胃原位移植，不仅原位１００％生长，还伴有向肝、脾等脏器的高转移。

小鼠结肠癌高转移模型体内筛选和建立

目的采用体内筛选的方法建立小鼠结肠癌高转移模型,为系统研究结肠癌转移机制和临床结肠癌治疗提供动物模型。方法先将C26小鼠结肠癌移植于T、B、NK免疫细胞缺陷的NOD-SCID小鼠皮下,并在首代筛选过程中切除皮下瘤,延长小鼠寿命以获得明显转移灶,然后通过皮下移植→肺转移→皮下移植→肺转移的体内循环筛选方法建立高转移模型。以建立成功的高转移模型为瘤源,在BALB/c小鼠体内以相同的方法继续筛选,同时进行肿瘤的生长和转移情况观察、病理组织学、超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察。结果NOD-SCID小鼠筛选5代后肺转移达100%。但筛选后的肿瘤组织皮下移植到BALB/c小鼠体内时,肿瘤的转移程度有所下降,又经BALB/c小鼠体内4代筛选,肿瘤的移植成瘤率、肺转移率均为100%。病理组织学、超微结构观察、细胞增殖周期和异倍体等结果表明与原结肠癌生物学特性相似。结论作者建立的肺转移率100%、转移特性稳定、直观性好、操作简便的小鼠结肠癌高移植模型,为探讨结肠癌转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的动物模型。

应用iTRAQ技术筛选高转移和低转移肺腺癌细胞中差异表达的膜蛋白

目的:筛选高转移和低转移肺腺癌细胞中差异表达的膜蛋白,以寻找肺癌的生物学标志物或治疗的潜在靶点。方法:提取具有相同来源、不同转移潜能的肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1sci细胞的膜蛋白,应用核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术标记膜蛋白,联合纳升液相色谱和串联质谱(nanoliquid chromatography-tandem mass spectrometry,Nano-LC-MS/MS)分离、分析肽段,采用Proteinpilot 4.0软件对蛋白进行鉴定和定量分析,对获得的差异蛋白进行GO(Gene Ontology)分析,应用实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法进行验证。结果:样品进行4次NanoLC-MS/MS,鉴定出符合假阳性率<1%的分别有1413、1374、1297和1351个蛋白,标记率>95%,其中4次都上调的蛋白有27个(膜蛋白20个)、下调的蛋白有32个(膜蛋白25个)。GO分析显示,差异蛋白的分子功能主要集中在细胞骨架蛋白结合、同源蛋白结合和酶结合。生物学进程主要集中在代谢进程和细胞定位。SPC-A-1sci细胞中ITGA3(integrin alpha-3)、MYH9(myosin,heavy chain9)、PLEC1(plectin 1)、HADHA(3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase)、HK1(hexokinase-1)、KTN1(kinectin 1)、ESYT1(extended synaptotagmin-like protein 1)、ALDH18A1(aldehyde dehydrogenase 18 family,member A1)、ATP5A1(ATP synthase alpha-subunit)、LMNB2(lamin-B2)、CAV1(caveolin-1)和CK-19(keratin,typeI cytoskeletal19)mRNA的表达水平以及CLTC(clathrin,heavy chain)、HK1、LMNB2和CK-19蛋白的表达水平均高于SPC-A-1细胞,与质谱定量结果一致。结论:iTRAQ联合NanoLC-MS/MS技术能高通量地筛选与转移相关的膜蛋白,为肺腺癌患者转移的诊断和预后提供可能的生物学标志物或治疗靶点。