二氢青蒿素结合SERCA2b诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡的机制研究

目的探讨二氢青蒿素(DHA)与肌浆/内质网钙ATP酶(SERCA)的结合位点及其通过线粒体途径诱导人结肠癌HCT-116细胞凋亡的作用机制。方法分别于不同浓度(0,10,20,40μmol/L)DHA环境中培养HCT-116细胞24 h后,用Western blotting检测细胞中SERCA2蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;行Hoechst核染色;用JC-1探针检测细胞线粒体膜电位。通过LeDock分子对接方法,预测DHA与SERCA的结合位点。基于生物膜干涉技术,将合成的Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白和非突变蛋白分别与小分子DHA进行结合检测。结果Western blotting与CCK-8检测结果显示,随着DHA浓度升高,SERCA2蛋白表达水平显著下降,细胞增殖显著降低,并呈剂量相关(P<0.01)。Hoechst核染色显示,DHA诱导了HCT-116细胞核变圆、固缩。JC-1探针检测结果表明,在DHA处理4 h内,线粒体膜电位逐渐降低,其后线粒体膜电位则出现明显降低。分子对接预测提示DHA与Thr316形成氢键相互作用,与Ile315则有疏水相互作用。进一步的生物膜干涉技术提示DHA与SERCA2b非突变蛋白结合信号良好,而与Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白结合信号较差。结论DHA可直接与SERCA2b的Ile315与Thr316位点结合,并通过线粒体途径诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡。

二氢青蒿素对结肠癌细胞HCT116凋亡基因表达图谱的影响

目的探讨二氢青蒿素(DHA)诱导结肠癌细胞HCT116凋亡基因差异表达。方法利用RT ProfilerTM PCR ArrayHuman Apoptosis和实时定量PCR方法对DHA组和对照组HCT116细胞的84种凋亡基因表达进行mRNA水平的检测。结果与对照组比较,DHA组细胞中,35种凋亡基因表达水平显著改变,TNFα、TRAILR、CASP、GADD45等促凋亡基因的表达显著上调(Fold Up-regulation>2);BCL2、AKT、BAG1等抗凋亡基因表达显著下调(Fold Down-regulation<-2)。结论 DHA通过涉及内质网应激、死亡受体介导和线粒体途径等复杂的分子机制诱导HCT116细胞凋亡。

SERCA3在结直肠癌细胞中异常表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌中肌浆网/内质网钙离子转运ATP酶3(sarcoendoplasmic reticulum Ca^(2+) transporting ATPase 3,SERCA3) mRNA的表达与临床病理特征的关系。方法收集40例病理确诊的结直肠癌腺癌组织及其癌旁正常组织标本。采用实时RT-PCR检测SERCA3 mRNA表达,分析其与患者临床病理特征的关系。结果结直肠癌标本中SERCA3 mRNA表达较癌旁正常组织低(P<0.05)。结直肠癌SERCA3 mRNA水平在淋巴结转移和TNM分期方面比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论结直肠癌组织中SERCA3的异常表达与结直肠癌淋巴结转移和TNM分期密切相关。