抗非洲猪瘟病毒NP419L蛋白纳米抗体的筛选鉴定及其在抗体检测中的初步应用

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是猪的一种高度传染性疾病,严重威胁全球养猪业的发展。本研究旨在筛选抗非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)NP419L蛋白的纳米抗体并对其在ASF抗体检测中的应用进行初步评价。大肠杆菌表达和Ni-NTA亲和层析纯化等技术表达纯化重组NP419L蛋白;将纯化的重组蛋白免疫双峰驼,5次免疫采集外周血淋巴细胞提取总RNA,经反转录、巢式PCR、酶切、连接和电转化等构建抗NP419L蛋白的噬菌体展示文库;利用噬菌体展示筛淘技术,经三轮筛淘获得抗NP419L蛋白的纳米抗体;构建纳米抗体与辣根过氧化物酶(HRP)融合蛋白的真核表达载体,转染HEK293T细胞,ELISA和间接免疫荧光(IFA)等鉴定融合蛋白的分泌表达及其与NP419L蛋白的结合;竞争ELISA初步评价获得的纳米抗体与HRP融合蛋白在ASF抗体检测中的应用。结果显示,成功制备了纯度较高的预期大小为48 ku的重组NP419L蛋白;构建获得了阳性率为89.5%,库容量为6×108的噬菌体展示文库;筛淘获得了6株抗NP419L蛋白的纳米抗体;分泌表达了该6株纳米抗体与HRP的融合蛋白,ELISA检测发现该6株融合蛋白可特异性结合重组NP419L蛋白,IFA检测发现1株融合蛋白与真核表达的NP419L蛋白结合,该融合蛋白可作为探针应用于ASF抗体的检测。本研究成功筛选出6株抗ASFV NP419L蛋白的特异性纳米抗体,并对其进行了结合蛋白特性的鉴定和抗体检测初步应用的评价,为后续ASF诊断技术的研发和NP419L蛋白功能研究奠定了基础。

支气管镜引导气管支架置入术治疗恶性气道狭窄的方法及护理

目的探讨支气管镜引导气管支架置入术治疗恶性气道狭窄的方法及护理对策。方法对36例经内科各种方法治疗无效的恶性气道狭窄患者,在局麻下经支气管镜引导进行镍钛合金支架置入术。结果36例患者均顺利完成支架置入,术后呼吸困难迅速改善,未发生大咯血、窒息及支架移位等严重并发症。结论对于恶性气道狭窄的患者及时进行支气管镜引导支架置入,有利于迅速解除气道梗阻,改善呼吸。支气管镜引导支架置入是较为安全、有效、简便、易被患者接受的治疗方法。做好术前心理护理。局部麻醉、术中监护和术后护理是保证手术安全的必要措施。

金因肽与烧伤二号治疗压疮效果观察

目的:探讨金因肽、烧伤二号(唐都医院药剂科研制)对压疮的治疗效果。方法:选取符合诊断标准的Ⅱ度压疮患者30例,Ⅲ度压疮患者30例,随机分为金因肽治疗组,烧伤二号治疗组以及对照组,每组10人。Ⅱ、Ⅲ度压疮金因肽治疗组每天用金因肽喷创面5次;Ⅱ、Ⅲ度压疮烧伤二号治疗组每天用烧伤二号涂抹患处7次。Ⅱ、Ⅲ度压疮对照组只做常规护理,不应用金因肽和烧伤二号。观察治疗组平均需换药次数,以及治疗组和对照组的治疗效果,治疗效果分为显效、有效、无效三级。结果:金因肽治疗组Ⅱ、Ⅲ度压疮平均换药次数分别为35次和52次,烧伤2号治疗组Ⅱ、Ⅲ度压疮分别为48次和68次。金因肽治疗组、烧伤二号治疗组与对照组比较疗效有显著性差异同时,金因肽治疗组与烧伤二号组比较有显著性差异。结论:使用金因肽与烧伤二号治疗压疮,均取得了明显的治疗效果,减少了换药次数,增加了创面愈合的速度。且金因肽治疗组较烧伤二号治疗组疗效有差异,金因肽治疗组在换药次数以及创面愈合的速度方面效果更佳。

基于MOOC的《水产微生物学》翻转课堂教学研究

《水产微生物学》是水产养殖专业一门关键的专业课。针对传统课堂的授课现状,笔者根据MOOC与翻转课堂自身的特点,探索将二者结合的教学模式改革,学生充分利用共享平台和网络资源进行自主学习,并与老师互动交流,课堂时间主要进行针对性的重难点解析和答疑,进一步提高学生学习的自觉能动性和教学质量,为培养创新型人才提供支持。

注重护理关怀 提高护理品质

当今社会,随着社会经济的不断快速发展,人民生活水平的不断提高,人们对于生活环境的要求越来越高,尤其是处于弱势的病患,对周围环境要求更加严格。本文主要从关怀护理的本质和内涵、如何护理以及怎样成为有关怀能力的护理员等方面,具体阐述了在病患护理过程中,人文关怀对临床护理质量的提高和整体护理的发展的重要性。

一株Ⅹ型鸭疫里默氏杆菌GN52稳定性的研究

选取鸭疫里默氏杆菌的一株地方分离株GN52,按照生长的最适条件,在马丁固体培养基上连续传代。分别选取第3代、第11代、第21代、第31代、第41代、第51代和第61代的细菌,对其进行染色镜检、生化试验、药敏试验及动物实验。结果表明,随着代次的增加,该菌株染色形态、生化特性及抗药性均未发生明显变化,但毒力有逐渐下降的趋势。

肺癌患者的临终关怀和护理

“肺癌”黾目前世界公认盼‘癌中之王”，近年来由于长期的雾霾天气，肺癌已成为我国上升速度最快的癌症，并且取代肝癌成为首位肿瘤死因。肺癌总体5年生存率低于10％，在此期间患者的躯体及心理饱受病痛的折磨，对患者实施临终关怀不仅能提高患者的生存质量，还会提高患者及家属的满意度。

广东地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及双重PCR检测方法的建立

对来自广东地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病鸭组织进行了病原菌的分离培养和生化鉴定,确定得到20株鸭疫里默氏杆菌,动物回归试验结果表明,分离的鸭疫里默氏杆菌具有很强的致病性。对这20株鸭疫里默氏杆菌进行的药敏试验表明,分离株已广泛产生耐药性。参照已经发表的2对引物以细菌全菌体为模板建立双重PCR方法,结果均能扩增出2条目的片段,经测序证实为鸭疫里默氏杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门菌和鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性。说明建立的双重PCR方法能快速、准确的检测出鸭疫里默氏杆菌,并具有高度特异性,可用于鸭疫里默氏杆菌的快速鉴定和快速诊断。

细胞因子在ARDS发病机制中的作用

细胞因子是由多种细胞产生的多肽或低分子糖蛋白,在人体内含量极微,在pg水平就发挥作用。作为特异性免疫反应和非特异性免疫反应的蛋白质,细胞因子以自分泌、旁分泌、或内分泌方式产生,与相应的细胞表面受体结合,在局部或全身发挥复杂的生物学效应,它们的代谢异常和疾病的发生、发展有着密切的关系。有些细胞因子已应用于临床的生物学治疗,具有深远的临床应用价值,故对细胞因子的研究将是一个越来越重要的课题。急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)发病机制错综复杂,大量临床和实验室研究证明多种效应细胞释放的炎症介质是造成ARDS的"中心环节",其中TNF-α、IL-1、IL-8、IL-10、CXC趋化因子等细胞因子在ARDS发病中的作用尤为重要。本文就细胞因子在ARDS发病机制中的作用做一综述。

初治肺结核住院患者的心理护理

初治肺结核是指初次发现,未接受任何抗结核药物治疗,或发现肺结核后虽经不规则、不合理抗结核治疗,但疗程不超过1个月的病人。据2000年调查,我国发病以青壮年居多。而青壮年患者多正处于事业、婚姻等关键时期。

SPF鸡胚中内源性白血病病毒全基因序列鉴定与分析

以国内某3家SPF鸡场的SPF鸡胚成纤维细胞提取的基因组DNA为模板,参照已发表的序列,设计合成了4对检测内源性白血病病毒引物,分别检测gag基因、pol基因、env基因和LTR片段,结果显示4者检出阳性率很高(gag,29/46;pol,27/46;env,24/46;LTR,31/46)。设计合成了8对引物,选取4片段检测均为阳性的样品之一,经PCR成功扩增出了8段连续的、相互部分重叠的目的DNA片段,分别连接入T载体进行克隆测序。用DNAstar软件对测序结果进行拼接,从一个鸡胚得到了内源性白血病病毒前病毒全基因组序列。比较分析发现,该序列env基因与已知的E亚群内源性病毒代表株env基因的核苷酸序列同源性在98.5%以上,全基因组序列同源性在99.1%以上,而与其他亚群代表株同源性相对较低,env基因同源性仅为56.3%～91.5%。

骨髓间充质干细胞移植对家兔急性肺损伤的保护作用

背景:急性呼吸窘迫综合征重要病理改变是肺泡-毛细血管膜屏障的损伤,以及所导致肺泡渗出液中富含蛋白质的肺水肿。骨髓间充质干细胞能够继续分化和不断自我更新,并最终分化为多种类型细胞,这有可能为治疗肺损伤提供一个新的途径。目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对内毒素诱发急性肺损伤模型兔的保护作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-10/2008-01在唐都医院中心实验室完成。材料:家兔20只,2只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余18只随机分为3组:盐水对照组、肺损伤模型组、细胞移植组,6只/组。内毒素为Sigma公司产品。方法:Ficoll法分离培养兔骨髓间充质干细胞,传至第3代备用。肺损伤模型组、细胞移植组兔通过向气管内滴注内毒素建立急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征模型,造模成功30min后,细胞移植组经右侧颈静脉注入骨髓间充质干细胞悬浮液2mL(细胞数1×105),盐水对照组、肺损伤模型组同法给予等量生理盐水。主要观察指标:支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、肺组织湿干比及蛋白含量,肺组织病理变化。结果:湿干比值升高提示肺水肿的存在,中性粒细胞数量增加提示较重的炎性反应存在,蛋白含量升高提示肺泡-毛细血管内膜屏障受损。移植48h后与盐水对照组比较,肺损伤模型组支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、蛋白含量均明显降低(P<0.01),湿干比明显升高(P<0.01);与肺损伤模型组比较,细胞移植组支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、蛋白含量均明显升高(P<0.01),湿干比明显降低(P<0.01)。苏木精-伊红染色结果显示,盐水对照组肺泡组织结构正常,肺损伤模型组肺组织出现典型的急性肺损伤改变,细胞移植组肺组织病理变化较轻。结论:利用骨髓间充质干细胞移植可显著减轻内毒素诱导的急性肺损伤。

海水淹溺兔肺泡巨噬细胞TNF-α mRNA的动态表达及地塞米松干预作用

目的:观察海水淹溺后家兔肺泡巨噬细胞内TNF-αmRNA的动态表达规律,并探讨地塞米松干预对TNF-αmRNA表达的影响。方法:采用气管切开插入塑料导管、向气管内灌海水4ml/kg,双肺自主通气的方法模拟海水淹溺造成急性肺损伤模型。于淹溺后0min、30min、60min、90min、120min五个观察时间点进行血气分析,并采集肺组织,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺泡巨噬细胞中TNF-αmRNA的表达。结果:海水淹溺兔急性肺损伤各时相点肺组织中性粒细胞大量浸润,淹溺后TNFα-mRNA表达显著增高,90分钟后达最高峰,而地塞米松可使之降低(P<0.01)。结论:海水淹溺急性肺损伤可能与肺泡巨噬细胞内TNF-αmRNA高表达有关。地塞米松可降低TNF-αmRNA的高表达,减轻肺损伤程度。

纤维支气管镜下注入凝血酶与立止血救治咯血疗效对比分析

目的对比分析经纤维支气管镜下注入立止血和凝血酶对咯血患者的止血治疗作用,观察并发症及危险性。方法324例咯血患者,常规局麻下应用Olympus BF IT-40型、Olympus BF P-20型纤维支气管镜检查并镜下注入立止血和(或)凝血酶,观察止血情况及并发症。结果总体止血率高达99%(321/324),复发率26.5%(86/324),无严重并发症及死亡病例发生。立止血组、凝血酶组及立止血联合凝血酶组差异均无统计学意义。结论经纤维支气管镜下注入立止血和(或)凝血酶是治疗咯血患者安全而可靠的方法,值得临床推广应用。

纤维支气管镜介入微波并局部化疗对晚期肺癌所致气道狭窄的治疗作用

目的探讨经纤维支气管镜(纤支镜)介入微波并局部化疗对气道阻塞性晚期肺癌的治疗作用。方法将100例有气道阻塞的晚期肺癌患者,随机分为观察组(50例)与对照组(50例),观察组采用Bestar-Ⅱ型微机控制多功能微波治疗仪经纤支镜介入对瘤体进行点灼,并向瘤体中央及周围注入顺铂30mg,同时用异环磷酰胺、表阿霉素、顺铂(ICE)方案进行全身静脉化疗。对照组单用ICE方案化疗。结果观察组50例中,显效15例(30%),有效26例(52%),无效9例(18%)。有效率82%,明显高于对照组的有效率(36%,P<0.01)。结论经纤支镜介入微波并局部化疗能较快地使肿瘤缩小或消失,肺不张复张。此方法的客观疗效及症状缓解均优于单纯化疗。

烟雾吸入性肺损伤13例救治体会

目的探讨烟雾吸入性肺损伤的救治方法。方法对13例烟雾吸入性肺损伤患者根据病情轻重的不同，分别选择立即给予小潮气量并最佳PEEP的机械通气方式，早期、足量、短程的糖皮质激素，积极进行支气管镜下吸引，有效的抗生素控制感染以及维生素、适当的液体和电解质平衡等方法进行救治。结果烟雾吸入后1h急诊入院的12例患者，其中包括5例合并ARDS的危重患者均在二周内痊愈出院，而当时无异常表现，吸入烟雾后15h后送入院的1例患者经以上方法救治无效死亡。结论在对延误吸入性肺损伤合并ARDS的救治中必须抓住时机，争分夺秒，根据病情轻重的不同分别选用个体化治疗方案是救治成功的关键。

鸭疫里默氏杆菌中国分离株的外膜蛋白A基因的克隆与序列分析

为了对鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）中国分离株的外膜蛋白A（OmpA）基因的序列进行分析,根据GenBank中已发表的鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）的外膜蛋白A（Om-pA）基因序列,在其高度保守区设计一对特异性引物,应用PCR技术,分别扩增从中国广东、福建和山东等地分离的8株鸭疫里默氏杆菌中国分离株的OmpA基因,克隆测序后与GenBank中已发表的26株鸭疫里默氏杆菌进行序列比较,结果表明：所有菌株的OmpA基因均为由1164个碱基组成的ORF,编码387个氨基酸组成的蛋白质,起始密码子均为ATG,终止密码子均为TAA,其核苷酸序列非常保守,同源性高达88.2%-100%,氨基酸同源性达到88.9%-100%。试验表明,OmpA基因具有种内相对保守性,其核苷酸与氨基酸同源性与鸭疫里默氏杆菌的血清型、分离时间和地点之间无必然联系。

痰热清注射液治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期疗效观察

目的观察痰热清注射液对慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期的治疗效果。方法将COPD急性加重期患者82例随机分为观察组(52例)和对照组(30例),观察组在常规西医治疗的基础上加用痰热清注射液,对照组则采用单纯西医治疗。结果观察组总有效率高于对照组;且在改善症状、体征(包括呼吸困难、咳嗽、咯痰、紫绀、哮鸣音)及血气(包括pH、PaO2和PaCO2)等方面均优于对照组。结论痰热清注射液对COPD急性加重期有较好的疗效。

传统CAV方案与金喜素联合顺铂治疗小细胞肺癌疗效回顾对比分析

目的:分组比较传统CAV方案(环磷酰胺+阿霉素+长春新硷)和金喜素和顺铂方案对小细胞肺癌患者的治疗效果。方法:通过分组对比分析164例小细胞肺癌患者连续三次应用传统CAV(环磷酰胺、阿霉素、长春新硷)方案和连续三次应用金喜素联合顺铂方案化疗,检测肿块横径与直径缩小程度,比较两个方案对小细胞肺癌的治疗作用。结果:金喜素联合顺铂方案时小细胞肺癌总有效率迭56．5％,传统CAV方案总有效率41．8％,两组比较有明显统计学意义(x2=18．4>16．27,v=3,p<0．001),两组毒副反应比较无统计学意义(x2=5．62<9．49,v=4,p>0．05)。结论:金喜素联合顺铂方案时小细胞肺癌较传统CAV方案有更明显的疗效,值得临床应用。

自制10F导管胸膜腔引流后胸膜粘合术联合化疗治疗恶性胸水疗效评价

目的运用自制10F导管胸腔闭式引流、短棒注射液胸膜腔封闭粘合术并局部与全身化疗治疗恶性胸腔积液,对其疗效做全面评价。方法运用自行设计与45号腹腔穿刺针套管配套的10F塑料导管(陕西邦盛医疗器械有限责任公司制造)治疗我科住院的134例恶性胸腔积液患者,男69例,女65例;年龄19～83岁。左侧52例,右侧72例,双侧10例;肺腺癌72例,肺鳞癌28例,肺小细胞未分化癌9例,卵巢癌2例,恶性淋巴瘤2例,乳腺癌1例,间皮瘤3例,结肠癌胸膜转移1例,未定类型16例。行胸腔闭式引流术,并注入短棒注射液胸膜腔封闭粘合术,注入顺铂、羟基喜树碱局部化疗,布比卡因局部止痛,常规全身化疗。结果患者恶性胸水治愈率76.1%(102/134),有效率100%;完全缓解率100%;副作用中胸痛发生率46.0%(59/134),胸廓塌陷发生率69.4%(93/134),发热34.3%(46/134),局部皮下结节发生率28.4%(38/134),肿瘤皮下转移14.2%(19/134),恶心呕吐31.3%(42/134),导管阻塞3.7%(5/134),众多并发症患者均可耐受,患者生存质量均明显提高。结论自制10F导管闭式引流、短棒胸膜腔封闭,并局部与全身化疗是治疗恶性胸腔积液良好而可靠方法,值得临床推广。