痤疮等5种常见皮肤病患者发中微量元素分析

目的 :检测痤疮、银屑病、白癜风、斑秃 (脱发 )、单纯糠疹 5种常见皮肤病患者发样中锌、铁、铜、钙、镁等微量元素的含量 ,分别与成人、儿童正常范围参考值对照 ,为临床诊断治疗提供参考依据。结果 :5种疾病各项微量元素测定结果显示锌元素含量普遍低于正常范围参考值 ;成人痤疮患者发样中锌钙低于正常值 ;斑秃(脱发 )患者铜、锌、钙低于正常值 ;银屑病患者铁锌低于正常值 ;白癜风患者铜锌低于正常值 ;儿童单纯糠疹患者铜、铁、锌、钙低于正常值。结论 :微量元素铜、铁、锌、钙等对常见皮肤病的发病有一定的影响 ,根据检测结果采用富含铜、铁、锌、钙等微量元素的制剂治疗上述皮肤疾病有一定的价值和意义。

马MAVS MAb的制备及其应用于EIAV感染机制的初步研究

线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)是机体先天免疫系统中维甲酸诱导基因I(RIG-I)信号通路唯一的接头蛋白,该蛋白对I型干扰素(IFN-I)的激活以及促炎因子的表达至关重要。因人源MAVS抗体不能识别马MAVS(eqMAVS)蛋白,限制了对马属动物病原体调控RIG-I信号通路的研究。为了制备eqMAVS单克隆抗体(MAb),本研究利用PCR方法克隆缺失跨膜域的eqMAVS(eqMAVSΔTM)并构建重组蛋白表达质粒pET32a-eqMAVSΔTM-his、pGEX-6p-1-eqMAVSΔTM-GST,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并经IPTG诱导后,分别利用His和GST亲和层析柱纯化,结果获得eqMAVSΔTM-his蛋白和eqMAVSΔTM-GST蛋白。以eqMAVSΔTM-his蛋白为免疫原免疫6周龄BALB/c小鼠,经常规免疫程序后进行杂交瘤细胞融合,并以eqMAVSΔTM-GST为检测蛋白以筛选杂交瘤细胞。结果显示共获得两株阳性杂交瘤细胞(4E9、3C4)。选用4E9制备腹水并将MAb纯化后,利用SDS-PAGE鉴定纯化的MAb,结果显示,制备的MAb包含重链、轻链,表明MAb纯化成功。对MAb进行亚类鉴定,结果显示其重链均为IgM型,轻链均为kappa型。间接ELISA检测结果显示1 mg/mL MAb的效价可达2×105。将其应用于western blot检测马单核巨噬细胞eMDM和马胎皮肤细胞NBL-6内源性的MAVS和在HEK293T细胞中过表达的eqMAVS;另外,将MAb应用于western blot检测不同剂量EIAV感染NBL-6后内源性eqMAVS蛋白的表达变化。结果显示,该MAb能够特异性识别NBL-6细胞和eMDM细胞内源性表达的eq MAVS蛋白,以及能够特异性识别HEK293T细胞中过表达的eqMAVS蛋白。EIAV感染试验结果显示,随着EIAV感染剂量的增加,内源性eqMAVS蛋白的表达量递减。上述结果表明,本研究制备了eqMAVS的MAb,并利用该MAb首次证明EIAV对eqMAVS的表达具有负调控作用,该MAb为研究EIAV对抗马源RIG-I信号通路的作用机制提供了重要的研究工具。