黄芩苷抑制大鼠胰岛细胞瘤细胞株增殖的分子机制研究

目的探索黄芩苷对大鼠胰岛细胞瘤细胞的影响及作用的分子机制。方法应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪、报告基因分析以及WesternBlot等方法,探讨黄芩苷对细胞增殖和细胞周期的影响及作用分子机制。结果黄芩苷处理大鼠胰岛细胞瘤细胞后,分裂相细胞显著减少,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率下降,随黄芩苷浓度的增加和/或作用时间的延长,抑制率呈上升趋势,并出现凋亡细胞;胰岛细胞瘤细胞株凋亡过程中caspase3活性以时间依赖性方式增高;通过流式细胞仪检测细胞周期发现,随黄芩苷处理浓度增加,S期细胞逐渐减少,从38.2%下降至9.4%,G0/G1期细胞所占百分率逐渐增加,从56.4%上升至85.9%,细胞出现G1阻滞;同时,细胞周期蛋白基因启动子活性显著下调,细胞周期蛋白表达明显降低。结论黄芩苷能诱导细胞凋亡,其作用可能与caspase3活化有关;黄芩苷还能以剂量依赖性方式和时间依赖性方式抑制胰岛细胞瘤细胞增殖,黄芩苷诱导细胞周期蛋白基因转录和表达下调可能在其中起着重要作用。

淋巴细胞表型和细胞因子表达谱与IV型狼疮性肾炎患者免疫学发病机制

目的:通过研究外周血淋巴细胞亚群表达及细胞因子表达谱,探讨IV型狼疮性肾炎(LN)免疫发病机制。方法:30例经肾活检证实为IV型LN患者及30例肾活检证实为V型LN患者、30例年龄、性别匹配的健康对照均留取静脉血,分离血清,通过抗体芯片技术同时检测4种Th1细胞因子(INF-γ,IL-1,IL-2和TNF-α)和5种Th2细胞因子(IL-4,IL-5,IL-6,IL-10和IL-13)的表达;流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚型表达;Pearson相关性分析研究淋巴细胞亚型和细胞因子表达与临床指标之间的相关性。结果:IV型LN患者存在明显的贫血(P<0.001)、低补体血症及低白蛋白血症(P<0.05)。IV型LN患者CD3+细胞比率和计数与对照组之间无明显改变,但CD4+细胞比率和计数明显低于对照组(P<0.01);由于CD8+细胞与对照组无显著差异,从而出现CD4+/CD8+比值倒置(P<0.01);CD20+细胞比率及计数略高于对照组(P<0.05);但CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比率及计数显著低于对照组(P<0.001);与V型LN患者相比,IV型LN患者淋巴细胞表型异常更显著,尤其表现在CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)。与对照组相比,IV型LN患者体内存在广泛的细胞因子异常,检测的9种细胞因子中有7种明显升高,其中包括3种Th1细胞因子INF-γ(P<0.05),IL-2(P<0.05),TNF-α(P<0.01)和4种h 2细胞因子IL-4(P<0.05),IL-6(P<0.05),IL-10(P<0.01),IL-13(P<0.01);与IV型LN不同,V型LN仅有4种细胞因子表达上调,其中除IL-2属于Th1细胞因子外,其余3种为Th2细胞因子,包括IL-4,IL-10和IL-13。Pearson相关分析显示:调节性T细胞比率与多种临床指标之间存在负相关,包括24 h尿蛋白定量、antidsDNA滴度、疾病活动性指数等(r分别为-0.781,-0.746,-0.646;P<0.05);IL-5与anti-dsDNA滴度、血肌苷呈正相关(P<0.05),与补体C3呈负相关(P<0.05);IL-10与SLEDAI呈正相关(P<0.01),与尿蛋白、血红蛋白浓度均呈负相关(分别P<0.05和<0.001);IL-13与尿蛋白浓度呈负相关(r=-0.769,P<0.05);而V型LN患者细胞因子与临床表现之间相关性小。结论:IV型LN患者体内存在广泛的淋巴细胞表型异常及细胞因子表达异常,与临床表现之间存在显著的相关性,这可能是免疫抑制剂治疗IV型LN的机制。

体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为胰岛样细胞的研究

目的探索大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的方法,为解决胰岛移植物来源匮乏问题提供新的思路。方法采用横向分化技术,将成年大鼠MSCs诱导成胰岛素分泌细胞;间接免疫荧光法鉴定诱导前后的细胞巢蛋白、胰岛素、胰高血糖素、生长抑素的表达;RTPCR法检测诱导前后的细胞胰岛素1、Pdx1、Pax6mRNA的表达;24h累积分泌量测定和胰岛素刺激实验评价诱导前后细胞的功能。结果诱导5h,巢蛋白阳性细胞为(44.6±7.3)%,诱导24h增至(61.8±8.4)%。此后,巢蛋白阳性细胞数开始下降,诱导第14天后,巢蛋白表达基本消失。而且,诱导后细胞可表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等蛋白;表达胰岛素1及其多种转录因子基因mRNA;胰岛素刺激实验反应敏感,而诱导前MSCs不具备上述特点。结论体外大鼠MSCs可诱导成为胰岛素分泌细胞,为胰岛移植开辟新的研究思路。

胰腺十二指肠同源框基因PDX-1的体外扩增

目的提取大鼠胰岛细胞瘤细胞株的RNA,以其中的mRNA为模板,扩增胰腺十二指肠同源框-1(PancreaticDuodenalHomeobox-1)编码基因,并测定核苷酸序列,为进一步克隆及表达PDX-1cDNA奠定基础。方法采用TIZOL方法进行RNA提取;通过RT-PCR方法扩增大鼠PDX-1cRNA;琼脂糖凝胶电泳检测后进行序列测定。结果从大鼠胰岛细胞瘤细胞中提取了RNA,以其中的mRNA为模板扩增出大鼠PDX-1基因,经琼脂糖凝胶电泳鉴定为目的片断,经序列测定与Genebank公布的序列一致。结论在国内首次成功的克隆了PDX-1基因。扩增时在5'端以限制性酶切位点进行限制,对进一步进行其克隆、表达研究以及对其生物学功能进行研究奠定了基础。

从系统生物学角度探讨细胞因子表达谱研究在V型狼疮性肾炎患者中的作用

目的探讨Th1和Th2细胞因子表达谱研究在V型疮性肾炎(V-LN)患者中的作用。方法分离血清,通过抗体芯片技术同时检测4种Th1和5种Th2细胞因子表达谱,并探讨其与临床指标之间的相关性。结果①细胞因子表达谱:在同时检测的9种细胞因子中,V-LN患者有4种表达上调,除了IL-2属于Th1细胞因子外,其他三种(IL-4I、L-10和IL-13)均属于Th2细胞因子,其中IL-10较健康对照升高了10倍以上。②相关性研究:Pearson相关分析显示IL-10与SLIEDAI呈正相关、与血红蛋白浓度呈负相关;此外,IL-4和IL-13均与尿蛋白浓度呈负相关,IL-1与血肌苷之间呈正相关。结论V-LN患者体内细胞因子表达异常以Th2细胞因子为主,提示抗Th2细胞因子可能在V型狼疮患者中具有一定的治疗作用。

Superfect高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达

目的:构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体,并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率,为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。方法:RT-PCR体外扩增PDX-1基因,双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体,对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定;利用Percoll细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测细胞周期后,Superfect介导正确重组的载体转染骨髓MSCs,检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化;G418筛选阳性细胞后,RT-PCR和Western blotting检测PDX-1基因在骨髓MSCs中的表达。结果:重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示85.9%的MSCs处于G0/G1期,提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能;荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光,Superfect介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关;RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓MSCs表达,随转染时间延长,表达逐渐增强,与Western blotting结果一致。结论:成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体;Superfect能高效介导外源性基因在骨髓MSCs中表达;转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。

胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞体外横向分化为胰岛素分泌细胞

目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均体外进行诱导分化,细胞免疫组化染色鉴定诱导后胰岛素分泌阳性细胞。结果:限制性酶切分析和序列测定证实成功构建了含有Pdx-1基因的真核表达载体,荧光显微镜观察证实Superfect能高效介导重组载体转染MSC;细胞免疫组化染色显示Pdx-1+MSC分化为胰岛素分泌细胞的数量较Pdx-1-MSC明显增多,阳性率分别为(28.23±2.56)%和(7.08±2.69)%。结论:Pdx-1能增强大鼠MSC体外分化为功能性胰岛素分泌细胞的能力,为胰岛移植开辟新的思路,对1型糖尿病治疗有重要的应用价值。

多节段脊髓型颈椎病两种后路术式疗效比较

目的 比较后路全椎板切除与后路单开门椎管扩大成形术对多节段脊髓型颈椎病的治疗效果。方法 对 38例患者手术前后情况进行回顾 ,Ⅰ组 18例为全椎板切除术 ,Ⅱ组为单开门椎管扩大成形术 ,比较两组优良率 ,手术并发症。结果 两组优良率短期并发症无明显差别 ,而长期并发症Ⅱ组优于Ⅰ组。结论 对于多节段颈椎病的外科治疗 。

循环经济模式下的生态工业园区建设

可持续发展追求人类与自然和谐发展,标志着人类文明新型发展道路的开辟。但随着城市人口的迅速增长及城市工业化水平的不断提高,城市工业经济发展和城市生态环境之间的矛盾越来越复杂尖锐。文章通过对基于可持续发展的循环经济模式的阐述,探讨了生态工业园区建设的作用、原则,提出了生态工业园区建设的建议及政府管理理念的转变。

试论高职高专院校精品课程建设

课程建设是教学质量的中心环节,是衡量学校办学水平和教学质量的重要标志,是实现培养目标的基本保证。精品课程建设作为这项工程的奠基性工作,是一个理性的继承和适时的总结,又是一个具有前瞻性的推进。本文从如何进行精品课程建设进行了分析。

脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达

目的:用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法:构建的重组载体鉴定后,以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果:限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX 1基因;克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致;质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳;细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX 1基因表达。结论:成功构建了含有PDX 1基因的真核表达载体;通过优化转染条件提高了pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。

调整消费和分配政策推动城乡一体化

城乡经济的发展取决于许多因素,由于城乡经济的巨大差距,造成城乡居民收入分配的差异,进而影响了居民消费行为。文章从影响城乡经济发展的城乡居民收入分配差异和收入差距扩大对居民消费水平和行为影响的视角,进行深入的分析,从而提出政府应通过加大反贫困的再分配力度、加快农村劳动力转移、增加社会福利费用等消费和收入分配政策的调整,推动城乡一体化的建设和发展。

推进城乡经济建设和发展的有效选择

党的"十七大"报告提出,通过建立以工促农、以城带乡长效机制,逐步形成城乡经济社会发展一体化新格局。城乡经济的发展取决于许多的因素,其中由于城乡经济的巨大差距,造成城乡居民收入分配的差异,进而影响了居民消费行为。本文从影响城乡经济发展的城乡居民收入分配差异和收入差距扩大对居民消费水平和行为影响的视角,进行深入的分析。从而提出政府通过对消费和收入分配政策做出有效选择,来推动城乡经济的建设和发展。

胰腺十二指肠同源框-1基因真核表达载体的构建和转染

目的应用阳离子脂质体介导含有大鼠胰腺十二指肠同源框-1(PDX-1)基因的真核表达载体转染胰腺导管上皮细胞。方法利用逆转录聚合酶链反应技术克隆大鼠PDX-1基因,酶切后插入经相同酶切及磷酸化处理的含绿色荧光蛋白(GFP)的空白载体pEGFP-C2,构成重组质粒,再进行HindⅢ、BglⅡ双酶切筛选、鉴定并测序;阳离子脂质体介导转染后,荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率从而对转染条件进行优化。结果限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX-1基因;克隆的目的片断经序列测定与Genebank公布的序列一致;转染条件优化后重组载体在胰腺导管上皮细胞中有效表达。结论在国内首次成功克隆了大鼠PDX-1基因,并构建了含有PDX-1基因的真核表达载体;通过优化转染条件提高了转染效率,为将表达PDX-1基因的胰腺导管上皮细胞作为组织工程的种子细胞提供了实验依据。

政治理论课教学中如何培养大学生的文化自觉和文化自信

我国高校政治理论课教学在培养大学生的文化自觉和文化自信方面有着得天独厚的功能优势。要最大程度发挥和利用好这项功能,政治理论课教学应以强化主流文化、整合传统文化、正视西方文化为主要手段才能切实培养起大学生的文化自觉和文化自信。

创新实践教学模式提升思想政治理论课的实效性

国家教育部发布了《思想政治理论课新课程的改革方案》,如何结合学生和教学实际,贯彻好、落实好新课程方案是一项十分紧迫的任务。我们根据高职高专学生成长规律和教育规律,从创新实践教学模式入手,确立了立体化、多层次、多形式的实践教学模式。有效地提升了思想政治理论课的实效性。

论新时期高校政治思想教育的本质要求

建设社会主义核心价值体系是以胡锦涛同志为总书记的党中央在思想文化建设上的一个重大理论创新。社会主义核心价值体系，是凝聚人民、动员人民、激发人民创造力的一种精神和文化力量。新时期大学生思想政治教育既面临有利条件，也面临严峻挑战。我们要努力使当代大学生成为社会主义核心价值体系的深入学习者、坚定信仰者，积极传播者和模范践行者。

生态文明建设是经济社会走向科学发展的必然选择

"建设生态文明"是胡锦涛总书记在党的"十七大"报告中提出的,这是我们党首次把"生态文明"这一理念写进党的行动纲领,它必将在建设中国特色社会主义过程中产生重大影响。因此要正确的认识生态文明,进行生态文明的建设。