中国北京男男同性恋艾滋病感染者HLA分型及与疾病进展分析

目的:分析中国北京男男同性恋艾滋病感染者HLA-A、HLA-B、HLA-C基因频率以及HLA基因分型与疾病进展关系。方法:序列特异性引物的PCR扩增(PCR-sequence specific primer typing,PCR-SSP)对310名随机中国北京男男同性恋艾滋病感染者HLA-A、HLA-B、HLA-C基因进行分型,采用HIV Molecular Immunology Database中HLA Analysis Tools方法计算等位基因频率。结果:在北京男男同性恋艾滋病感染者队列中,HLA-A*1101(34.52%)基因频率最高,其次为HLA-A*0201(31.94%)、HLA-C*0102(27.10%)以及HLA-A*2402(26.45%)。根据艾滋病感染者1年内CD4细胞计数变化来判断感染者是否为快速进展者,结果发现快速进展者134例,非快速进展者176例。快速进展者中存在低水平的HLA-B*4403(快速进展者1.12%,非快速进展者为4.27%,P=0.0276),HLA-B*1511(非快速进展者5.98%,快速进展者2.25%,P=0.0282),HLA-B*5701(非快速进展者2.56%,快速进展者0.37%,P=0.0491)表达,而HLA-C*0304则在快速进展者中高表达(非快速进展者4.56%,快速进展者8.96%,P=0.0319)。结论:本研究获得了中国北京男男同性恋艾滋病感染者HLA-A、HLA-B、HLA-C基因的等位基因分布频率数据,并发现HLA-B*4403、HLA-B*1511、HLA-B*5701与延缓艾滋病疾病进展有关,而HLA-C*0304则与加速艾滋病疾病进展相关。

TZM-b1细胞系检测我国HIV-1病毒表型耐药性

目的利用TZM-b1细胞系检测艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)对逆转录酶抑制剂(AZT、d4T、ddI、NVP)的药物敏感性,并用该方法检测中国抗病毒治疗失败者的表型耐药。方法用两种实验室适应毒株SF33和ⅢB来评价TZM-bl细胞方法的敏感性;用外周血单个核细胞(PBMC)共培养法分离扩增抗病毒治疗失败者的临床毒株;用TZM-b1法检测16例临床毒株对逆转录酶抑制剂的表型耐药。结果AZT、d4T、ddI、NVP对SF33/ⅢB毒株的抑制50%病毒复制的药物浓度(IC_(50))分别为0.009/0.005μumol/L、0.125/0.113μmol/L、0.495/1.905μmol/L、0.093/ 0.045μmol/L。16例临床分离毒株中分别有13(81.396)株、13(81.396)株对AZT和NVP耐药。其中7株(53.8%)显示对AZT高度耐药;对NVP耐药的均为高度耐药,其中8株IC_(50)升高1000倍以上。结论TZM-b1细胞系可用来快速检测HIV-1病毒表型耐药。我国抗病毒治疗失败者的表型耐药主要表现为对AZT和NVP耐药。

HIV进入抑制剂的研究进展及其耐药性发生趋势

艾滋病病毒(HIV)进入抑制剂,是继抑制HIV复制药物,如逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂之后的新一类抗HIV药物,主要作用在HIV进入细胞环节,是抗HIV新药研究中最活跃的领域。HIV进入细胞需经过多个步骤,因此各类进入抑制剂的作用靶点各不相同。由于HIV的高度变异性,如同可产生对抗其他类抗病毒药物一样,HIV亦可产生针对各类进入抑制剂的耐药毒株。鉴于HIV进入抑制剂除T-20和Maraviroc外,多处于临床前研究,缺乏临床阶段的数据。该文将主要对各类HIV进入抑制剂的作用靶点,以及进入抑制剂耐药毒株产生的可能原因进行介绍。

EB病毒相关胃癌研究进展

世界范围内约 1 0 %的胃癌组织中可检测到EBV ,研究显示 :EBV感染能使原代培养的正常胃上皮细胞永生化 ,EBV相关胃癌是由一个EBV感染的细胞单克隆增殖形成 ,提示EBV感染在EBV相关胃癌的发展中起重要作用。本文就EBV相关胃癌的诊断、病毒存在形式和基因表达、影响其发生发展的协同因素以及EBV对上皮细胞的生长促进作用作一综述。

EBV相关胃癌与p53基因异常的研究

[目的]探讨EBV感染和p53基因异常在胃癌发生发展中的病因学作用.[方法]应用免疫组化技术检测13例EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC),45例临床指标与之匹配的EBV阴性胃癌(EBV negative gastric carcinoma,EBVnGC)以及58例相应癌旁组织中p53蛋白的表达;PCR-SSCP银染技术检测p53基因exon 5～8突变情况.[结果]①胃癌组p53蛋白阳性率为86.2%(50/58),而相应癌旁组织均为阴性,胃癌组p53蛋白的阳性率明显高于癌旁组织组,两组间有极显著性差异(P=0.0000).②EBVnGC p53蛋白阳性率为86.7%(39/45),过表达率为57.8%(26/45);EBVaGC p53蛋白阳性率为84.6%(11/13),过表达率仅为15.4%(2/13).两组间p53蛋白的阳性检出率无明显差异(P=0.7912),但EBVaGC组p53蛋白过表达率明显低于EBVnGC组,两组间有显著性差异(P=0.0085).③2例EBVnGC检测到p53基因突变,突变均位于exon 5,13例EBVaGC和58例相应癌旁组织均未检测到p53基因突变.[结论]p53基因异常与胃癌的发生密切相关,EBVaGC组织中存在p53蛋白的表达和过表达,但p53蛋白的异常累积可能并非p53基因突变所致.

人疱疹病毒7型U14编码区原核表达载体的构建

目的 构建人疱疹病毒7型（HHV-7）开放读码框（ORF）U14的原核表达载体，并且进行原核表达。方法 PCR技术扩增HHV-7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区（328～533氨基酸），目的基因与原核表达载体pThioHis A分别双酶切后连接，1×TSS法转化宿主菌E．coli BL21，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达。结果 基因序列分析表明目的基因序列与HHV-7标准毒株相应序列基本-致，SDS-PAGE电泳可观察到相对分子质量为3．57万融合蛋白的表达，Western印迹证实pp85蛋白成功表达。结论 HHV-7被膜蛋白pp85原核表达载体构建和表达成功，为进一步探讨该重组蛋白在HHV-7特异性抗体检测中的应用提供实验基础。

血管新生相关因子在乙型肝炎相关肝细胞癌各临床分期中的表达分析

目的研究血管新生相关因子在乙型肝炎相关肝细胞癌各临床分期中的表达情况及临床意义。方法选取2011-2013年于北京佑安医院就诊的乙型肝炎相关肝癌患者70例,按照肝癌分期标准将其分为肝癌早早期(n=18)、肝癌早期(n=17)、肝癌进展期(n=18)和肝癌晚期(n=17),另选取18例健康人群作为对照。运用Luminex 200液相悬浮芯片系统检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)1和VEGFR-2、肝细胞生长因子(HGF)在乙型肝炎相关肝癌各临床分期中的表达情况。计量资料组间比较采用t检验。结果与对照组相比,在肝癌早早期,VEGF和HGF水平明显升高,差异均有统计学意义(t值分别为2.69、2.18,P值分别为0.008、0.002);在肝癌早期,VEGF、VEGFR-1和HGF水平均明显升高,差异具有统计学意义(t值分别为1.73、2.03、2.54,P值分别为0.01、0.009、0.008);在肝癌进展期,VEGF、VEGFR-1和HGF水平均明显升高,差异具有统计学意义(t值分别为1.64、4.38、4.02,P值分别为0.01、0.007、0.005);在肝癌晚期,VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2和HGF水平均明显升高,差异具有统计学意义(t值分别为4.37、20.24、2.21、3.06,P值分别为0.007、0.009、0.01、0.003)。结论在肝癌早早期,血管新生相关因子VEGF和HGF已明显升高,随着病情进展VEGFR-1和VEGFR-2的表达也明显升高。

慢性乙型肝炎患者血清MCP-1水平及其与肝组织炎症、纤维化的关系

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与慢性乙型肝炎(CHB)肝组织炎症和纤维化的关系。方法选择CHB患者178例(观察组)和同期健康体检者20例(对照组),观察组根据肝组织病理学检查分为组织炎症81例(炎症分级G016例、G118例、G215例、G320例、G412例)、肝纤维化97例(纤维化分期S013例、S117例、S220例、S320例、S427例),病情严重程度为轻度46例、中度59例、重度73例。采用Luminex200检测两组血清MCP-1,分析观察组血清MCP-1与肝组织炎症分级和纤维化分期的关系。结果观察组及对照组血清MCP-1水平分别为(170.4±15.6)、(74.2±11.4)pg/m L,P<0.05;观察组病情轻、中、重度者血清MCP-1水平分别为(78.1±10.6)、(110.8±8.9)、(321.7±21.3)pg/m L,两两比较,P均<0.05。观察组肝组织炎症分级G0~G4者血清MCP-1水平分别为(80.3±12.1)、(104.5±16.2)、(130.4±14.7)、(186.9±15.1)、(212.3±23.5)pg/m L,纤维化分期S0~S4者血清MCP-1水平分别为(90.5±18.7)、(180.3±22.1)、(224.3±32.8)、(280.9±42.8)、(335.3±48.7)pg/m L。Spearman相关分析显示,CHB患者血清MCP-1水平与肝组织炎症分级、纤维化分期均呈正相关(r分别为0.593、0.813,P均<0.01)。结论 CHB患者血清MCP-1水平随病情的加重而升高,可能参与了肝组织炎症和纤维化形成。

评价原发性肝癌消融术后复发的实验室及影像学指标研究进展

近年来,采用微创介入如射频消融治疗、微波消融治疗、氩氦刀冷冻消融治疗等治疗肝癌,越来越多的被肝癌患者接受,与外科切除并列作为早期肝癌的首选治疗。但介入治疗普及的同时,其术后复发的问题也引起临床的重视,它影响着微创介入的疗效及患者的生存质量。本文对原发性肝癌消融术后复发的实验室和影像学指标作一综述。

胃癌组织中P53及P21蛋白的表达

①目的探讨P53和P21蛋白异常表达在胃癌发生发展中的作用。②方法应用免疫组化技术检测58例胃癌及相应癌旁组织中P53和P21蛋白的表达。③结果胃癌组织P53蛋白阳性表达率为86.21%(50/58),癌旁组织P53蛋白均为阴性表达,胃癌组织P53蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织,差异具有极显著性(P=0.000)。胃癌组织P21蛋白阳性表达率为62.07%(36/58),癌旁组织P21蛋白阳性表达率为89.66%(52/58),胃癌组织P21蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,差异有极显著性(2χ=12.5,P<0.01)。胃癌组织中P21与P53蛋白共同阳性表达率为56.9%,但两者无相关性(χ2=1.323,r=0.203,P>0.05)。④结论P53和P21蛋白表达异常与胃癌发生有关。

HIV-1早期感染者γδT细胞对储藏库细胞的细胞毒作用

目的探讨HIV-1早期感染者γδT细胞是否具有清除HIV-1储藏库的能力。方法入组HIV-1早期感染者16例,分离外周血单核细胞,体外采用唑来膦酸(5μmol/L)加IL-2(1 000 IU/m L)扩增γδT细胞。乳酸脱氢酶(LDH)法检测γδT细胞对储藏库细胞(J-Lat Full Length Clone10.6)的细胞毒作用;流式细胞计量术检测扩增前后γδT细胞的表型和储藏库细胞中GFP的荧光强度。结果唑来膦酸加IL-2在体外刺激γδT细胞快速且大量扩增(P<0.001)。γδT细胞对储藏库细胞具有较强的细胞毒作用,储藏库细胞中GFP的平均荧光强度显著减弱(P<0.05)。扩增后γδT细胞表现出细胞毒性NK细胞样表型,HIV-1感染者CD56+Vδ2T细胞的比例较健康对照显著增加(P<0.05)。结论γδT细胞具有清除HIV-1储藏库的能力,基于γδT细胞的自体或异体过继免疫治疗有望成为清除储藏库,治愈HIV-1感染的一种新策略。

胃癌组织m dm2、p53及p21蛋白表达与EB病毒感染的关系

应用免疫组化技术检测13例EB病毒相关胃癌(EBV aGC)(观察组)组织中m dm 2、p53和p21蛋白的表达,并与45例EB病毒阴性胃癌(EBV nGC)(对照组)进行比较,发现两组m dm 2、p53和p21蛋白的阳性检出率无明显差异(P均>0.05),但观察组p53蛋白过表达率(15.38%)明显低于对照组(57.78%),P<0.01。观察组核抗原基因EBNA 1均为阳性,潜伏膜蛋白基因LM P 1均为阴性,即刻早期基因BZLF 1、早期基因BARF 1和BHRF 1阳性率分别为46.15%、46.15%和15.38%,三者与m dm 2、p21和p53蛋白的表达均无显著相关性(P>0.05)。提示胃癌组织中病毒感染与p53蛋白的异常表达有关,而与m dm 2和p21蛋白的异常表达无相关性。

EBV、mdm2和p53基因异常在胃癌发生发展中的作用

目的:探讨EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinoma, EBVaGC)组织mdm2和p53基因异常与EBV感染的关系. 方法:应用免疫组化技术检测13例EBVaGCs、45例临床病理资料与之匹配的EBV阴性胃癌(EBV negative gastric carcinomas,EBVnGCs)以及58例相应癌旁组织中p53和mdm2蛋白的表达;PCR-SSCP银染技术结合DNA测序检测p53基因exon 5-8突变. 结果:(1)胃癌组p53和mdm2蛋白阳性率分别为86.2% (50/58)和29.3%(17/58),癌旁组织组p53和mdm2蛋白均为阴性,胃癌组p53和mdm2蛋白阳性率均明显高于癌旁组织组,两两间有极显著性差异(X2=50.000, P=0.0 000<0.01;X2=15.059,P=0.0 001<0.01).(2) EBVnGC组p53和mdm2蛋白阳性率与EBVaGC组p53 和mdm2蛋白阳性率均无明显差异,但EBVaGC组p53 蛋白过表达率(15.4%)明显低于EBVnGC组(57.8%),两组间有极显著性差异(X2=7.2 593,P=0.0 085<0.01). (3)mdm2蛋白阳性表达与p53蛋白过表达呈显著正相关(X2=11.1 839,P=0.0 008<0.01,r=0.4 391).(4)2例EBVnGCs检测到p53基因突变,突变均位于exon 5,13 例EBVaGCs和58例相应癌旁组织均未检测到p53基因突变;EBVaGC组p53基因突变率与EBVnGC组相比无显著性差异(P=0.5989). 结论:p53基因突变可能并非胃癌组织中p53蛋白异常累积的主要原因;mdm2蛋白可通过抑制野生型p53蛋白的功能而产生致癌作用;胃癌组织中EBV感染与p53蛋白的异常表达有关,而与mdm2蛋白的异常表达以及p53基因突变无显著相关性.

酶联免疫吸附试验检测人疱疹病毒7型抗体的研究

目的建立一种简便、快速、可靠的检测人疱疹病毒7型(HHV 7)特异性IgG和IgM酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法应用HHV 7标准株G lasgow感染SupT1细胞,制备并纯化细胞工程抗原和重组pp85抗原;对325份血清HHV 7抗体进行检测,建立HHV 7特异性IgM和IgG间接ELISA,并与Q iagen公司ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果采用细胞工程抗原和重组抗原制备的HHV 7 IgG和IgM ELISA诊断试剂敏感性、特异性、稳定性及重复性[变异系数(CV)<10%]较好;以Q iagen公司ELISA试剂盒为参比,重组抗原IgG ELISA检测上述标本的敏感性、特异性和符合率分别为98.1%、94.1%和97.8%,IgM ELISA分别为84.6%、99.7%和99.1%;与细胞工程抗原相比,重组抗原诊断试剂的特异性高而敏感性略低。结论自制HHV 7 IgG和IgMELISA检测试剂敏感特异,可用于临床HHV 7感染的诊断及流行病学调查。

HCV/HIV共感染者T细胞表面CD38分子的表达水平

丙型肝炎病毒（HCV）/人类免疫缺陷病毒（HIV）共感染对丙型病毒性肝炎的病情进展有影响,其机制尚不清楚。CD38分子是T细胞表面活化标志之一[4,5],在HCV/HIV共感染者中T细胞的活化是否发生变化尚无定论。我们于2012-2013年通过对比分析单独HCV感染组和HCV/HIV共感染组患者T细胞表面CD38分子的表达水平,了解HCV/HIV共感染者的T细胞活化的变化，报告如下。

胃癌组织中p53基因突变及p53和mdm2蛋白表达的研究

目的:探讨mdm2和p53基因异常在胃癌发生发展中的作用以及两者相关性.方法:应用免疫组化技术检测58例胃癌组织以及相应癌旁组织中 mdm2和p53蛋白的表达;PCR-SSCP银染技术检测p53基因exon 5～8突变情况.结果:胃癌组p53和mdm2蛋白阳性率分别为86.21%(50/58)和29.31%(17/58),癌旁组织组p53 和mdm2蛋白均为阴性,胃癌组p53和mdm2蛋白阳性率明显高于癌旁组织组,两两间差异有统计学意义,P=0.000 0、P=0.000 1.胃癌组织中p53和mdm2蛋白表达率与肿瘤大小、组织学类型、分化程度、淋巴结转移以及患者年龄等无显著相关性,P>0.05. mdm2蛋白阳性表达与p53蛋白过表达呈显著正相关,χ2=11.183 9,P=0.000 8,r=0.439 1. 2例胃癌组织检测到p53基因突变,突变均位于exon 5,58例相应癌旁组织均未检测到p53基因突变.结论:mdm2和p53蛋白异常表达与胃癌发生有关, p53基因突变可能并非胃癌组织中p53蛋白异常累积的主要原因,mdm2蛋白在胃癌发生发展中的作用可能与p53蛋白密切相关.

急性感染实验测定CD_8^+细胞非细胞毒性的HIV抑制作用

目的建立急性感染实验方法,用于检测艾滋病病毒(HIV)感染者CD8细胞非细胞毒性的HIV抑制作用。方法用免疫磁珠分离HIV感染者的CD+8细胞,按2∶1、1∶1、0.5∶1、0.25∶1和0.125∶1的比例,与体外急性感染的CD+4细胞混合培养,定期测定培养物上清中逆转录酶活性,与阴性对照比较,计算病毒抑制率。结果88%的病例(15/17)在CD8与CD4细胞比例为1∶1时,达到90%的病毒抑制率,90%病毒抑制率时的平均CD8与CD4比例为0.88∶1。结论成功建立了急性感染实验评价CD+8细胞非细胞毒性的HIV抑制活性的方法。研究中还观察到HIV感染的长期不进展者,其CD+8细胞具有较强的病毒抑制能力。

两步和三步法分离样本资源库抗凝血单个核细胞和血浆效果比较

目的比较两步和三步法分离外周血单个核细胞(PBMC)和血浆的效果。方法对送至样本资源库的16例抗凝血标本分别采用两步法和三步法分离PBMC及血浆,并对2种不同处理方法的分离效果进行比较。两步法为将抗凝血加入淋巴细胞分离液,离心后分别分离PBMC和血浆;三步法则先离心分离血浆后再加入淋巴细胞分离液,离心后分离PBMC。结果 2种处理方法处理后检测的活细胞数、总细胞数及活细胞比例结果相近,差异均无统计学意义(P>0.05)。两步法血浆中细胞因子水平均低于三步法,其中25种细胞因子比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论两步法省时,操作少,在分离PBMC方面效果与三步法类似;但两步法在分离血浆方面会影响血浆细胞因子水平。

EB病毒相关胃癌组织中P53及P21蛋白的表达

目的探讨Epstein-Barr病毒(EBV)感染、P53和P21蛋白表达异常在胃癌发生发展中的作用以及三者相关性。方法应用免疫组化技术检测13例EBV相关胃癌(EBVaGCs)、45例临床指标与之匹配的EBV阴性胃癌(EBVnGCs)以及58例相应癌旁组织中P53和P21蛋白的表达。结果胃癌组织P53蛋白阳性率明显高于癌旁组织,差异有极显著性(χ2=50.000,P<0.01)。EBVnGCs组织中P53蛋白阳性率与EBVaGCs相比差异无显著性(χ2=0.072,P>0.05);但EBVaGCs组织P53蛋白过表达率明显低于EBVnGCs组织,差异有极显著性(χ2=7.259,P<0.01)。胃癌组织P21蛋白阳性率明显低于癌旁组织,差异有极显著性(2χ=12.500,P<0.01)。EBVnGCs与EBVaGCs组织P21蛋白阳性率无明显差异(P>0.05)。胃癌组织中P21与P53蛋白共同表达率较高,但无显著相关性(2χ=1.323,P>0.05,r=0.202 5)。结论P21蛋白表达存在p53依赖性和p53非依赖性两条途径;胃癌组织中EBV感染与P53蛋白的异常表达有关,而与P21蛋白异常表达无显著相关性。