硒化甘草多糖、甘草多糖及其联合抗生素对无乳链球菌体外抗菌活性及机制分析

【目的】分析硒化乌拉尔甘草多糖(selenium glycyrrhiza polysaccharide,SeGUP)、乌拉尔甘草多糖(glycymhiza polyacchiade,GUP)对无乳链球菌体外抗菌活性及机制,研究其联合的抗菌效果。【方法】通过药敏纸片筛选出对无乳链球菌敏感抗生素,采用最小二倍稀释法和棋盘法测得最小抑菌浓度(minimal inhibit concentration,MIC)、最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)和联合抑菌指数(FICI index,FICI);将无乳链球菌与120、60、30 mg/mL的SeGUP、GUP及抗生素分别等量混合后绘制细菌生长速率图;通过ELISA法检测细菌培养液中碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶活性、蛋白质含量及胞内DNA浓度,研究SeGUP、GUP及联合抗生素对细菌细胞膜、细胞壁及DNA的影响;采用结晶紫染色法检测SeGUP、GUP及联合抗生素对无乳链球菌生物被膜形成的影响。【结果】无乳链球菌对SeGUP 480 mg/mL、GUP 480 mg/mL均呈现中度敏感,抑菌圈直径为14.0、11.0 mm;无乳链球菌对盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考极敏;SeGUP和GUP分别对肺炎链球菌的MIC、MBC为120、240 mg/mL和240、480 mg/mL;SeGUP与盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考的FICI为1.5、0.75、1、0.5,SeGUP与盐酸卡那霉素之间关系为无关,与盐酸多西环素、头孢曲松钠之间为相加关系,与氟苯尼考间为协同关系,GUP与盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考的FICI为1.5、1、1.5、0.75,GUP与盐酸卡那霉素、头孢曲松钠之间关系为无关,与盐酸多西环素、氟苯尼考间为相加关系;SeGUP、GUP明显抑制细菌的生长,其中SeGUP 120 mg/mL效果最强,SeGUP、GUP与盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考联合使用后增强了抑制效;SeGUP、GUP及联合抗生素使用后均能显著升高培养液中碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、蛋白质含量(P<0.05),显著降低胞内DNA含量(P<0.05),显著抑制无乳链球菌生物被膜的形成(P<0.05)。【结论】SeGUP能够通过损伤细菌细胞壁、细胞膜完整性,影响DNA含量对无乳链球菌产生明显的抑制作用,且其抗菌活性优于GUP。SeGUP与抗生素联合使用后能够增强抗生素的抗菌活性,并且其作用效果强于单独使用SeGUP、GUP和抗生素。

益母草碱对LPS诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用研究

【目的】探究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用。【方法】将60只6~8周龄雌性C57小鼠随机分为6组:空白对照组,模型组,益母草碱低、中、高剂量组及地塞米松阳性对照组,每组10只。空白对照组经阴道灌注50μL PBS缓冲液,其余组经阴道灌注50μL LPS(1 mg/mL)建立小鼠子宫内膜炎疾病模型。造模后,益母草碱低、中、高剂量组分别腹腔注射7.5、15.0、30.0 mg/kg益母草碱,阳性对照组腹腔注射5.0 mg/kg地塞米松,每6 h 1次,连续3次。造模24 h后处死小鼠,测定各组小鼠子宫指数;通过HE染色观察子宫组织病理变化;采用ELISA法检测子宫组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关炎症因子含量及髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】与空白对照组相比,模型组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性均极显著升高(P<0.01);与模型组相比,不同剂量益母草碱能不同程度降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠的子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性(P<0.01),并呈剂量依赖性;与模型组相比,阳性对照组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性极显著降低(P<0.01)。【结论】益母草碱可降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠子宫指数、TNF-α、IL-1β、IL-6炎性因子含量及MPO活性,减轻炎症症状,显示出良好的抗炎效果。

硒化甘草多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

试验旨在探究硒化甘草多糖(SeGUP)对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。选取96只昆明小鼠,雌、雄各半,随机分为6组,每组16只小鼠,利用环磷酰胺(CY)给除空白组外小鼠构建免疫低下的模型,腹腔注射CY 80 mg/g,连续3 d。第4 d开始空白组、模型组小鼠每天腹腔注射0.3 mL生理盐水,阳性组腹腔注射200 mg/g黄芪多糖(APS)混悬液,SeGUP高、中、低剂量组小鼠腹腔注射100、200、300 mg/g SeGUP混悬液,连续7 d。结果显示,SeGUP高、中剂量组小鼠体重极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。SeGUP高、中剂量组小鼠碳粒廓清指数(K)、吞噬指数(α)极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。SeGUP高剂量组小鼠血清白细胞介素-2 (IL-2)含量极显著高于SeGUP中剂量组、阳性组(P<0.01),SeGUP中剂量组、阳性组小鼠血清IL-2含量极显著高于SeGUP低剂量组、空白组(P<0.01),SeGUP高、中剂量组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白M (IgM)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白G (IgG)含量极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。SeGUP高、中剂量组小鼠胸腺指数极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。研究表明,SeGUP可通过下调小鼠脾脏指数,上调体重、K、α、IL-2、TNF-α、IgM、IFN-γ、IgG、胸腺指数等指标,增强免疫抑制小鼠的免疫功能,其中200、300 mg/g的SeGUP效果较好。

硒化甘草多糖对产志贺毒性大肠杆菌抑菌机制以及抗氧化作用探究

目的探究硒化甘草多糖(SeGUP)和甘草多糖(GUP)对产志贺毒性大肠杆菌(STEC)的体外抑菌机制和抗氧化效果。方法采用二倍稀释法检测SeGUP、GUP对STEC的半数抑制浓度(IC_(50)),测定各浓度的SeGUP、GUP对STEC生长曲线的影响;通过测定不同时间段培养液中AKP、β-半乳糖苷酶(β-gal)、蛋白质含量以及结晶紫染色探究SeGUP、GUP对STEC细胞壁、细胞膜、生物膜的影响。采用ELISA法检测清洁级昆明小鼠血清中SOD、CAT、MDA含量变化。结果SeGUP IC_(50)为55.58 mg·mL^(-1),GUP IC_(50)为69.85 mg·mL^(-1),150 mg·mL^(-1)SeGUP能完全抑制STEC生长,GUP在200 mg·mL^(-1)才能完全抑制STEC的增殖。SeGUP组同一时间的AKP活性、β-gal活性、蛋白质含量与GUP组比较,差异极显著,P<0.01;SeGUP组与GUP组比较能极显著降低STEC生物膜形成,P<0.01。抗氧化试验中,SeGUP组提高SOD、CAT含量以及降低MDA含量效果优于GUP组(P<0.01)。结论硒化修饰提高了GUP体外抑菌效果、破坏STEC膜结构和抗氧化能力。

“乳炎宁”水提物的抗炎作用研究

【目的】探究“乳炎宁”水提物的抗炎作用,为其临床运用及进一步研究提供理论依据。【方法】采用二甲苯致耳廓肿胀试验、醋酸致腹腔毛细血管通透性试验、角叉菜胶致足肿胀试验、棉球致肉芽肿胀试验及小鼠血清细胞因子含量检测进行“乳炎宁”水提物抗炎作用研究。取60只健康昆明小鼠,雌雄各半,随机分为5组,即阴性对照组(生理盐水组)、阳性对照组(阿司匹林组)、“乳炎宁”水提物低(4 mg/g)、中(8 mg/g)、高(16 mg/g)剂量组,12只/组。各组小鼠每天固定时间灌胃,每天1次,连续10 d。后续按照不同试验具体操作,试验结束后分别测量各组小鼠耳廓重量、腹腔洗液D_(590 nm)值、足重量、棉球肉芽肿重量及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量。【结果】二甲苯致耳廓肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组均可极显著降低二甲苯导致的耳廓肿胀(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物高剂量组耳廓重量差异不显著(P>0.05)。醋酸致腹腔毛细血管通透性试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对醋酸致腹腔毛细血管通透性升高均有极显著抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物各剂量组的毛细血管通透性差异显著或极显著(P<0.05;P<0.01)。角叉菜胶致足肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对小鼠足肿胀度均有极显著的抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物各剂量组足肿胀度均有极显著差异(P<0.01)。棉球致肉芽肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对小鼠棉球肉芽肿胀抑制均有极显著抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物低、中剂量组差异极显著或显著(P<0.01;P<0.05),“乳炎宁”高剂量组与阳性对照组作用相当(P>0.05)。小鼠血清细胞因子检测实验结果表明,与阴性对照组相比,除“乳炎宁”水提物低剂量组外,药物处理组血清中TNF-α和IL-1β含量均有不同程度降低,“乳炎宁”水提物低剂量组血清中TNF-α含量差异不显著(P>0.05),血清中IL-1β含量显著降低(P<0.05),“乳炎宁”水提物中、高剂量组血清中IL-1β含量均极显著降低(P<0.01),中剂量组血清中TNF-α含量显著降低(P<0.05),高剂量组TNF-α含量极显著降低(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物中、高剂量组血清中2种细胞因子均差异不显著(P>0.05),低剂量组血清中2种细胞因子均差异极显著(P<0.01)。【结论】“乳炎宁”水提物在小鼠上显示出了良好的抗炎效果。

甘草酸对脂多糖应激黄羽肉仔鸡抗炎性能的影响

试验旨在研究甘草酸对黄羽肉仔鸡的抗炎能力。选取300只健康体重接近的1日龄黄羽肉仔鸡随机分为6个组,每组5个重复,分别为生理盐水组(空白对照)、脂多糖处理组(LPS组)、黄芪多糖+LPS组(APS+LPS)、高剂量甘草酸+LPS组(GA H+LPS)、中剂量GA+LPS组(GAM+LPS)和低剂量GA+LPS组(GAL+LPS)。APS+LPS组、GA H+LPS组、GAM+LPS组和GAL+LPS组于造模阶段及前后3d(即11~23d)分别饲喂添加APS400mg/kg体重、GA120mg/kg体重、GA100 mg/kg体重、GA80 mg/kg体重试验饲料,试验期49 d。每组分别于21、28、35、42、49日龄测定血清巨噬细胞吞噬能力和炎性细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)指标。结果表明:与空白对照组比较,LPS组21、28、35、42、49日龄血清IL-1β、TNF-α、INF-γ含量均显著升高(P<0.05),而IL-4含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,GAL+LPS组、GAM+LPS组、GA H+LPS组、APS+LPS组21、28、35、42、49日龄血清IL-1β、TNF-α、INF-γ含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05),而IL-4含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。说明GA能有效缓解黄羽肉仔鸡对LPS刺激引起的炎性反应,从而发挥抗炎作用。

益母草碱对SD大鼠抗凝血因子的影响

为了研究不同剂量益母草碱对大鼠的抗凝血作用,筛选出抗凝血效果最佳的剂量,为进一步治疗血瘀引起的相关动物疾病提供理论依据,试验将50只SD大鼠[雌雄不限,体重(200±20)g]随机分为空白对照组、益母草碱低剂量组(15 mg/kg)、益母草碱中剂量组(30 mg/kg)、益母草碱高剂量组(60 mg/kg)和阳性对照组(丹参滴丸),每组10只,灌胃给药7 d,第8天腹主动脉采血,测定大鼠的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体、凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)和血栓调节蛋白(TM)含量等指标。结果表明:与空白对照组相比,益母草碱低剂量组的PT显著延长(P<0.05),D-二聚体含量显著降低(P<0.05),血浆TM含量显著升高(P<0.05);益母草碱中剂量组的PT、APTT、TT显著延长(P<0.05),FIB含量显著下降(P<0.05),D-二聚体的含量极显著降低(P<0.01)。益母草碱高剂量组的PT极显著延长(P<0.01),TT显著延长(P<0.05),FIB含量显著降低(P<0.05),血浆中D-二聚体的含量极显著降低(P<0.01)。与阳性对照组相比,益母草碱低剂量组的PT显著延长(P<0.05),FIB含量显著升高(P<0.05),血浆TAT含量显著升高(P<0.05),血浆TM含量极显著升高(P<0.01);益母草碱中剂量组的PT、APTT、TT显著延长(P<0.05),血浆TAT和TM含量显著升高(P<0.05);益母草碱高剂量组的PT极显著延长(P<0.01),TT显著延长(P<0.05),血浆D-二聚体含量显著降低(P<0.05),TAT和TM含量显著升高(P<0.05)。说明益母草碱在浓度为30 mg/kg和60 mg/kg时对大鼠有良好的抗凝血作用。

硒化乌拉尔甘草多糖和乌拉尔甘草多糖对单核细胞增生李斯特菌抗菌活性的研究

为了比较硒化乌拉尔甘草多糖(selenizing Glycyrrhiza uralensis polysaccharide,SeGUP)和乌拉尔甘草多糖(Glycymhiza uralensis polyacchiade,GUP)对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogene,Lm)体内、体外抗菌活性,试验采用药敏纸片方法分别测定Lm对480 mg/mL、240 mg/mL、120 mg/mL GUP和SeGUP的敏感程度;采用微量肉汤稀释法测定SeGUP和GUP对Lm的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);设置SeGUP和GUP高剂量(240 mg/mL)组、中剂量(120 mg/mL)组、低剂量(60 mg/mL)组,各组分别与Lm混合培养24 h,每2 h取样测定OD600值,观察SeGUP、GUP对Lm生长速率的影响;检测各组4小时时的培养上清液中的碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶活性及蛋白质总含量;用结晶紫染色法检测SeGUP和GUP各剂量组对Lm生物被膜形成能力的影响;分别按体重灌胃小鼠SeGUP、GUP 300 mg/kg、150 mg/kg、75 mg/kg测定其对感染Lm小鼠的保护效果。结果表明:480 mg/mL SeGUP对Lm高度敏感,抑菌圈直径为15.0 mm;480 mg/mL GUP中度敏感,抑菌圈直径为13.0 mm。SeGUP和GUP对Lm的MIC分别为120 mg/mL、240 mg/mL,MBC分别为240 mg/mL、480 mg/mL。各剂量SeGUP和GUP均能抑制Lm的生长,其中240 mg/mL SeGUP抑制效果最好;与空白对照组相比,SeGUP和GUP各剂量组的AKP、β-半乳糖苷酶活性及蛋白质总含量均显著升高(P<0.05),各剂量组均能显著抑制生物被膜形成(P<0.05);与模型组相比,300 mg/kg、150 mg/kg、75 mg/kg SeGUP组和300 mg/kg、150 mg/kg GUP组小鼠死亡率均显著降低(P<0.05),75 mg/kg GUP组小鼠死亡率差异不显著(P>0.05);各SeGUP组小鼠死亡率低于相同浓度的GUP组。说明SeGUP、GUP对Lm生长有明显的抑制作用,相同浓度时SeGUP的效果更好,并且SeGUP浓度为240mg/mL时体外抗菌效果最好,按体重灌胃剂量为300 mg/kg时对小鼠的保护力最强。

中药复方水提物的抗氧化活性研究

为了研究中药复方水提物的抗氧化活性,试验选取90只健康昆明小鼠(雌雄各半)随机分为空白对照组(灌胃生理盐水)、阳性对照组(灌胃维生素E)和中药复方水提物低(灌胃中药复方水提物0.4 g/mL)、中(灌胃中药复方水提物0.8 g/mL)、高(灌胃中药复方水提物1.6 g/mL)剂量组,各组小鼠每天固定时间灌胃0.2 mL,每天1次,连续7 d,试验结束后测定各组血清生化指标、脏器指数、血清与肝脏抗氧化指标和免疫指标。结果表明:与空白对照组比较,中药复方水提物低、中、高剂量组小鼠血清胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDL)、葡萄糖(GLU)含量差异不显著(P>0.05),中剂量组三酰甘油(TG)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)含量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)活性显著降低(P<0.05),小鼠血清低密度脂蛋白(LDL)含量显著升高(P<0.05),天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性极显著降低(P<0.01);中药复方水提物低、中、高剂量组小鼠心脏指数、肝脏指数、脾脏指数、肾脏指数、胸腺指数差异不显著(P>0.05),但均呈上升趋势,中药复方水提物中、高剂量组肺脏指数显著提高(P<0.05);中药复方水提物组血清和肝脏组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)有所提高,丙二醛(MDA)含量有所降低,随着剂量增加效果也更加明显;中药复方水提物中剂量组血清白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、免疫球蛋白G(IgG)含量显著提高(P<0.05),IL-17、免疫球蛋白A(IgA)含量极显著提高(P<0.01),中药复方水提物中剂量组小鼠肝脏IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17含量差异不显著(P>0.05),IL-6含量显著降低(P<0.05)。说明中药复方水提物能够增强小白鼠的肝脏和肾脏功能,提高血清、肝脏抗氧化酶活性,降低MDA含量,能够调节血清免疫因子含量,从而提高机体免疫和抗氧化水平,0.8 g/mL的剂量效果较好。

硒化甘草多糖联合抗生素体外抑菌作用及体内免疫调节作用研究

旨在研究硒化新疆乌拉尔甘草多糖(Se GUP)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌是否有较好的体外抑菌作用,与抗菌药物联合使用是否能够增强抗菌药物的抑菌效果及其免疫相关活性研究。采用微量法检测Se GUP与抗生素的最小抑菌浓度(MIC),筛选出3种较为敏感的常用抗生素;采用棋盘法测算出Se GUP与所筛选的对细菌敏感的抗生素进行联合后的FIC指数,判定Se GUP与抗生素联合作用性质;采用ELISA法,测定不同剂量Se GUP组小鼠血清中Ig G、IL-1、IL-2含量,确定其免疫活性调节作用。体外抑菌试验结果表明,Se GUP对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有一定的抑制作用,其MIC值分别为100、200 mg/mL;头孢噻呋钠、卡那霉素与Se GUP联合作用后,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌耐药菌株均表现为一定的相加作用,其MIC值分别降低到25、50、50、50 mg/mL,而与恩诺沙星进行联合后的抑菌效果并不明显,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌耐药菌株表现为无关作用。免疫试验结果表明,不同剂量的Se GUP对小鼠血清中Ig G、IL-1和IL-2的含量均有不同程度的提高作用,其中,高、中剂量组的Se GUP的提高作用显著(P<0.05),与免疫抑制组相比差异极显著(P<0.01)。由此可知,一定剂量的Se GUP与头孢噻呋钠、卡那霉素联合后,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌效果的同时,能减少抗生素的使用剂量,并且Se GUP能提高小鼠血清中相关细胞因子含量,增强机体免疫力。本次试验结果为充分挖掘中药中有效成分提供了更多理论依据,为寻找更多有效防治金黄色葡萄球菌、大肠杆菌病的药物组合和对抗及减缓多重耐药菌株出现提供了新思路。

硒化甘草多糖对雏鸡抗炎活性的影响

为了了解硒化甘草多糖(SeGUP)对雏鸡抗炎活性的影响,试验采用脂多糖(LPS)建立雏鸡体内炎症模型,选取300只1日龄京红1号雏鸡,随机分为5组,分别为空白对照组、LPS组、LPS+黄芪多糖(APS)组、LPS+甘草多糖(GUP)组、LPS+硒化甘草多糖(SeGUP)组,除空白对照组外,各组试验鸡于8,10,12日龄腹腔注射LPS后,LPS+APS组、LPS+GUP组、LPS+SeGUP组分别肌肉注射给予浓度为1 mg/mL的APS、GUP、SeGUP,0.5 mL/只,连续7 d,分别于试验鸡18,25,32,39,46日龄每组选取10只,采用碳粒廓清法检测雏鸡巨噬细胞吞噬指数,用试剂盒检测雏鸡血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、一氧化氮(NO)和诱导型NO合酶(iNOS)含量。结果表明:与空白对照组比较,LPS组18,25,32,39,46日龄雏鸡巨噬细胞吞噬指数和血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、NO、iNOS含量均显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+SeGUP组18,25,32,39,46日龄雏鸡巨噬细胞吞噬指数和血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、NO、iNOS含量均显著降低(P<0.05)。说明SeGUP能缓解雏鸡因LPS刺激引起的炎性反应,从而发挥抗炎作用。