结直肠癌患者血液循环中癌细胞微转移的观察

目的观察结直肠癌患者手术时癌细胞微转移情况。方法以K19 mRNA及癌胚抗原(CEA) mRNA为标志物,取门静脉血与周围血做反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测。结果K19 mRNA以及CEA mRNA两者的阳性率大致相符,而且与临床分期、病理细胞分化情况相关(P<0.05)。经过2年的随访,阳性、可疑及阴性组三者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论对结直肠癌患者血液循环中K19以及CEA两种标志物的检测,具有提示临床情况的意义,并且与患者预后有关。可用于对术后患者的定时复查,以使医师及早做出进一步的治疗计划或及时调整现有治疗计划。

在癌基因研究中应用巢式RT-PCR

目的 讨论癌基因研究中应用巢式反转录聚合酶链反应 (巢式RT PCR)对目的基因进行扩增的应用体会。方法 以巢式RT PCR法检测 5 5例大肠癌患者门静脉血和 5 4例卵巢癌患者及 10例妇科良性肿瘤病人骨髓中细胞角化蛋白基因 19(CK 19)mRNA的表达 ,并对实验方法进行了改良和优化。结果 大肠癌中有 5 4.5 % (30 /5 5 )检得CK 19阳性 ,卵巢癌中有6 3 .0 % (34/5 4)检得CK 19阳性 ,10例妇科良性肿瘤无CK 19的表达。我们认为 ,为了能够在实验中得到好的扩增效果 ,整个RT -PCR操作中应把握以下几点 :①要对用商品化试剂盒抽提到的总RNA样品在冷环境下重新沉淀、纯化 ;②在对反转录反应的温度控制方面 ,要注意高低温转换迅速彻底这一原则 ;③巢式引物的应用 ,能够使整个实验的特异性大为增高。结论 经过上述三方面措施改良后的巢式RT -PCR能够用来检测恶性肿瘤患者CK - 19mRNA的表达 ,因而成为监测这类肿瘤患者造血及血液循环系中癌细胞分布情况的一种有效的分子生物学手段。

巢式RT-PCR检测大肠癌患者门静脉血中癌细胞

目的 :建立一种能有效测查大肠癌血中癌细胞的分子生物学方法 ,并初步探讨其对大肠癌发生微转移可能性的评估意义。方法 :应用巢式反转录聚合酶链式反应 (Nested RT- PCR)对 5 5例大肠癌患者门静脉血中细胞角化蛋白— 19(CK- 19) m RNA基因进行检测。结果 :30例 (5 4.4% )检得门静脉血 CK- 19阳性 ,临床 Duke’s A+ B、C、D其中 CK- 19阳性检出率分别为 48.3 %、5 8.8%、6 6 .7%。结论 :巢式 RT- PCR可作为一项快速、灵敏度高的分子生物学技术 ,在大肠癌微转移研究中加以应用。门静脉血中 CK- 19阳性在早期大肠癌既有发生 ,且阳性检出率随病情分期的进展而呈上升趋势。CK- 19m RNA基因可望成为一项对大肠癌预后进行评估 。

结直肠癌向肝微转移的观察

目的 :探讨结直肠癌患者在手术时癌细胞向肝发生微转移的情况。方法 :以癌胚抗原(CEA)表达及角化蛋白19(K19)表达癌细胞为标记物 ,应用巢式反转录聚合酶链反应 (NestedRt-pcr)对55例术中患者 ,并以术后患者及正常人各12例为对照进行了检测。结果 :两项标记物皆阳性者在临床 (Duke's)早期已经出现 ,随分期之进展而逐步增高。并随癌细胞恶性程度升高而上升。结论 :用门静脉血检测结直肠癌患者在手术时癌细胞向肝发生微转移的情况比其它方法阳性率更高 。

液相芯片技术检测胃癌血清细胞因子的临床意义

目的探讨炎性相关细胞因子在胃癌患者血清中的表达水平及各种细胞因子之间的相关性,并分析各细胞因子与胃癌不同临床特征之间的关系。方法运用高通量液相芯片技术对46例胃癌术前患者(胃癌组)和30例健康者(对照组)血清中细胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17A、IL-21、IL-23、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF表达水平进行同时检测。结果血清中IL-8、IL-17A、IL-7、TNF-α表达水平胃癌组较健康对照组显著升高:4.50(10.38)pg/ml vs.2.06(3.17)pg/ml,P=0.002、0.83(2.01)pg/ml vs.0.21(0.85)pg/ml,P=0.013、3.46(1.90)pg/ml vs.2.11(1.48)pg/ml,P=0.001、1.21(1.13)pg/ml vs.0.79(0.37)pg/ml,P<0.001;各细胞因子在胃癌组中有淋巴结转移组与无淋巴结转移组比较差异无统计学意义(P>0.05);各细胞因子间具有相关性。结论血清中高水平的IL-7、IL-8、IL-17A、TNF-α可能参与胃癌的发生及发展,IL-8、IL-17A、TNF-α高表达可能是预后不良的指标。

非小细胞肺癌患者外周血Th1、Th2、Th17淋巴细胞及其相关细胞因子表达及临床意义

目的:观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中Th1、Th2、Th17淋巴细胞及其细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17的表达及临床意义。方法:收集山西省肿瘤医院胸外科,原发未治疗的NSCLC60例患者作为实验组和60例健康志愿者作为对照组,以IFN-γ、IL-4、IL-17为代表分别测定Th1、Th2、Th17淋巴细胞因子。首先采用流式细胞技术(FCM)分别检测两组外周血Th1、Th2、Th17淋巴细胞含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测两组血清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17水平含量。同时分析比较两组外周血Th1、Th2、Th17淋巴细胞及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17水平含量与临床病理特征关系。结果:实验组外周血Th1、Th2、Th17淋巴细胞的水平分别为(44.57±20.32)%、(3.08±1.28)%和(1.74±1.18)%;对照组外周血中Th1、Th2、Th17淋巴细胞的水平分别为(49.04±12.30)%、(2.67±1.36)%和(0.89±0.56)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者Th1淋巴细胞的水平(41.1±23.6)%、(44.6±20.3)%低于Ⅰ—Ⅱ期肺癌患者(46.2±19.1)%(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者的Th2、Th17淋巴细胞水平高于Ⅰ—Ⅱ期肺癌患者(P<0.05)。鳞癌患者外周血Th2、Th17淋巴细胞水平高于腺癌患者。结论:检测NSCLC患者外周血Th1、Th2、Th17及其细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17水平含量对判断病情、了解机体的免疫功能具有重要的临床意义。

淋巴细胞恶性增殖病基因重排及其意义

目的：对淋巴细胞恶性增殖病进行研究。方法：应用多聚酶链反应－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲ－ＰＡＧＥ）和银染色法，对３０７ 例淋巴细胞恶性增殖病进行了免疫球蛋白重链基因（ＩＧＨ），Ｔ细胞受体ｒ链基因（ＴＣＲｒ）的克隆性重排进行检测。结果：ＩＧＨ １６０ 例（５２．１％ ），ＴＣＲｒ ５８ 例（１８８％ ），双阳性２２ 例（７．１％ ），阴性６７ 例（２１．８％ ）。非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）与ＮＨＬ白血病的基因重排分布相似；霍奇金淋巴瘤（ＨＤ）明显较低；急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）及多发性骨髓瘤（ＭＭ）进展期基因重排高达９５％ ，９０％ ；缓解期６０％ ，４５％ ；慢性淋巴细胞性白血病（ＣＬＬ）重排率低；急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ）及慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）为对照，它们也有少量淋巴细胞基因重排。病理学型别以不能分型者，原发灶以鼻及咽淋巴环者之ＴＣＲｒ 重排明显增高，且与恶性程度呈正相关。并可以此重排来检测微小病灶（ＭＲＤ）之存在。结论：可用此指导化疗。

非霍奇金淋巴瘤与基因重排(英文)

研究非霍奇金淋巴瘤与基因重排的关系,用PCR技术检测免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体γ基因(TCRγ)的克隆性重排。结果:①211例非霍奇金淋巴瘤患者中,IgH阳性108例,TCRγ阳性45例,双阳性12例,阴性46例;②系统观察10例患者,发现临床完全缓解时仍有5/10患者呈克隆性基因重排。结论提示,基因克隆性重排的PCR分析在非霍奇金淋巴瘤的早期诊断及评估治疗有效性方面是有用的。

结直肠癌患者血清中CDKN2/P16基因异常的检测(英文)

目的为了寻找一种切实可行的检测肿瘤的生物标志物及其方法。方法对100例结直肠癌患者取血清,另取献血员19例,非肿瘤患者13例为对照;并另取癌组织26份,癌旁组织22份及非恶性组织29份作对比观察,同时用3种方法进行检测。一为对P16基因甲基化分析;二为对其进行缺失分析,三为对其进行点突变的分析。结果患者血清异常甲基化为69%,缺失为4%,点突变为15%,癌组织之结果与血清相似;而癌旁组织显然较低。SSCP阳性者经序列分析证实有3例为错义突变,1例为移位,1例为同义突变;其中4例造成P16蛋白的缺失。作为肿瘤的生物标志物,3项联合应用其灵敏度为88%,特异性为96.87%,准确率为90.15%。比文献用CEA+CA19-9+CA72-4+CA2424项指标联合之灵敏度、特异性、准确率皆高,尤其是特异性。如果仅用甲基化加突变亦高于前者。结论血清DNA含量不高但能反映人体对肿瘤的负荷,本实验对DNA的质和量的要求不是太高,能检出10-3的DNA片段,可用于临床诊断及大面积普查,并可用于对出院患者的长期随访。并提示P16基因异常甲基化在结直肠癌癌变机制中起决定性作用。

角蛋白19、癌胚抗原mRNA的表达与微转移的探测

目的 探讨癌症患者在开始接受治疗时是否已发生血液循环中癌细胞的微转移。方法 以角蛋白 19(K19) mRNA及癌胚抗原 (CEA) mRNA两基因的表达为标记物 ;应用巢式—反转录聚合酶链反应 (Nested RT PCR)进行扩增 ,经PAG后进行观察。结果 结肠癌组 75例患者的门静脉血中肯定有转移者 36例 ( 4 8.0 % ) ;其中 35例之周围血有 8例 ( 2 2 .86 % )为阳性。卵巢癌组 5 0例患者之骨髓测得 2 5例 ( 5 0 .0 % )为阳性 ,其周围血 2 2例中只有 3例 ( 13.6 3% )为阳性 ,2 0例未经化疗之结直肠癌患者作了周围血的复查 ,阳性仍占 2 0 %。结肠癌随临床Duke′s分期早晚其阳性率亦随之上升 ;病理型态分化程度之高低与微转移亦呈正相关。结论 结肠癌、卵巢癌临床早期已有癌细胞发生微转移。单凭手术消灭不了癌细胞 ,必须及早化疗。K19可作为检测卵巢癌的生物指标。而结直肠癌则以K19及CEA联合应用更可靠。标本采集 ,结肠癌以门静脉血 ,卵巢癌以骨髓为首选。

晨尿中芳香基硫酸酯酶活性检测对乳腺癌患者的诊断价值

目的探讨晨尿中芳香基硫酸酯酶活性检测在乳腺癌患者中的诊断价值。方法采用“芳香基硫酸酯酶检测试剂盒（荧光测定法）”测定乳腺恶性肿瘤组、良性对照组和健康对照组晨尿中的芳香基硫酸酯酶（ARS）活性，并对ARS活性进行统计学比较（u检验，X^2检验）和ROC分析。结果乳腺恶性肿瘤组ARS活性相对于两对照组，均有显著性增高；晨尿中ARS在乳腺癌诊断中的敏感度为57．0％，特异度为97．8％，准确度为69．9％，ROC曲线下面积AUC=0．920。结论晨尿中ARS活性检测对乳腺癌患者的诊断有一定的临床价值。

改进MSP法对肿瘤患者血清DNA的探测

目的 寻找一种切实可行的检测方法及肿瘤的生物标志物。方法 用改良的Herman新方法对111例不同癌症患者的血清及部分组织进行了p16异常甲基化检测,同时对55例患者检测突变K-ras基因作为比较。结果 各期住院患者血清及癌组织p16异常甲基化均在50％左右,与正常人及非恶性肿瘤对照组比较差异有显著性(P<0.05)。早期癌血清与组织无明显差异。晚期癌症患者阳性率明显上升(P<0.05);术后20 d基本消失。突变K-ras基因的阳性率仅为30％,较前者明显为低,如二者联合应用可提高阳性率13％。结论 改进MSP法检测血清中异常甲基化是一种行之有效的方法,与突变K-ras基因检测联合应用,则效果更好。

前列腺素E_2合成酶与类风湿关节炎

目的 研究膜相关前列腺素E2 合成酶 (membrane associatedprostagladinE2 synthase ,mPGES)与类风湿关节炎的关系。方法 用反转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)等方法分析环氧化酶 2(cyclooxygenase 2 ,COX 2 ) ,mPGES基因转录和表达以及前列腺素E2 (PGE2 )合成。结果 白细胞介素 (IL) 1β可诱导滑膜成纤维细胞COX 2 ,mPGES转录水平升高 ,主要的炎性介质PGE2 合成增加。COX 2抑制剂NS 398和mPGES抑制剂MK 886可降低IL 1β诱导的PGE2 合成增加。提示COX 2、mPGES、PGE2 三者密切相关。丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑止剂PD和SB可降低IL 1β诱导的滑膜成纤维细胞COX 2 ,mPGES转录水平。

几种恶性血液病微小残留病的检测

应用多聚酶键反应—聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲ－ＰＡＧＥ）和银染色法对１６４例恶性血液病患者进行了免疫球蛋白重链基因（ＩｇＨ）、Ｔ细胞受体γ链基因（ＴＣＲγ）的克隆性重排检测。结果显示，重排之ＩｇＨ与ＴＣＲγ总比例为３∶１，ＡＬＬ进展期ＩｇＨ占５０％，ＴＣＲγ占２７．３％，双阳性１８．２％，总计阳性率为９５．５％。当骨髓象缓解时克隆重排仍占６０％，ＭＭ有８５％为ＩｇＨ重排，５％为ＴＣＲγ，缓解时仍有２５％呈ＩｇＨ重排。ＴＣＲγ及双阳性所占比例上升与病情恶化呈正相关。因此以这种检测方法来指导化疗可以提高生存率和治愈率。

影响巢式RT-PCR反应效果的因素分析

目的 :探讨癌基因研究中影响巢式反转录聚合酶链式反应 (巢式 RT- PCR)扩增效果的因素。方法 :以巢式RT- PCR法检测 5 5例大肠癌患者门静脉血和 5 4例卵巢癌患者及 10例妇科良性肿瘤患者骨髓中细胞角化蛋白基因 - 19(CK- 19) m RNA的表达 ,并对实验方法进行了改良和优化。结果 :大肠癌中有 5 4.5 %检得 CK- 19阳性 ,卵巢癌中有 6 3.0 %检得 CK- 19阳性 ,10例妇科良性肿瘤无 CK- 19表达。结论 :经过上述三方面措施改良后的巢式 RT- PCR能够用来检测恶性肿瘤患者 CK- 19m RNA的表达 。

^(18)F-脱氧葡萄糖与^(99)Tc^m-亚甲基二膦酸盐骨扫描显像探测恶性肿瘤全身骨转移病灶的对比分析

^99Tc^m-亚甲基二膦酸盐（MDP）全身骨显像是检测恶性肿瘤骨转移的常规方法,而^18F-脱氧葡萄糖（FDG）正电子发射型计算机断层显像（PET）显像可显示具有葡萄糖高代谢水平的骨骼转移病灶。本研究目的是比较^18F-FDG hPET（hybird PET）/CT显像与^99Tc^m-MDP全身骨显像检测恶性肿瘤骨骼病灶的异同点,探讨^18F-FDG hPET/CT显像诊断恶性肿瘤骨转移病灶的临床价值。

肺癌患者血清中21种细胞因子的表达水平及其临床意义

目的:检测肺癌患者血清中21种细胞因子[干扰素诱导的T细胞趋化因子(IFN-inducible T cellαchemoattractant,ITAC)、GM-CSF、Fractalkine、IFN-γ、IL-10、巨噬细胞炎性蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)]、IL-12(p70)、IL-13、IL-17A、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-21、IL-23、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、MIP-1α、MIP-1β和TNF-α的表达情况并分析其意义。方法:收集2015年3月至6月的山西省肿瘤医院40例肺癌患者;采用液相芯片技术检测30名健康人和40例初诊肺癌患者治疗前血清中21种细胞因子的表达水平,分析其与肺癌临床特征之间的关系及表达存在明显差异细胞因子间的相关性。结果:肺癌患者血清中11种细胞因子[(GM-CSF、Fractalkine、IFN-γ、MIP-3α、IL-12(p70)、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、TNF-α]的表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),肺癌患者非转移组与转移组血清中21种细胞因子的表达水平比较无明显差异(P>0.05),肺腺癌(adenocarcinoma,AC)组血清IFN-γ与MIP-1β水平明显高于鳞癌(squamous cell carcinoma,SCC)组(均P<0.05),肺SCC组血清ITAC表达水平明显高于小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)组(P<0.05)。高表达的11种细胞因子在两组间表达的相关性不同。结论:肺癌患者血清中IL-6、IL-8等11种细胞因子表达升高,可能参与了肺癌发生发展,这些高表达的细胞因子或许可用于肺癌的辅助诊断,并为肺癌治疗提供新的靶标。