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天津地区猪伪狂犬病毒变异株的分离鉴定及主要相关毒力基因分析
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作者 程宁 杨程 +7 位作者 李欣蕾 孙久英 王凯月 韩俊平 李文军 王欢欢 邵笑 孙英峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期902-908,共7页
为了鉴定猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株及其携带毒力基因的变异情况,本研究采集1份天津地区某猪场免疫过Bartha-K61疫苗但患严重神经症状的仔猪脑组织样品,采用荧光定量PCR(q PCR)检测PRV g E基因,并将检测为PRV的阳性样品接种PK-15细胞分... 为了鉴定猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株及其携带毒力基因的变异情况,本研究采集1份天津地区某猪场免疫过Bartha-K61疫苗但患严重神经症状的仔猪脑组织样品,采用荧光定量PCR(q PCR)检测PRV g E基因,并将检测为PRV的阳性样品接种PK-15细胞分离培养,并传3代后采用Reed-Muench法测定分离病毒的TCID_(50),采用q PCR和间接免疫荧光试验(IFA)进一步鉴定分离病毒。结果显示,经q PCR检测仔猪脑组织样品出现扩增曲线,阳性样品分离培养后测得病毒滴度为10^(7.57)TCID_(50)/m L,分离病毒的q PCR结果出现扩增曲线,且其感染的细胞出现绿色荧光。表明分离到一株PRV,命名为TJbd2023株。采用PCR分别扩增TJbd2023株主要相关毒力基因g B、g C、g D、g E、g G、g I和TK,采用Meg Align软件分析分离病毒与Gen Bank登录的PRV参考株上述各毒力相关基因序列的同源性,通过Neighbor-Joining(NJ)法构建上述各毒力相关基因的进化树,采用Meg Align软件分析各毒力基因编码氨基酸主要位点的变异情况。结果显示,分别扩增到TJbd2023株的各相应毒力基因;各毒力基因的同源性分析结果显示,TJbd2023株与国内2012年后流行变异株的相似性高达98.4%~100.0%,与疫苗株(Bartha-K61)的相似性为89.6%~93.2%。进化树结果显示,这7个毒力基因均与国内GD0304株(MH582511)、BJYT株(KC981239)和DL1408株(KU360259)等PRV变异株位于同一分支,与疫苗株(Bartha-K61)未在同一分支。g B、g C、g E氨基酸序列除出现PRV变异株相同的突变位点外,g B还出现R^(223)H和E^(836)K的突变、g D出现R^(320)S和g E出现T^(242)A的突变。将TJbd2023株分别以5个剂量(10^(2.57)TCID_(50)/m L~10^(6.57)TCID_(50)/m L)感染6周龄KM小鼠,通过小鼠的临床症状、死亡率、死亡小鼠各组织的病理变化评估该病毒的致病性。结果显示,在5 d的观察期内,感染组小鼠陆续出现奇痒及神经症状,各实验组小鼠的死亡率分别为60%、80%、100%及100%,对照组小鼠均健活。死亡小鼠各组织病变观察可见肺组织浸润性出血、肝组织血管充血及淋巴细胞增多、脑胶质细胞增多及血管周围炎性细胞聚集形成血管套等病变,对照组小鼠各组织均无明显病变。上述结果表明,本研究在天津地区分离到一株PRV变异株,其毒力因子发生了独特的氨基酸位点突变,对小鼠的致病性较强,该结果丰富了PRV的致病性及其毒力因子变异的特征,为PR的综合防控提供参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 变异株 分离鉴定 遗传进化分析 致病性
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一株PRRSV-2谱系1.8与1.5重组毒株的基因组特征分析
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作者 杨程 刘野 +9 位作者 程宁 王凯月 李欣蕾 孙久英 韩俊平 李文军 王欢欢 邵笑 程雪娇 孙英峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3570-3578,共9页
为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行变异情况。本研究利用猪肺泡巨噬细胞(PAMs)分离培养、有限稀释法纯化和IFA鉴定,从具有严重呼吸症状断奶仔猪群中分离鉴定出一株新的PRRSV流行毒株(命名为TJ-C6),并对其开展了全... 为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行变异情况。本研究利用猪肺泡巨噬细胞(PAMs)分离培养、有限稀释法纯化和IFA鉴定,从具有严重呼吸症状断奶仔猪群中分离鉴定出一株新的PRRSV流行毒株(命名为TJ-C6),并对其开展了全基因组扩增及其分子特征分析。结果显示,该毒株全基因组全长15011 bp,与NADC30毒株的核苷酸相似性最高(91.7%),为NADC30-like PRRSV(谱系1.8),且其Nsp 2存在131个氨基酸不连续缺失分子特征(“111+1+19 aa”);GP5 N-糖基化位点分析显示存在3个糖基化位点(N32、N43、N50)。重组分析结果显示,该毒株是以NADC30-like(谱系1.8)为骨架,与NADC34-like(谱系1.5)发生重组的PRRSV,其重组区域位于12213~14628 nt(ORF2a~ORF6)。本研究分离鉴定到一株谱系1.8与谱系1.5重组的PRRSV-2毒株,可为天津地区的猪繁殖与呼吸综合征综合防控提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 基因组特征 重组
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