Rock-1基因在缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及法舒地尓的预防作用

目的:观察小G蛋白Rho相关激酶(Rock-1)基因在大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)肺组织中的表达规律,探讨法舒地尔(fasudil)对HPH的预防作用。方法:72只SD大鼠随机分为缺氧模型组(H组)和缺氧+fasudil预防组(fasudil组),对照组(C组)。采用常压间断缺氧法复制大鼠HPH模型,右心导管测平均肺动脉压力(mPAP),计算右心室(RV)/[左心室+室间隔(LV+S)]的重量比值作为右心肥厚指数,并用RT-PCR方法测定肺组织Rock-1及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平。结果:mPAP在缺氧7天后明显增高(P<0.01),并随缺氧时间的延长,进一步升高。右心肥厚指数在H组第7天开始升高,第14天与C组比较差异有显著性(P<0.01)。与H组比较,fasudil组mPAP及右心肥厚指数均明显降低(P<0.01)。Rock-1基因在HPH发生早期即明显上调,第7天达高峰后维持于较高水平。α-SMA基因表达第7天明显上调,第14天达高峰,至模型后期仍高于基础表达;Rock-1基因表达较α-SMA提前达到高峰,二者呈显著正相关(r=0.883,P<0.05);fasudil组两基因表达水平均较H组明显降低(P<0.01)。结论:Rock-1基因在HPH大鼠肺组织中出现了明显表达异常,法舒地尔能显著降低mPAP,改善右心室肥厚,并可能通过抑制肺组织Rock-1基因表达发挥作用。

Rho激酶在缺氧性肺动脉高压大鼠不同阶段肺组织中的激活及意义

目的探讨缺氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺组织小G蛋白Rho相关激酶(Rho激酶)的表达及其抑制剂法舒地尔对HPH的影响。方法72只雄性SD大鼠。随机均分为对照组、缺氧模型组和法舒地尔干预组。测各组大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI);采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法,从基因、蛋白质水平观察肺组织Rho激酶表达规律;免疫印迹法检测其底物肌球蛋白磷酸酶的磷酸化状态,作为该激酶功能活化的标志。结果Rho激酶mRNA和蛋白在HPH大鼠发生早期即明显上调,至模型后期仍维持较高水平;肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平也较对照组显著增高(Pa<0.01),并与mPAP及RVHI均呈明显正相关(Pa<0.01);法舒地尔干预后mPAP、Rho激酶mRNA和蛋白、肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平均明显降低。结论HPH大鼠肺组织中存在Rho激酶的表达上调与功能活化,提示Rho/Rho激酶信号通路在HPH发病机制中具起重要作用,其抑制剂法舒地尔有望用于肺动脉高压的治疗。

法舒地尔对大鼠低氧性肺动脉高压及其肺血管结构重建的影响

目的探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)及其肺血管结构重建的影响。方法采用常压间断低氧法建立大鼠HPH模型。雄性SD大鼠24只,随机均分为对照组、模型组和法舒地尔干预组。测各组大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、平均颈动脉压力(mCAP)、右心室肥厚指数(RVHI);光镜下结合图像分析进行肺血管结构重建观察;透射电镜观察肺小动脉内皮细胞超微结构的变化。结果①模型组mPAP、RVHI、肺小动脉管壁厚度与外径比值(WT%)、管壁面积与管总面积比值(WA%)分别为(31.38±1.98)mmHg、0.47±0.03、(31.13±5.74)%、(54.93±3.34)%均明显高于对照组(15.25±0.91)mmHg、0.25±0.02、(13.24±2.03)%、(31.81±3.62)%,P均<0.01;管腔面积与管总面积比值(LA%)为(45.07±3.34)%,明显低于对照组(68.20±3.62)%,P<0.01;透射电镜显示模型组肺小动脉内皮细胞损伤明显,内皮细胞周围平滑肌细胞增生、肿胀,胶原纤维增生。②法舒地尔干预组mPAP、RVHI、WT%、WA%分别为(16.63±1.53)mmHg、0.27±0.02、(17.08±2.24)%、(37.30±3.69)%显著低于模型组(P<0.01),LA%为(62.70±3.69)%明显高于模型组(P<0.01)。法舒地尔干预后肺小动脉内皮细胞损伤、平滑肌细胞及胶原纤维增生均明显减轻。③各组间mCAP差异无统计学意义(F=1.239,P>0.05)。结论法舒地尔对低氧所致的肺动脉高压、右心室肥厚及肺血管结构重建具有较好的预防和逆转作用。

法舒地尔对低氧性肺动脉高压大鼠内皮素-1和一氧化氮表达的影响

目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)表达的影响。方法:将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和法舒地尔干预组各8只。对照组常氧下饲养,每天与模型组同一时间腹腔注射等量生理盐水;模型组每天低氧前腹腔注射生理盐水2 m L/kg;法舒地尔干预组每天低氧前腹腔注射法舒地尔15 mg/kg,用生理盐水稀释成2 m L/kg给药。模型组和法舒地尔干预组采用常压间断低氧法建立大鼠HPH模型,低氧浓度为10.0%±0.5%,每天低氧8 h,每周低氧6 d,共21 d。测定各组大鼠平均肺动脉压力(m PAP)、右心室肥厚指数(RVHI);应用放射免疫法和硝酸还原酶法分别测定血浆ET-1和NO水平;光镜下观察大鼠肺血管形态结构。结果:模型组的m PAP、RVHI、ET-1水平均高于法舒地尔干预组和对照组,而NO水平低于法舒地尔干预组和对照组(P均<0.01)。模型组大鼠的m PAP、RVHI与血浆ET-1水平呈正相关,与血浆NO水平呈负相关;血浆ET-1与NO水平呈负相关(P均<0.01)。模型组大鼠肺小动脉管壁普遍增厚,管腔明显狭窄,法舒地尔干预组肺小动脉管壁增厚程度及管腔狭窄程度显著减轻。结论:法舒地尔能显著降低HPH大鼠血浆ET-l水平和上调NO水平,阻抑肺动脉高压的进展。

Rho激酶在肺动脉高压大鼠肺组织中的表达

目的探讨Rho激酶在肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及其作用机制。方法48只雄性SD大鼠,随机分为对照组和模型组,测大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI)。采用RT-PCR及Western blot法,从基因和蛋白水平观察肺组织Rho激酶表达;Western blot法检测其底物肌球蛋白磷酸酶的磷酸化状态,作为该激酶功能活化标志。结果Rho激酶mRNA和蛋白在肺动脉高压早期即明显上调,后期仍维持于较高水平;肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平也较对照组显著增高(P均<0.01),并与mPAP及RVHI均呈显著正相关(P均<0.01)。结论肺动脉高压大鼠肺组织中存在Rho激酶的表达上调与功能活化,提示Rho激酶在肺动脉高压发病机制中具有重要作用。

低氧性肺动脉高压大鼠肺组织Rho激酶的表达及意义

目的探讨低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺组织小G蛋白Rho相关激酶(Rho激酶)的表达及其抑制剂法舒地尔对HPH的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机均分为对照组,低氧模型组和法舒地尔干预组。测各组大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI);采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Westernblot),从基因、蛋白质水平观察肺组织Rho激酶表达变化;免疫印迹法检测其底物肌球蛋白磷酸酶的磷酸化状态,作为该激酶功能活化的标志。结果低氧模型组Rho激酶mRNA和蛋白明显升高,肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平也较对照组显著增高,并与mPAP及RVHI均呈明显正相关(均P<0.01)。法舒地尔干预后mPAP、RVHI、Rho激酶mRNA和蛋白、肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平均明显降低。结论 Rho/Rho激酶信号通路在HPH发病中具有重要作用,法舒地尔通过抑制Rho激酶的表达,对低氧所致的肺动脉高压、右心室肥厚具有较好的预防和逆转作用。

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织小G蛋白Rho相关激酶1的表达及其干预作用

目的观察缺氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺组织中小G蛋白Rho相关激酶1(Rock1)表达情况,探讨其抑制剂法舒地尔(fasudil)的干预作用。方法30只雄性SD大鼠,随机分为对照组、缺氧组、缺氧+1、51、5 mg/(kg.d)法舒地尔组。测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、平均颈动脉压(mCAP)、右心肥厚指数(RVHI);半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测肺组织Rock1的表达。结果与对照组比较,缺氧组mPAP、RVHI、肺组织Rock1 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(F=328.87,304.27,218.89,370.37 P均<0.01);与缺氧组比较,法舒地尔组上述指标均明显下降(F=52.86,48.10,104.94,174.0 P均<0.01),且呈剂量依赖关系;各组间mCAP差异无显著性(F=1.10 P>0.05)。结论Rock1在HPH大鼠肺组织中表达上调,其抑制剂法舒地尔能显著降低mPAP,减轻右心室肥厚,有望用于肺动脉高压的治疗。

川崎病患儿血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α与心肌酶谱变化和冠状动脉损伤的关系

目的探讨川崎病(KD)患儿血清CRP、TNF-α与冠状动脉损伤及心肌酶谱变化的关系。方法选择确诊为KD患儿34例,其中20例无冠状动脉损伤,14例有冠状动脉损伤,按病程分为急性期、亚急性期和恢复期。另以年龄相仿的门诊体检健康儿童15例为健康对照组。应用免疫散射比浊法、双抗体夹心酶联免疫吸附法和全自动生化分析仪对各组进行血清CRP、TNF-α和心肌酶谱检测,并通过超声心动图检查患儿冠状动脉情况。结果KD患儿治疗前急性期血清CRP、TNF-α和CK-MB分别为(35.73±21.97)mg/L、(2.14±0.81)μg/L、(36.48±13.87)U/L,均显著高于健康对照组[(3.02±2.79)mg/L、(0.79±0.37)μg/L、(19.21±9.81)U/L](t=5.713,8.010,4.351 Pa<0.01);治疗后患儿上述指标分别为(6.05±4.99)mg/L、(0.83±0.65)μg/L、(21.42±11.51)U/L,基本恢复至正常水平。有冠状动脉损伤的KD患儿血清CRP、TNF-α水平分别为(46.29±30.43)mg/L和(2.88±0.53)μg/L,显著高于无冠状动脉损伤的患儿[(28.34±8.06)mg/L和(1.62±0.52)μg/L](t=2.904,6.904 Pa<0.05)。血清CRP、TNF-α水平与CK-MB水平均呈显著正相关(r=0.711,0.889 Pa<0.01)。结论KD患儿血清CRP、TNF-α的升高与患儿急性炎性反应程度密切相关,同时也可作为预测KD患儿心肌损伤及冠状动脉病变的重要参考指标。

血、尿肿瘤坏死因子-α在过敏性紫癜患儿中的表达

目的探讨血、尿肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在过敏性紫癜(HSP)患儿中的表达。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法对56例HSP患儿的血、尿TNF-α水平进行检测,同时应用免疫散射比浊法检测尿微量白蛋白水平,并与35例健康儿童(对照组)的检测结果进行对比分析。结果 HSP患儿血、尿TNF-α及尿微量白蛋白均高于对照组的,差异有统计学意义(t=31.55,19.16,13.14;P均<0.01);肾损害组血、尿TNF-α及尿微量白蛋白明显高于无肾损害组,差异有统计学意义(t=7.82,8.09,7.92;P均<0.01);血、尿TNF-α与尿微量白蛋白水平呈明显正相关(r=0.56,0.66;P均<0.01)。结论 TNF-α可能参与HSP及其肾损害的发病过程,TNF-α水平增高可作为儿童HSP早期肾损害的判断指标之一。

川崎病89例临床分析

目的 :分析川崎病的临床特点 ,探讨川崎病的诊断和治疗。方法 :对川崎病 89例作回顾性分析。结果 :川崎病的诊断主要依靠临床表现、实验室检查。结论 :早期诊断 ,早期静脉输入丙种球蛋白加口服阿司匹林治疗 。

过敏性紫癜患儿血清可溶性血管细胞黏附分子-1及肿瘤坏死因子-α表达的意义

目的探讨血清可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在过敏性紫癜(HSP)患儿表达的意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法分别测定68例HSP患儿(其中急性期40例,恢复期28例)及25名健康儿童血清sVCAM-1、TNF-α水平,分别比较其急性期和恢复期及有或无肾损害HSP患儿上述因子表达水平。结果 HSP急性期患儿血清sVCAM-1和TNF-α水平明显高于恢复期和对照组,且二者呈显著正相关;肾损害组血清sVCAM-1、TNF-α水平明显高于无肾损害组。结论 sVCAM-1、TNF-α可能参与HSP发病过程,血清sVCAM-1、TNF-α水平增高可作为儿童HSP肾损害的判断指标之一。

极低出生体重儿早期静脉营养的临床研究

目的研究极低出生体重儿对早期静脉营养的耐受情况和疗效。方法32例极低出生体重儿随机分为2组:经典静脉营养组(CPN)和实验静脉营养组(EPN)。CPN组生后24～48h内仅给予5%～10%葡萄糖,之后加6%小儿氨基酸和20%脂肪乳,氨基酸从1.0g/(kg·d)开始每日递增0.5g/(kg·d),直至3.0g/(kg·d);脂肪乳选用含中长链脂肪酸,从0.5g/(kg·d)开始每日递增0.5g/(kg·d),直至3.0g/(kg·d)。EPN组生后24h内起即予6%小儿氨基酸2.4g/(kg·d)和脂肪乳2.4g/(kg·d),72h内均增至3.0g/(kg·d),即达到足量静脉营养。1周内每天计算总热卡包括胃肠内和胃肠外热卡,检测入院72h内和1周后监测血脂、胆红素、肾功能、血碳酸氢盐、血糖等生化指标,并记录体质量最大丢失,计算1周后可以部分胃肠营养的患儿百分比、恢复出生体质量时间和达到完全胃肠营养时间等指标。结果与CPN组相比,EPN组的总能量摄入以及胃肠外提供热卡在生后前5d明显增高,1周内体质量丢失较少,恢复出生体重时间和恢复完全胃肠营养时间缩短,且未增加代谢性酸中毒、脂质代谢紊乱、高胆红素血症以及肾功能损伤等并发症。结论极低出生体重儿早期可以耐受较大剂量的静脉营养,且有一定的临床效应。

Cys C、TNF-α、β_2-MG联合检测对过敏性紫癜患儿早期肾损害的诊断价值

目的探讨胱抑素C(Cys C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及β2-微球蛋白(β2-MG)联合检测对过敏性紫癜(HSP)患儿早期肾损害的诊断价值。方法 72例HSP患儿(HSP组)和25例健康儿童(对照组),采用奥林巴斯2700全自动生化分析仪检测两组血清Cys C,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清TNF-α,放射免疫分析法检测血清及尿β2-MG。结果 HSP组血清Cys C、TNF-α、β2-MG和尿β2-MG水平均明显高于对照组(P均<0.01)。HSP组血清Cys C检测阳性率为63.89%、TNF-α为51.39%、β2-MG为41.67%,尿β2-MG为52.77%;四项指标联合检测阳性率为84.72%,均高于各单项检测(P均<0.01)。结论联合检测Cys-C、TNF-α、β2-MG可作为临床诊断HSP患儿早期肾损害的方法。

囊泡单胺转运体在人胚胎脑组织中的分布特征及其与帕金森病的关系

目的探讨囊泡单胺转运体(VMAT2)在人胚胎脑组织中的分布特征及其与帕金森病(PD)的关系。方法分别收集不同胎龄自然流产的新鲜胎儿脑组织,应用免疫组织化学方法和Western blot观察VMAT2和酪胺酸羟化酶(TH)在胎脑黑质致密部、腹侧被盖部和蓝斑分布的变化。结果免疫组织化学及Western blot显示,VMAT2在胎脑黑质致密部中的分布既少于腹侧被盖也少与蓝斑(均P<0.05)。结论胎脑VMAT2在黑质致密部中的分布少于腹侧被盖和蓝斑,黑质致密部保护作用薄弱可能是PD黑质多巴胺能神经元选择性受损的重要原因之一。

病毒性脑炎患儿血清和脑脊液VCAM-1、TNF-α变化及其意义

目的探讨血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在病毒性脑炎发病中的意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定68例病毒性脑炎患儿急性期和恢复期血清及脑脊液VCAM-1、TNF-α水平,对照组为15例先天性畸形需外科手术患儿。结果病毒性脑炎患儿急性期血清、脑脊液VCAM-1和TNF-α分别为(15.68±2.90)μg/L、(17.18±3.67)μg/L和(2.09±0.45)μg/L、(2.25±0.54)μg/L,均高于对照组的(4.48±1.28)μg/L、(4.17±1.12)μg/L和(0.78±0.57)μg/L、(0.79±0.38)μg/L,差异有统计学意义(t=9.76～14.38,P均<0.01);恢复期病毒性脑炎患儿血清、脑脊液VCAM-1和TNF-α水平分别为(7.54±1.06)μg/L、(7.72±1.22)μg/L和(0.87±0.41)μg/L、(0.96±0.35)μg/L,与急性期比较差异有统计学意义(t=16.43～22.21,P均<0.01);脑脊液VCAM-1、TNF-α水平与血清VCAM-1、TNF-α水平呈显著正相关(r=0.728、0.716,P均<0.01),病毒性脑炎组血清及脑脊液VCAM-1与TNF-α也成显著正相关(r=0.747、0.729,P均<0.01)。结论 VCAM-1、TNF-α可能参与病毒性脑炎发病的病理过程,血清及脑脊液中VCAM-1、TNF-α水平检测对儿童病毒性脑炎的诊断有一定临床意义。

血清胱抑素C和尿转铁蛋白在过敏性紫癜患儿早期肾损伤的诊断

目的:探讨血清胱抑素C(cystatin C,Cys-C)和尿转铁蛋白(urinary transferrin,TRF)对过敏性紫癜肾功能早期损害诊断的临床价值。方法:选择明确诊断为过敏性紫癜患儿82例,其中42例不伴有肾损害,40例伴有肾损害;另以年龄相仿的门诊体检健康儿童50例为正常对照组。应用散射免疫比浊法进行检测血清Cys-C、尿TRF和放射免疫法进行尿β2微球蛋白(β2microglobulin,β2-MG)检测。结果:过敏性紫癜患儿血Cys-C和尿TRF值与对照组比较均有显著性差异(P<0.01),伴有肾损害者升高更显著。结论:血Cys-C和尿TRF可作为反映过敏性紫癜早期肾损害的指标。

大剂量地塞米松治疗小儿免疫性血小板减少症的临床研究

目的:探讨大剂量地塞米松治疗小儿免疫性血小板减少症(ITP)的临床疗效。方法:将60例初诊ITP患儿随机分为治疗组和对照组(各30例),治疗组用大剂量(1mg·kg^-1·d^-1)地塞米松静脉滴注,对照组用常规剂量(0.25mg·kg^-1·d^-1)地塞米松静脉滴注,比较两组患儿的血小板恢复情况、总有效率及不良反应。结果:治疗组的血小板开始上升时间为(2.95±1.32)d、血小板恢复正常所需时间为(5.86±2.46)d、治疗1周后的血小板数为(152.26±65.73)×10^9L^-1、两周后的血小板数为(212.31±85.26)×10^9L^-1、4周后的血小板数为(181.72±69.68)×10^9L^-1,均优于对照组[对应数值分别为(5.32±2.65)d、(8.53±3.32)d、(85.72±40.68)×10^9L^-1、(163.58±65.82)×10^9L^-1、(116.43±49.75)×10^9L^-1],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组的总有效率(86.67%)高于对照组(63.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组中有1例患儿出现高血压副作用,对照组中未出现副作用,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大剂量地塞米松治疗小儿初诊ITP的疗效比常规剂量地塞米松更显著,两者不良反应均轻微,安全性较好。

肿瘤坏死因子-α和N末端脑利钠肽在川崎病患儿中的变化及临床意义

目的:探讨血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和N末端脑利钠肽(NT-pro BNP)在川崎病(KD)患儿中的临床意义。方法:选择确诊为KD的48例患儿为KD组,并选取年龄相仿的门诊体检健康儿童20例为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法和全自动化学发光免疫分析仪对两组儿童血清TNF-α、NT-pro BNP和肌钙蛋白I(c Tn I)水平进行检测,并通过超声心动图检测冠状动脉情况,将KD组分为冠状动脉损害(CAL)组和无冠状动脉损害(NCAL)组。结果:急性期KD患儿的血清TNF-α、NTpro BNP和c Tn I水平分别为(2.11±0.76)μg/L、(0.88±0.19)μg/L、(0.28±0.16)μg/L,均显著高于恢复期KD组[(0.90±0.32)μg/L、(0.16±0.07)μg/L、(0.14±0.04)μg/L]和对照组[(0.75±0.38)μg/L、(0.12±0.05)μg/L、(0.13±0.05)μg/L]。CAL组血清TNF-α、NT-pro BNP和c Tn I水平分别为(2.83±0.45)μg/L、(0.97±0.19)μg/L、(0.35±0.19)μg/L,显著高于NCAL组的(1.67±0.54)μg/L、(0.83±0.17)μg/L、(0.24±0.13)μg/L。KD患儿急性期血清TNF-α、NT-pro BNP水平与c Tn I水平均呈显著正相关(r分别为0.641、0.731,P<0.01)。结论:血清TNF-α和NT-pro BNP水平与KD患儿的心血管损害关系密切,对预测KD患儿心肌和冠状动脉损伤有重要的临床价值。