NEDD4促进非小细胞肺癌继发厄洛替尼耐药

目的探讨NEDD4(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 4)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)继发厄洛替尼耐药中的作用。方法以HCC827细胞及耐厄洛替尼的HCC827(HCC827/ER)细胞为工具,CCK-8法检测HCC827/ER细胞的耐药指数;实时荧光定量PCR(quantitative real-time,q PCR)及Western blot检测厄洛替尼处理48 h后,NEDD4 mRNA和蛋白在两种细胞中的表达及PI3K/AKT信号通路活化情况。NEDD4小干扰RNA(si NEDD4)转染HCC827/ER细胞,比较处理前后HCC827/ER细胞的厄洛替尼IC50变化以及PI3K/AKT信号通路活化情况。裸鼠成瘤实验在活体水平上进一步验证NEDD4在NSCLC继发厄洛替尼耐药中的作用。结果HCC827/ER细胞的耐药指数为(118.23±23.77);HCC827/ER细胞NEDD4 mRNA和蛋白以及PI3K/AKT信号通路活化水平均高于HCC827细胞;HCC827/ER细胞成功转染si NEDD4后,转染组的PI3K/AKT信号通路活化水平降低,且厄洛替尼IC50值明显低于对照组(P<0.05)。裸鼠成瘤实验中转染组肿瘤对厄洛替尼的敏感性明显增加,与阴性对照组比较,药物处理组肿瘤生长受到明显的抑制。结论NEDD4通过激活PI3K/AKT信号通路促进NSCLC继发厄洛替尼耐药。

YAP1在人肺腺癌细胞厄洛替尼耐药中的作用

目的探讨Yes相关蛋白1(YAP1)基因在肺腺癌耐厄洛替尼(ER)中的作用及可能机制。方法在PC-9细胞与耐ER PC-9细胞(PC-9/ER)中,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测YAP1 mRNA表达;Western印迹与间接免疫荧光分别检测YAP1蛋白表达与定位。以YAP1抑制剂维替泊芬(VP)作用PC-9/ER细胞后,比较处理前后YAP1 mRNA和蛋白表达改变、Yap1下游AKT、p-AKT分子表达变化、Cell Counting Kit 8(CCK-8)法计算PC-9/ER耐药指数改变。结果 PC-9/ER耐药指数为99.80±25.81;与PC-9细胞相比较,YAP1 mRNA和YAP1蛋白在PC-9/ER中表达增高;VP抑制效率为(50.96±5.86)%,同时下调了下游AKT、p-AKT蛋白的表达;PC-9/ER细胞的ER半数抑制浓度(IC50)由(11.10±2.72)降低为(1.47±0.32)μmol/L(P=0.024),耐药指数降为原来的1/8。结论 YAP1介导耐ER肺腺癌的作用机制可能是通过PI3K/AKT信号通路,YAP1可能成为肺癌治疗的靶标。