草鱼SREBP-1基因的克隆及糖对其在肝脏中表达的影响

固醇调节元件结合蛋白（SREBPs）是调控糖脂代谢相关基因表达的关键核转录因子。为获知草鱼SREBP-1基因的序列及其在肝脏中的表达规律,本实验采用同源克隆和RACE方法获得了草鱼SREBP-1基因的部分cDNA序列,并通过生物信息学方法对该基因及所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时荧光定量PCR技术,对SREBP-1基因在8种不同组织的表达规律及低糖（糖含量24%）和高糖（糖含量42%）投喂条件下肝脏中的表达水平进行了研究。结果显示,所克隆到的草鱼SREBP-1基因cDNA长4 760 bp,其中包括开放读码框3 426bp,编码1 141个氨基酸;草鱼SREBP-1具有一个典型的碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构（bHLH-zip）;氨基酸序列比对结果显示,草鱼SREBP-1与其他鱼类的同源性在76%~88%之间,与斑马鱼的进化关系最近;草鱼SREBP-1基因在脑中的表达量最高,肝脏和肠次之,在肾脏、脾脏、肌肉、脂肪和性腺中均有少量表达;与对照组相比,SREBP-1基因在高糖诱导下表达量显著提高（P〈0.05）,低糖诱导下没有显著性差异。研究表明,在高糖负荷条件下,草鱼肝脏中SREBP-1可能会促进糖的利用和转化,从而参与糖代谢调节过程,为丰富鱼类糖代谢调控机理提供研究资料,并有望为提高鱼类对饲料糖的利用效率提供理论依据。

糖对草鱼肝脂代谢关键基因转录水平的调控研究

在目前集约化水产养殖模式下,草鱼肝脂质代谢紊乱问题比较严重,已引起人们的高度关注。为获知糖对草鱼肝脂代谢的影响及作用机理,本研究分别从活体和细胞水平上分析了糖对肝脂代谢5个关键基因转录水平变化的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,检测了在低糖(糖含量24%)和高糖(糖含量42%)投喂条件下草鱼肝脏中固醇调节元件结合蛋白-1c、过氧化物酶体增殖物激活受体α和乙酰辅酶A羧化酶的转录水平变化,H·E染色观察肝脏组织形态学变化;并检测了在不同浓度葡萄糖作用下,草鱼肝细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶和脂蛋白脂酶基因的表达变化。结果显示,肝组织中固醇调节元件结合蛋白-1c、乙酰辅酶A羧化酶在高糖组中的表达量显著高于对照组和低糖组(P<0.05),过氧化物酶体增殖物激活受体α在高糖和低糖条件下变化不明显(P>0.05);H·E染色观察发现在高糖条件下草鱼肝组织出现了大量的脂肪蓄积;在其肝细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶、脂蛋白脂酶的mRNA表达量随葡萄糖浓度增加均呈先升后降趋势,分别在葡萄糖浓度为10mmol/L和20mmol/L时达到最高值(P<0.05)。研究结果表明,葡萄糖可能通过调节固醇调节元件结合蛋白-1c、乙酰辅酶A羧化酶和脂蛋白脂酶等基因的表达进而调节体内糖向脂的转化过程。研究结果为丰富鱼类糖代谢调控机理提供研究资料,并有望为提高鱼类饲料糖的利用效率提供理论依据。

多发性硬化认知障碍的发病机制及其治疗进展

多发性硬化是一种常见的中枢神经系统脱髓鞘性疾病,患者常表现为视觉障碍(视神经病变)、肢体无力、平衡失调、感觉异常、认知和精神异常等。其中认知障碍是多发性硬化常见的症状之一,严重影响了患者的生活质量。多发性硬化认知障碍内在的发病机制尚未完全阐明,对其治疗手段有限,疗效欠佳,是亟待解决的临床问题。临床影像学的研究已经证实,多发性硬化的认知障碍与相关脑区的白质纤维损伤有关,推测白质失连接假说可能是多发性硬化认知障碍的重要机制,而对白质的保护和修复可能是药物研究的重要方向。作者对关于多发性硬化认知障碍的发病机制及其治疗作一综述。

气体钻井技术发展综述

气体钻井技术就是以气体为主要循环介质的欠平衡钻井技术，主要有纯气体钻井．雾化钻井、泡沫钻井和充气钻井液钻井。气体钻井在国外应用已相当广泛．主要用于加快钻速、发现和保护气层，在低压破碎地层用气体钻井可以解决长段井漏问题。气体钻井首次使用是在19世纪中期，美国犹他州使用空气钻井技术进行钻井。此后，该技术被广泛应用于世界各地油气井（包括煤层气）的钻探和开发上，

套管钻井技术发展综述

在油田开发中后期，要通过采用新技术来不断地降低钻井成本和提高投资收益率。套管钻井正是在这种情况下应运而生的。套管钻井技术是将钻进和下套管合并成一个作业过程，减少了起下钻、井喷和卡钻等井下事故，提高了钻井安全性，降低了钻井成本，套管钻井较常规钻井可以提高钻速30％，

碳酸盐岩地层岩石声学特性的试验研究与应用

选取并收集我国川东北地区和济阳坳陷古潜山构造的地层岩样及相对应的井下声波测井资料,测试了岩石的牙轮钻头可钻性、PDC钻头可钻性和声学特性,应用数理统计方法研究分析了岩石地面纵波速度VP、横波速度VS分别与牙轮钻头可钻性KdRC,PDC钻头可钻性KdPDC及同块地层岩样地面纵波速度VP与井下测井纵波速度VPD的相关关系,建立了利用声波测井资料预测碳酸盐岩地层剖面可钻性的数学模型,选定符合率F值大于0.75为检验标准,经用现场声波测井资料代入预测模型进行计算,预测精度达91.7%,达到并超过了研究预期的技术指标。

天然气水合物注热开采数学模型

根据热力学第一定律及天然气水合物分解机理,在合理假设基础上,建立了包括物质守恒方程、能量守恒方程、分解动力学方程及辅助方程的天然气水合物注热开采数学模型。对数学模型进行差分处理得到差分方程组,采用隐式求解压力、显式求解饱和度(IMPES)的方法,考虑天然气水合物分解的压力、温度平衡条件,对模型进行求解,据此编制了数值模拟器。数值模拟器很好地拟合了注热开采实验的产气速率和温度分布,验证了数学模型的有效性。数值模拟及注热开采实验分析表明,天然气水合物注热开采可分为自由气释放、水合物分解及边界效应3个阶段,水合物分解存在分解前缘,注入端一侧水合物大部分已经分解,出口端一侧水合物分解较少,饱和度较高。

草鱼肝细胞脂变模型的建立及脂代谢基因表达分析

为了筛选草鱼肝细胞脂肪变性的最佳诱导剂及浓度,并初步分析脂肪乳剂（lipid emulsions, LE）引起草鱼肝细胞脂肪变性的作用机理,以草鱼（Ctenopharyngodon idellus）正常肝细胞为研究对象,建立草鱼脂肪变性肝细胞模型,以含10%胎牛血清的基础培养液为对照组,处理组为含20%脂肪乳剂0.5~2 mL/L和含20%、50%胎牛血清的诱导培养液,孵育草鱼肝细胞48 h 后,定量分析肝细胞内的甘油三酯（TG）含量,观察脂滴积聚情况及肝细胞超微结构的变化,检测细胞培养上清中谷丙转氨酶（alanine transaminase, ALT）、谷草转氨酶（aspartate transaminase, AST）的活性, qRT-PCR技术检测脂代谢关键基因（PPARa、PPARg、SREBP-1c、LPL、Lep和UCP2）的转录水平变化,蛋白质印迹技术检测PPARg、SREBP-1c的蛋白水平变化。结果发现,含1~2 mL/L LE的诱导液组和含20%、50%FBS的诱导液组与对照组相比TG含量均显著上升（P〈0.05）,且20%FBS和各浓度LE诱导组的转氨酶活性与对照组相比差异不显著（P〉0.05）,表明含1~2 mL/L LE的诱导液和含20% FBS的诱导液均可建立草鱼营养性脂肪肝细胞模型。在肝细胞脂变模型中, PPARγ和 LPL 等脂代谢基因的表达量显著升高（P〈0.05）,而 Lep 基因表达量显著降低（P〈0.05）, PPARγ和SREBP-1c的蛋白水平升高。结论认为：采用1~2 mL/L LE和20%的FBS均可以在短时间内建立草鱼肝细胞脂肪变性模型,含1 mL/L LE的诱导液诱导效果最佳；肝细胞内脂质的蓄积可能与脂肪代谢关键基因PPARγ、SREBP-1c、LPL及Lep等密切相关。

鱼类leptin的生物学特性及功能

瘦素(Leptin)是肥胖基因(Obese gene)的产物,属于I型细胞因子。在哺乳动物中,leptin主要由脂肪细胞合成与分泌,是调控摄食、能量代谢、骨骼发育、甲状腺功能以及繁殖等生理过程的重要激素。目前,多种硬骨鱼类的leptin基因已被克隆,其功能也已得到初步研究。研究认为,鱼类leptin的主要合成部位在肝脏,其在氨基酸序列上与哺乳动物存在很大差异,但蛋白质结构高度保守;功能方面,leptin可调节鱼类的摄食、葡萄糖和脂肪代谢以及繁殖等生命活动过程。本文就鱼类leptin及其受体的特征结构、组织分布、表达调控及功能研究进展进行简要综述。

淇河鲫IL-8cDNA克隆及组织表达分析

IL-8是最早发现的趋化因子,属于CXC亚家族,与鱼类非特异性免疫水平关系密切。实验采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)方法,从淇河鲫总RNA反转录产物中获得了641 bp IL-8cDNA序列,其中包含102 bp的5'非编码区,242 bp的3'非编码区和297 bp的开放阅读框。该基因编码由98个氨基酸残基组成的前体蛋白,前22个氨基酸残基为信号肽。肽链中含有4个保守半胱氨酸,前2个半胱氨酸被1个精氨酸分隔,形成CXC结构。第一个半胱氨酸前缺乏ELR基序,其组成是DPR。由氨基酸同源性分析和进化分析可知,淇河鲫IL-8与鲤、鳙、草鱼、鲢等鲤科鱼类的进化关系较近,与鲤IL-8的同源性最高(94%)。通过实时荧光定量PCR检测,淇河鲫IL-8在被检测的8个组织中都有表达,其中在肌肉中的表达量最高,其次为脾脏、头肾和脑等。研究结果对调控淇河鲫非特异性免疫能力,提高淇河鲫健康养殖水平具有一定参考价值。

鱼类miRNAs研究新进展

MicroRNAs（miRNAs）是一类内生性的、进化上高度保守的单链成熟非编码RNA,长度约21~25个核苷酸,广泛存在植物、动物及微生物中~[1-2],参与生物体的胚胎形成、个体生长发育、机体免疫、疾病防御以及繁殖和糖脂类代谢等生命过程~[3-8]。目前,基于生物信息学预测,miRNAs约占整个基因组的2%~3%~[9]。

鲤肠道小肽转运载体PepT1多克隆抗体的制备及其组织表达分析

为从蛋白水平研究小肽转运载体（PepT1）在鲤（Cyprinus carpio L.）不同组织中的表达及分布规律,本研究采用PCR法获得PepT1 cDNA片段,并转化至大肠杆菌Rosetta,对目标多肽进行原核表达,将Pep T1重组蛋白纯化后免疫新西兰长耳兔（Oryctolagus cuniculus）,获取兔抗鲤PepT1多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,免疫组化检测PepT1的组织表达情况,并用荧光实时定量PCR技术检测PepT1转录水平组织表达情况。结果显示,目标多肽分子量约为28 kD;抗体效价达到4×10~5。PepT1在鲤的前肠、中肠、后肠、脾、肝胰脏和肾中均有表达。肠道组织PepT1的高表达与其主要完成食物中肽的吸收功能密切相关,且吸收部位主要集中在前肠和中肠;肾中PepT1免疫染色阳性区域也较为明显,这与肾小管基底膜存在对短肽的重吸收功能相关。此外,肝胰脏和脾PepT1也有一定量的表达,可能与这两个重要器官代谢旺盛有关。本研究制备的兔抗鲤PepT1多克隆抗体能够有效识别鲤各组织中的PepT1蛋白,在后续研究中亦可用于其他鱼类PepT1转运蛋白的表达定位和定量研究。

草鱼AdipoR1-B基因克隆、组织分布及其表达的营养调控

为探讨Adipo R1-B在鱼类糖类和脂质代谢中的作用,本实验采用RACE方法获得了草鱼Adipo R1-B的全长c DNA序列(登录号:KP733846),利用生物信息学技术对该基因及其所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时定量PCR技术,检测了Adipo R1-B在19个不同组织中的表达特性以及高糖(45%)、高脂(8%)和高糖高脂饲喂对草鱼肝脏中该基因表达的影响。结果显示,草鱼Adipo R1-B c DNA全长2186 bp,其中开放读码框为1122 bp,编码373个氨基酸;跨膜结构分析表明草鱼Adipo R1-B为典型的7次跨膜蛋白;同源性分析结果显示,草鱼Adipo R1-B与其他物种的Adipo R1-B高度同源(氨基酸相似度78%以上),并与斑马鱼Adipo R1-B的进化关系最近;组织分布结果显示,Adipo R1-B在草鱼肝脏中表达量最高,中枢神经系统和红肌次之;此外,高脂和高糖高脂饲喂均能够显著提高草鱼肝脏中Adipo R1-B的表达水平。因此,草鱼肝脏中Adipo R1-B的表达水平受到日粮中脂类水平的调控,推测该受体可能在调节鱼类脂质代谢中发挥重要作用。

机械式组合开窗工具的研制及应用

针对套管开窗质量要求高、施工难度大以及开窗工具工艺特点,研制成功机械式组合开窗工具。该开窗工具通过机械方式悬挂,铣锥、斜向器、地锚三者联为一体,可一次完成地锚坐封、开窗、修窗工作。通过理论计算和强度校核,从结构设计、材料选择、加工工艺等方面进行了全面研究和系统分析,20余口侧钻井的现场应用表明,该开窗工具施工工艺简单,性能稳定,工作效率高,使用寿命较长,可大面积推广应用。

草鱼PGC-1β基因克隆及高糖高脂饲料对其表达的影响

为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1β基因在草鱼能量代谢中的作用,本研究克隆了草鱼PGC-1β基因的核心序列,并对其进行了生物信息学分析;利用Real-time PCR技术检测了PG C-1β在不同组织中的表达状况;同时研究了饥饿、饥饿再投喂及高糖(糖含量45%)高脂(脂含量8%)饲料对草鱼肝脏PGC-1β表达的影响。结果显示,所获得的草鱼PGC-1β基因部分c DNA片段长为885 bp(Gen Bank登录号:KM580493.1),共编码293个氨基酸,与斑马鱼的同源性为81%;该基因在脑中的表达量最高,肠和肝脏次之;与正常投喂组相比,饥饿(7 d)导致PGC-1β在肝脏中的mRNA水平显著升高,饥饿再投喂后几乎恢复到对照组的表达水平。饲喂高脂以及高糖高脂饲料(65 d)后,与对照组相比,草鱼肝脏中PGC-1β的mRNA水平显著升高。研究结果表明,PG C-1β基因在草鱼能量代谢旺盛的组织中高表达,同时饥饿处理、饲料糖和脂肪水平等营养状况显著影响PGC-1βmRNA的表达。以上提示,PGC-1β在草鱼能量代谢过程中可能起到重要作用。

论项目管理在市场营销实践中的应用

市场营销活动是指在市场中,企业为了满足消费者的需求,通过创造商品、交换商品,完成企业目标,增加企业的经济利润和社会效益的经营和管理过程。企业的市场营销活动是以企业的实际情况为出发点,基于项目管理的要求,将项目管理运用到市场营销的实践活动中,从而完成项目,提高企业的管理水平和经济效益。

医务社工介入临终关怀服务的实践研究

分析研究医务社工介入临终关怀服务的实践结果。选取唐山市人民医院自2013年1月至2014年1月的61名进行临终关怀的患者,对患者的服务结果进行对比分析。结果:超过90%的患者去世时情况良好、仪态安详,得到患者家属的极大支持和满意。满意度高达97%。医务社工介入临终关怀服务使临终患者的生命尊严得到极大程度的维护,生存质量也得到极大提高,是人道主义精神得到实质意义上的体现,值得临床推广。

胰岛细胞瘤的诊断和外科治疗（附17例报告）

目的总结分析胰岛细胞瘤的临床特点，探讨其诊断及外科治疗。方法回顾分析2005年6月～201l^IE6月收治的17例胰岛细胞瘤患者的临床资料。结果17例胰岛细胞瘤中，功能性肿瘤占12例，非功能性占5例。术前肿瘤定位，B超、CT、MRI的敏感性分别为58．8％（10／17），94．1％（16／17），100％（1／1）；术中行B超探查联合触诊有助于术中肿瘤定位，该组开展6例，准确定位6例。手术患者16例：单纯肿瘤切除术3例、胰腺中段切除＋胰空肠吻合术2例、保留脾脏的胰体尾切除术3例、胰体尾＋脾脏切除术4例、胰尾切除术3例、胰尾＋脾脏＋胆囊切除术1例。该组患者无手术死亡，术后均无低血糖发作，术后胰瘘2例。结论目前胰岛细胞瘤诊断的主要挑战是定位，常规的定位方法如B超、CT等仍为首选的检查方法，术中超声检查联合术中触诊，对定位诊断更有意义。胰岛细胞瘤容易误诊，早期诊断是关键，一旦诊断明确，手术切除是有效的治疗方法，术后绝大多数患者预后良好。

胃肠道瘘15例临床分析

目的总结15例胃肠道瘘的初步诊治经验。方法对15例胃肠道瘘的发生时间、部位、手术类型、病理生理及治疗情况进行回顾性分析。结果术后至发生胄肠道瘘的平均时间为4．3d，窦道愈合时间30～105d，平均愈合时间46d，治愈率93.3％。讨论采取综合治疗，早期有效引流，控制感染．营养支持治疗，早期序贳应用生长抑素加生长激素，能有效提高消化瘘治愈率。

基于多传感器融合技术的视频监控系统设计

对现有视频监控系统占用资源较多，无法自动跟踪对象的问题，提出了一种基于单片机的可自动跟踪对象的视频监控系统，并详细介绍了系统软件和硬件的设计方法。该系统运用多传感器融合技术，通过电机控制摄像头旋转从而达到自动跟踪目标对象的目的。