阿糖胞苷对原代培养的大鼠海马和大脑皮层神经元生物学特性的影响

目的:探讨阿糖胞苷(Ara-C)不同浓度、不同介入时间以及不同处理时长对原代培养的大鼠海马和大脑皮层神经元纯度及活性的影响。方法:取孕16~18 d的胎鼠海马及皮层组织进行原代神经元培养,培养后48 h分别加入浓度为0、2.5、5、7.5、10μmol/L的Ara-C处理24 h,检测不同浓度的Ara-C对原代神经元生物学特性的影响;培养后24、48、72、96及120 h,加入5μmol/L的Ara-C处理24 h,检测Ara-C不同介入时间对原代神经元生物学特性的影响;培养后48 h,加入5μmol/L的Ara-C处理0、6、12、24、48 h,检测Ara-C不同处理时长对原代神经元生物学特性的影响。培养后第8天倒置显微镜下观察细胞的形态及生长状况,免疫荧光检测微管相关蛋白2(MAP2)、神经纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,并计算MAP2阳性细胞占细胞总数的比例。使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测神经元细胞活性。结果:与对照组(0μmol/L)相比,Ara-C浓度为5μmol/L组海马神经元纯度达89.8%、细胞活性为48.6%。与对照组相比,种板后48 h加入Ara-C获得的海马神经元纯度为96.2%,细胞活性为44.8%。与对照组(0 h)相比,Ara-C处理12 h组获得的海马神经元的纯度为90.8%,细胞活性为47.5%。在大鼠原代培养的皮层神经元中,与对照组(0μmol/L)相比,给予不同浓度的Ara-C(2.5、5、7.5、10μmol/L)处理,原代皮层神经元纯度的差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,给予不同介入时间(24、48、72、96、120 h)的Ara-C处理,皮层神经元纯度的差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组(0 h)相比,给予不同时长(6、12、24、48h)的Ara-C处理,仅Ara-C处理24 h后皮层神经元纯度稍增高(P<0.05)。结论:在大鼠原代海马神经元的早期培养过程中,种板后48 h加入5μmol/L Ara-C处理12 h得到的海马神经元的纯度与活性最佳,而在大鼠原代皮层神经元培养中无需添加Ara-C即可获得较高纯度和活性的神经元。

三十日龄Fmr1基因敲除小鼠的水迷宫实验观察

目的实验对30日龄的Fmr1基因敲除(KO)小鼠的经典Morris水迷宫实验进行观察。方法采用Morris水迷宫实验,测试1月龄KO小鼠与WT小鼠的学习记忆功能。水迷宫实验共训练4 d,记录每天的潜伏期与游泳轨迹,第5天去除平台,记录小鼠停留各象限的时间百分比。根据所获得的数据进行多因素方差分析处理。结果①空间航行实验第1天至第3天实验中KO鼠与WT鼠的潜伏期和穿越平台次数差异无统计学意义(P>0.05);在第4天实验中KO鼠的潜伏期和穿越平台次数比WT鼠差异有统计学意义(P<0.05)。②空间搜索实验4周龄WT鼠在目标象限停留时间比其它象限停留时间长;4周龄KO鼠在第二象限停留时间长。结论 30日龄KO小鼠存在认知功能障碍。

γ-氨基丁酸能神经元在新生大鼠缺氧性痫性发作中的作用

目的通过观察新生大鼠早期发育过程中及缺氧性痫性发作后海马组织病理改变以及原癌基因c-fos蛋白、谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)的变化,探讨γ-氨基丁酸(γ-amino butylic acid,GABA)能神经元在缺氧性痫性发作中的作用及可能的影响机制。方法采用出生后10d的SD大鼠建立改良Jensen缺氧诱导痫性发作模型,分为痫性发作后1d、3d、7d、14d 4组,并选取相应时间点正常大鼠为对照组,采用尼氏染色方法检测海马组织的组织病理变化,免疫组织化学法检测各组海马c-fos蛋白灰度值以及GAD阳性神经元数量的改变。结果尼氏染色结果显示,各缺氧性痫性发作组海马区形态结构正常,细胞排列略稀疏,但未见明显的细胞丢失。免疫组化结果显示,与对照组比较,c-fos蛋白灰度值在痫性发作后7d,在缺氧性痫性发作组海马CA1、CA3和DG区明显地降低(P<0.05);GAD阳性细胞数在痫性发作后7～14d,缺氧性痫性发作组海马CA1、CA3和DG区明显地减少(P<0.05)。结论缺氧性痫性发作后14d内并没有造成大鼠海马区及时或迟发性细胞丢失,但c-fos表达在大鼠海马区有迟发性增高;缺氧性痫性发作后海马GABA神经元数量的减少可能是新生大鼠缺氧诱导痫性发作后癫痫易感性升高的原因之一。

143例广东籍汉族人转化生长因子TGFβ1T869C基因多态性检测

目的了解广东籍汉族人转化生长因子TGFβ1 T869C基因的分布特点。方法应用聚合酶链反应技术对143例广东籍正常人转化生长因子TGFβ1 T869C基因进行扩增,以PstΙ进行限制性内切酶酶切图谱分析,并结合文献进行了不同地区间的分析比较。结果转化生长因子TGFβ1+869 C/C、C/T、T/T表型频率分别为:0.216 8、0.475 5、0.307 8,转化生长因子TGFβ1+869 C、TGFβ1+869T基因频率分别为:0.454 5、0.545 5。结论转化生长因子TGFβ1 T869C基因多态性在不同地区间分布存在着一定的差异。

人胎儿前额叶皮质生长抑素免疫反应限性神经元的发育

本文用免疫细胞化学方法研究了人胎儿前额叶皮质生长抑素免疫反应阳性神经元的分布和发育。结果表明，生长抑素阳性神经元于16周开始出现于皮质下板；16～30周，皮质下板生长抑素阳性神经元的密度逐渐增高，但到30～38周其密度无明显差异。18周之前，皮质下板生长抑素神经元以双极细胞为主，染色淡，突起短；以后其形态逐渐转为以多极细胞为主，染色加深，突起变长。随着胳龄增大，生长抑素阳性神经元由深至浅依次出现于皮质各层内。本实验结果证实，人类前额叶皮质生长抑素阳性神经元的出现较以往的报道早6周。

胱硫醚-β合成酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系

目的探讨胱硫醚-β合成酶基因CBS 844ins 68基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法运用多聚酶链反应技术检测76例颅内动脉瘤及143例正常人CBS 844ins 68基因多态性。结果 颅内动脉瘤组CBS 844ins 68 D/D、D/I、I/I基因型频率(%)分别为78.95、19.74、1.31,对照组分别为78.32、18.88、2.8,CBS 844ins 68各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的无显著性差异(p>0.05)。结论胱硫醚-β合成酶多态性与颅内动脉瘤无明显相关。

小白蛋白在新生大鼠缺氧后癫痫易感性升高中的作用机制

目的观察新生大鼠早期发育过程中及缺氧性痫性发作后海马小白蛋白(parvalbumin,PV)表达量和海马神经元内Ca2+荧光强度的改变,探讨PV在新生大鼠缺氧后癫痫易感性升高中的作用机制。方法采用出生后10 d的SD大鼠分为缺氧组与对照组(各64只),缺氧组建立改良Jensen缺氧诱导痫性发作模型,于1 d、3 d、7 d、14 d各组分别取16只大鼠取脑,免疫组化和免疫印迹检测海马PV的表达,流式细胞术检测海马神经元内Ca2+荧光强度。结果缺氧后7 d,海马CA1区、CA3区及DG区PV免疫阳性细胞数均明显减少,至缺氧后14 d,稍增加至对照组3 d的水平,而PV含量在缺氧后7 d、14 d则明显减少。对照组PV免疫阳性细胞数和PV含量在CA1区、CA3区及DG区均从3 d开始增加,并持续至14 d。与对照组比较,缺氧后海马神经元内Ca2+荧光强度增加。结论新生大鼠缺氧诱导痫性发作后海马PV表达减少可能导致其癫痫易感性升高。缺氧后细胞内游离Ca2+增加可能导致PV神经元损伤。

富硒金银花标准化栽培技术(下)

（续第3期）三、病虫害防治隆回县金银花主产地处于高寒山区，主要病虫害有白粉病、蚜虫等。以绿色食品为目标的金银花生产，应少使用农药，在病虫防治上，贯彻预防为主、农业防治为主的综合防治方针，减少农药施用，全面禁止使用对人体有害的高毒高残留农药，全面禁止花蕾期用药，确保产品达到绿色食品标准。病虫害主要防治技术如下：1．加强肥培管理金银花施肥应以腐熟有机肥为主，氮、磷、钾比例协调，不偏施氮肥，防止枝叶徒长，抗性降低，同时要防止施肥不足造成植株衰弱，降低抗病虫能力。

采用PCR方法检测Fmr1基因敲除小鼠的基因型

目的为Fmr1基因敲除小鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。方法设计两对引物扩增野生型Fmr1基因和Fmr1缺陷突变基因的DNA片段,用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度,并将所得基因型结果与经典的western blot方法比较。结果野生型仅在800bp处有一条条带,突变纯合子仅在500bp处有一条条带,杂合子则在500bp和800bp处出现两条条带。用PCR方法获得的Fmr1基因分析结果与经典的western blot方法获得的结果完全一致。结论用PCR方法分析Fmr1基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。

促红细胞生成素对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及对AKT蛋白表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及对蛋白激酶B(AKT)蛋白表达的影响。方法 30只成年雄性SD大鼠先按随机数字表法分为2组,假手术(Sham)组(n=6)和模型(Model)组(n=24);模型组采用腹主动脉缩窄术建立CHF模型,术后8周存活16只,再随机分为EPO组与对照(Control)组各8只。EPO组予以3 000 U/kg EPO腹腔注射,3次/周,连续4周;Sham组、Control组给予等量的生理盐水。分别在术后4周、8周、12周(即给药4周)行心脏彩超检查大鼠心功能。第12周末全部大鼠禁食24 h后处死,观察心肌组织细胞形态、心肌细胞凋亡及计算凋亡指数(AI);采用Western blot法检测心肌P-AKT/AKT蛋白表达情况。结果超声心动图显示Model组4周时出现心室肥厚,8周时出现心力衰竭;EPO干预4周后较Control组左室射血分数(LVEF)明显升高(P<0.05),收缩末期室间隔厚度(IVSs)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)、舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)明显降低(P<0.05)。EPO组AI较Control组显著降低(23.87%±1.45%vs 35.58%±2.81%,P<0.01);与Sham组(0.81±0.17)比较,Control组(0.35±0.06)P-AKT/AKT OD值明显降低,EPO组(1.61±0.16)较Control组升高(P<0.01)。结论 EPO可有效改善CHF大鼠的心功能,抑制心肌细胞凋亡,促进AKT的磷酸化。

海马内注射内皮素-1导致大鼠痫性发作和海马硬化的初步研究

目的观察大鼠海马内注射内皮素(endothelin,ET)-1是否导致大鼠痫性发作和海马硬化。方法立体定位在成年大鼠海马CA3区内分别注射1μL ET-1(200 pmol,15只)、海人酸(kainate,KA5 pmol,15只)或磷酸盐缓冲液(PBS,0.01 mol,8只),观察大鼠行为学、脑电及对侧海马病理学改变。结果海马注射PBS后大鼠未见痫性发作,脑电图呈10～15 Hz、150～200μV基本节律。注射ET-1或KA2 h内大鼠出现不同程度的痫性发作和脑电图异常改变(尖波或尖慢波),KA组3～5级发作率高于ET-1组(86.67%vs 16.67%,P<0.05)。部分ET-1和KA组大鼠在给药后2～3周可见癫痫样发作行为学改变。与PBS组比较,ET-1和KA组给药后48 h对侧海马各区Nissl染色细胞数明显减少,GFAP表达增强(P<0.05);给药后30 d,对侧CA3区和门齿区苔藓纤维出芽评分高于PBS组(P<0.05)。结论海马注射ET-1可以导致大鼠癫痫样行为改变和海马硬化。

丰富环境对局灶性脑梗死大鼠旷场和水迷宫行为学及Nogo-A蛋白表达的影响

目的探讨丰富环境对局灶性脑梗死大鼠运动功能、学习记忆及Nogo-A蛋白表达的影响。方法手术组予线栓法制作SD大鼠右侧大脑中动脉缺血模型,术后24 h随机分为丰富环境组和标准环境组,分别饲养于普通鼠笼及丰富环境鼠笼;另设假手术组,不线栓大脑中动脉,其余步骤与手术组相同。各组分别在术后7、14、28 d分别用旷场实验、水迷宫实验进行行为学分析。术后28 d行为学分析后取脑,行免疫组化观察各组Nogo-A阳性细胞表达情况。结果术后28 d丰富环境组的运动总路程[(4 360±854)cm]与标准环境组[(2 362±694)cm]比较,差异有统计学意义(P<0.001)。定位航行实验,丰富环境组在术后14、28 d的潜伏期[分别为(33.0±5.8)s、(24.5±3.1)s]与标准环境组[分别为(46.6±6.0)s、(35.6±4.7)s]比较,差异有统计学意义(P<0.001)。空间探索实验,丰富环境组在术后28 d的穿越平台次数[(6.6±1.9)次]与标准环境组[(3.2±1.5)次]比较,差异有统计学意义(P<0.001)。丰富环境组梗死灶周围Nogo-A阳性细胞数(86.7±6.7)与标准环境组(117.5±8.3)比较,差异有统计学意义(P<0.001)。结论丰富环境能促进脑梗死大鼠的运动能力、记忆力的恢复。丰富环境能降低脑梗死大鼠梗死灶周围Nogo-A蛋白表达,从而促进神经再生。

阻断肾素-血管紧张素系统对肾小球硬化大鼠肾TGFβ_1的影响及意义(英文)

目的探讨阻断肾素-血管紧张素系统(RAS)对肾小球硬化大鼠肾组织转化生长因子β1(TGFβ1)基因及蛋白表达的影响及其意义。方法SD大鼠40只,其中30只单侧肾切除加阿霉素(6 mg/kg)尾静脉注射制作肾小球硬化大鼠模型,大鼠随机分成肾小球硬化组(D组),肾小球硬化苯那普利治疗组(DB组)和肾小球硬化芦沙坦治疗组(DL组),每组各10只;另10只为假手术(对照)组(C组),尾静脉注射生理盐水。DB组每日苯那普利(10 mg/kg.d)灌胃,DL组每日芦沙坦(40 mg/kg.d)灌胃,C组及D组每日用相应量生理盐水灌胃。治疗6周后应用逆转录聚合酶链反应在基因水平检测肾皮质TGFβ1 mRNA和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)mRNA的表达,Western 蛋白质印迹检测TGFβ1蛋白的表达,免疫组织化学方法测定肾组织Col Ⅳ的含量,并分析肾脏的病理改变,测定血白蛋白、胆固醇、尿素氮和肌酐以及24 h尿蛋白的含量。结果D组出现大量蛋白尿、低蛋白血症及高胆固醇血症,与C组比较有显著性差异(P<0.05),血尿素氮及肌酐也上升,肾小球系膜细胞增生,细胞外基质沉积,肾皮质TGFβ1 mRNA和蛋白的表达分别比对照组增加3.59倍和2.60倍,Col ⅣmRNA和蛋白表达分别比对照组增加2.57倍和1.40倍。应用苯那普利及芦沙坦治疗6周后,DB组及DL组的血、尿生化改变明显改善,病理改变减轻。

马桑内酯所致慢性癫痫大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达

用免疫组织化学方法研究了系统应用马桑内酯所致的慢性癫痫大鼠海马中星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白的表达。结果证明，整个海马的胶质纤维酸性蛋白免疫反应明显增强，并可见阳性细胞增生、胞体肥大，尤以齿状回门区和海马分子腔隙层及始层为甚。此外，本实验还发现海马胶质纤维酸性蛋白的阳性反应强度随发作后不同时间间隔（２ ｈ～９ ｄ）而不同，且直至发作后９ ｄ，胶质纤维酸性蛋白阳性反应程度仍高于对照组。此结果表明，马桑内酯所致癫痫反复发作可使海马星形胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白的表达长期保持在较高水平。

白云

该金银花品种,花冠半开裂,无毛,平均3.9厘米,上部直径2.5毫米,下部直径1.6毫米;平均27朵聚合成伞状花序或团状花序,二三簇生于叶腋或枝顶上。花管半开放,花期7天～10天,千花蕾鲜重58.92克,千干花蕾重14.62克,出干花率24.81%,干花绿原酸含量最高达6.97%,

银翠蕾

该金银花品种,花冠不开裂,无毛,平均长4.2厘米,上部直径2.5毫米,下部直径1.5毫米,花蕾顶部渐渐膨大;平均31朵聚合成伞状花序或团状花序,1簇～3簇生于叶腋或枝顶上。花蕾为含苞未放的棒状,花冠一直不开裂,花期长达15天～25天。花蕾整齐,千花蕾鲜重61.46克，

富硒金银花标准化栽培技术(中)

（续第2期）3．枝梢管理①整形修剪。定植后2年内要基本完成整形修剪工作，形成丰产树形。金银花是木质藤本植物，生长量大，易于整形。生产上适用的有干墩式圆头形、匍匐式扇状形、篱架式三主枝扇状形等3种树形。一是干墩式圆头形修剪。定植后苗木及时打顶去尖，新梢萌发后留一个梢作主干培养，其余抹除，主干培养枝长至60厘米长时打顶促分枝，力争培养出三四个健壮分枝，50厘米以下主干上的萌发枝要全部抹除，促其增粗直立成墩。在前3年培养主干期间，应当依次进行新枝打顶促分枝，向四周分枝扩展，形成上小下大，内空外圆的伞状圆头形树形。

金翠蕾

该金银花品种,花冠不开裂,无毛,长4厘米,上部直径2.5毫米,下部直径1.3毫米,花蕾顶部突然膨大较明显;平均30朵聚合成伞状花序或团状花序,1簇～3簇生于叶腋或枝顶上。花蕾呈含苞未放的棒状,花冠一直不开裂,花期15天～25天。花蕾整齐,千花蕾鲜重73.39克,

富硒金银花标准化栽培技术(上)

一、富硒金银花开发建园技术1.园地选择选择海拔高900米～1350米、土层深厚肥沃、排水良好,地形地势以背风向阳的缓坡地、开阔平地为好。2.整地建园技术①土地开垦。金银花园优质高产栽培需要全面垦复,全垦垦挖深度30厘米以上。清除草根、柴根、树根等植物根群,森林植被型只需穴垦。穴垦可按50厘米×50厘米×40厘米歼穴,只清除穴内杂根、土地垦复宜冬前或冬季进行，有利于土壤冻化改良。②改土整地。优质高产栽培目标的建网实行撩壕施肥改土，

流金淌银的致富花

金银花,又名金花、银花、忍冬花。据有关文献分析,我国是金银花的原产地之一。早在秦汉时期,我国最早的中药学专著《神农本草经》中,就载有忍冬,称其＂凌冬不凋＂;南北朝时期的医学家陶弘景所著《名医别录》中也提到忍冬＂处处有之＂;