牙鲆淋巴囊肿病的诊断技术研究

使用本实验室设计的PCR引物 ,在标记反应体系下 ,通过PCR反应合成了碱基数为 172bp的牙鲆 (Paralichthysolivaceus)囊肿病 (Lymphocystisdisease ,LCD)的地高辛标记探针。在其琼脂糖凝胶电泳图 172bp处有明显的亮带 ,由软件分析得出 ,合成探针的浓度为 5 0 0ng/ μl,此结果证明 ,该产物确是所需的探针 ,且具有很好的合成效率。通过实验证明本文采用的核酸探针 杂交诊断方法可以有效地定性和定位LCDV。实验结果还提示 ,LCDV是通过血液在牙鲆体内传播的、并可能同时存在垂直和水平两种传播方式。

牙鲆淋巴囊肿病毒在牙鲆鳃细胞系FG-9307中的增殖

向已建立的牙鲆 (Paralichthysolivaceus)鳃细胞系[1] (FG 930 7)中接种淋巴囊肿病 (Lymphocystisdiseasevirus ,LCDV)、探讨其是否可支持LCDV的增殖。光学显微镜观察发现 :接种 3天后 ,呈纤维状的鳃细胞隆起、立体感加强 ;之后细胞逐渐变圆 ,一周左右绝大部分鳃细胞变圆、呈现了细胞病变 (cytopathiceffect ,CPE)现象。将CPE细胞制作超薄切片 ,电镜观察发现细胞内有大量具囊膜、直径 133～ 186nm的LCDV。CPE细胞的核变形、线粒体增加且空洞化 ,出现了与淋巴囊肿细胞相同的特征。本实验证明 :FG 930 7是可支持LCDV增殖的鱼类细胞系。

牙鲆淋巴囊肿病毒的病原性与免疫原性

用病牙鲆体表肿瘤纯化的病毒 ,对健康牙鲆进行人工感染实验。感染 6 0天后 ,供试牙鲆再现了自然发病鱼的症状。该结果证明 ,从病鱼囊肿物中纯化的病毒 ,确系引发淋巴囊肿病的病原。免疫学实验显示 ,淋巴囊肿病毒使被感染鱼产生了抗体IgM。在实验期间内 ,IgM随着时间的延长而增加。

海参纲动物的吐脏再生

随着现代生命科学的迅猛发展,海参表现出的极强生命现象———再生,引起了生物学家的广泛兴趣、并被作为器官再生的模型来研究。当前,在我国迅速发展的刺参养殖业中,吐脏现象给养殖者造成了很大困惑。为了搞清刺参吐脏的原因、过程及影响因子,结合对中国北方养殖刺参的吐脏再生过程研究结果、参考国内外有关文献,综述了海参再生器官的细胞起源、迁移与增殖机理,以为刺参养殖提供理论参考。

对虾幼体真菌病和纤毛虫病的防治研究

一、材料与方法 本文主要讨论由链壶菌(Lagenidium sp.)引起的对虾幼体真菌病和聚缩虫(Zooth-amnium sp.)引起的纤毛虫病的病原、病理、症状及其防治方法. 试验场地为河北省唐海县一农场育苗室、八农场育苗室及八里滩养殖场育苗室。

RNA干扰技术在水生生物研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物体内1种抑制特定基因表达的机制,在果蝇、线虫、真菌和哺乳动物等很多类生物中存在。RNAi也存在于虾、斑马鱼、海鞘等水生生物中,斑马鱼、海鞘等的研究结果证明:RNAi技术是研究水生生物胚胎发育和基因功能的有效方法。众所周知,海水养殖生物病毒病的防治是世界性难题,利用RNAi技术对病毒的特定基因进行干扰,将是1种新型抗病毒治疗方法。为了积极推动该项技术在中国的应用,文中介绍了RNAi在国际水生生物研究中的状况,分析了应用效果与前景。

牙鲆淋巴囊肿病毒主要衣壳蛋白基因片段真核表达载体的构建、表达与免疫效果评价

用淋巴囊肿病毒LCDV-cn感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,用RTPCR法获得了LCDV-cn主要衣壳蛋白（MCP）0.6kb基因片段.将该LCDV-cn-MCP0.6kb片断克隆入真核表达载体pEGFP-N2,得到重组质粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6.采用脂质体法将重组质粒转染入牙鲆鳃细胞系FEC,并进行瞬时表达.通过荧光显微镜观察和特异性RT-PCR检测,证实重组质粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6kb已成功转染到FEC细胞,并得到了初步表达.将重组质粒肌注入牙鲆体内,检测牙鲆外周血、肠、脾脏、前肾和淋巴细胞的增殖反应、呼吸爆发活性及抗体产生水平.结果表明,构建的核酸疫苗pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6可诱导牙鲆特异性体液免疫和细胞免疫,具有明显的免疫保护作用.

中国对虾肝胰脏细小病毒病的直接荧光抗体法诊断研究

中国对虾肝胰脏细小病毒（ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ，ＨＰＶＤ）是一种广泛流行于中国对虾中的危害性较大的疾病。由于该病没有特异的肉眼症状，因此早期、快速诊断方法的研究就十分重要。作者曾完成了ＳＰＡ协同凝集试验法和免疫金银染色法的诊断研究。本文用直接荧光抗体法进行研究，观察其诊断效果。结果是，将抗ＨＰＶ的荧光抗体滴加到对虾肝胰脏组织涂片以后，在某些样品的肝胰脏上皮细胞中出现了圆形、椭圆形，大小６～１３μｍ的黄绿色荧光物。经比较，该荧光物的大小和形状与同一样品病理组织切片上经Ｈ－Ｅ染色后上皮细胞中出现的ＨＰＶ包涵体是一致的。由此认为，这些存在于肝胰脏上皮细胞内的荧光物是ＨＰＶ包涵体，而直接荧光抗体法用于诊断中国对虾ＨＰＶ是有效可行的。

中国台湾地区及世界部分主要海水养殖国家养殖疾病综述

本文综述了中国台湾地区及世界部分主要海水养殖国家和地区的水产养殖病害情况，对鱼虾贝类的病毒性疾病、细菌性疾病及其他病症的流行情况、防治方法、病原特征、宿主范围和组织病理学特征等进行了较详细的介绍。

对虾越冬期蟹栖拟阿脑虫病的研究

中国对虾人工越冬期经常会发生一种危害极大的纤毛虫病．１９８６年我们在河北省唐海县十里海养殖场越冬对虾体内发现了该纤毛虫并在实验室内进行了研究．几年来，青岛海洋大学、水科院黄海所都对该纤毛虫进行了研究，通常鉴定认为是一种应毛蟹栖拟阿脑虫（Ｐａｒａｎｏｐｈｒｇｓｃａｒｃｉｎｉｓｐｉｒａｌｉｓｎ．ｓｕｂｓｐ以下简称拟阿脑虫）．本研究与同类研究的区别在于探索比较了几种人工培养方法；对拟阿脑虫的生存温度与增殖进行了研究；提出了多种药物的药敏试验结果．

养殖中国对虾肝胰脏细小病毒病的免疫金银染色法诊断研究

80年代以来 ,肝胰脏细小病毒病在养殖中国对虾中广泛流行并造成了一定的损失。作者采用免疫金银染色 (immunogold silver staining,IGSS)技术 ,对患病对虾肝胰脏中的细小病毒(Hepatopancreatic parvovirus,HPV)进行了免疫组织化学的研究。结果表明 ,经 IGSS染色的病虾肝胰脏上皮细胞核内出现了黑色的、圆形或椭圆形、大小为 3～ 15μm的结构。由于该结构与 H- E染色切片上出现的肝胰脏细小病毒包涵体在发生部位、形态和大小上皆一致 ,故而认为该结构为HPV包涵体。证明 ,免疫金银染色法是一种可应用于中国对虾肝胰脏细小病毒病诊断的有效方法。

真鲷淋巴细胞的分离

用Ficoll Paque和Percoll液 ,使用高速离心法对真鲷末梢血中的淋巴细胞进行分离实验。结果指出 ,用Ficoll Paque液分离时 ,2 1 0 0r/min、2 0℃离心 35min ,活淋巴细胞数占全部被分离白血球的 ( 79.5± 6.5) %。当用Percoll液分离时 ,在 1 40 0r/min、2 5℃离心 30min ,淋巴细胞数占全部被分离白血球的 ( 77.2± 4.3) %。可见 ,这 2种分离培养液都可用于真鲷淋巴细胞的分离 ,但在各自的最佳条件下Ficoll Paque的分离效果略好于Percoll。

中国对虾大面积养殖高产技术研究

于1987—1991年,在河北省唐海县十里海养殖场进行了中国对虾大面积集约化养殖高产技术研究,内容报告于下。

世界养殖海水鱼类的病毒病

综述了中国台湾地区及世界其他主 要海水养殖国家和地区的养殖鱼类病毒性疾病的流行情况、防治方法、病原特征、宿主范围 和组织病理学特征，目的在于让养殖者了解鱼类病毒病已在世界范围内频发，希望能引起各 方面的重视。

酵母菌支序分类研究

本文应用支序分类法(Cladistics)对16个属的酵母进行了系统演化研究,酵母菌的分类已有多年历史,但由于形态差异很大,所以在分类上一直存在着不同的看法,亦即存在着不同的分类体系。本文研究的隐球酵母等七个属在分类地位上也有争议,有的学者认为应属于子囊菌纲,有的学者认为应属于半知菌类。本文应用支序分类方法,通过诸多遗传性状的综合系统分析,认为上述7个属的酵母从系统进化和亲缘关系上,应该与子囊菌酵母同属一个发育系统,是与子囊菌酵母平行发展的一类酵母。

栉孔扇贝六种同工酶的生化遗传分析

利用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术对中国栉孔扇贝和日本栉孔扇贝两个自然种群的6种同工酶 (MDH、ADH、G 6 PDH、IDH、GDH、ME)进行了研究 ,得到了基本酶谱 ,对其进行了生化遗传分析。共记录了 1 8个座位 2 8个等位基因并对其差异进行了比较和讨论。两种群各自具有种群内的个体差异及特征谱带 ,可将其作为栉孔扇贝亚种间差异的一种分子标记 ,并为系统分类及贝类学基础研究提供一定的参考数据。

热休克蛋白研究进展

热休克蛋白是生物体在不利环境因素刺激下应激合成的一族进化上高度保守的蛋白质。综述了热休克蛋白在热休克因子和热休克元件调节下的基因表达调控,并讨论了热休克蛋白的生物学功能和它们在海洋生物养殖方面潜在的应用意义。

棕囊藻渤海株核糖体18SrDNA和ITS基因结构序列分析

对分离自渤海赤潮发生区的1株棕囊藻进行核糖体18S rDNA及ITS序列克隆测定,获得了长度为1 648bp的18S rDNA序列和长度为890 bp的ITS序列。对获得的基因序列进行同源性分析,结果表明,该棕囊藻的核糖体18S rDNA及ITS序列均与NCBI数据库中登录的球形棕囊藻的相应序列同源性最高;从GenBank中获取不同地理来源的19种棕囊藻的18S rDNA序列及6种棕囊藻的ITS序列,分别以棕囊藻核糖体18S rDNA和ITS为对象构建了棕囊藻属的系统发育树,从分子生物学角度确定了棕囊藻渤海株为球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)。