基于网络药理学和细胞实验探讨参苓白术散对肝纤维化中TGF-β通路的作用机制

目的:基于网络药理学预测参苓白术散抗肝纤维化(HF)的潜在作用靶点及可能相关的信号通路,同时通过体外细胞实验验证其潜在的分子机制。方法:运用TCMSP和BATMAN-TCM数据库初步获取参苓白术散的活性成分和作用靶点,借助Gene Card和OMIM数据库收集疾病相关的靶点,两者取交集绘制韦恩图,采用Cytoscape 3.7.2软件建立“药物-活性成分-靶点”网络图,并通过STRING数据库获得PPI网络,通过GO及KEGG富集分析筛选出主要作用通路和靶点蛋白。根据预测情况通过细胞实验对生物学分析进行验证。建立大鼠肝星状细胞(HSC-T6)模型,设置空白组,低、中、高剂量组分别给予100、200、400μg/mL参苓白术散处理,阳性对照组给予200μg/mL秋水仙碱处理。MTT法检测不同组别细胞增殖的抑制率,划痕实验检测用药后HSC-T6的迁移能力,ELISA法检测给药后各组细胞内α-SMA蛋白含量,Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白的表达水平。结果:经筛选最终获得参苓白术散潜在靶点970个,疾病靶点513个,药物与疾病交集靶点117个,主要作用于Akt1、IL-6、TGF-β1、TNF等核心靶点,涉及脂质与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、乙型肝炎通路、转化生长因子-β信号通路等通路。与空白组相比,MTT检测显示,参苓白术散能够抑制HSC-T6增殖,差异具有统计学意义(P <0.05);细胞划痕实验显示,给药后可以减弱HSC-T6迁移能力,差异具有统计学意义(P <0.05);ELISA实验显示,参苓白术散可以降低α-SMA蛋白含量表达,差异具有统计学意义(P <0.05);Western blot实验显示,参苓白术散能够下调TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:参苓白术散抗肝纤维化具有多成分、多靶点、多通路的特点,其作用机制可能通过参与细胞增殖、凋亡、免疫和炎症反应等生物过程,同下调TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白有关。

基于网络药理学和细胞实验探讨阿魏酸抗肝纤维化的作用机制

目的基于网络药理学研究阿魏酸(Ferulic acid,FA)对肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)疾病的作用机制,并根据结果建立大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)体外模型进行验证。方法通过有机小分子生物活性数据库(PubChem)、小分子药物靶点预测在线平台(SwissTargetPrediction)和药效预测靶点数据库(PharmMapper)筛选出FA的潜在靶点,与突变位点数据库(DisGeNET)、人类基因数据库(GeneCards)和人类孟德尔遗传病数据库(OMIM)中筛选的FA靶点进行重合取交集,随后利用STRING平台进行蛋白相互作用分析(Protein-protein interaction,PPI)、采用R644.0.3对关键靶点进行基因本体论(Gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,Cytoscape 3.7.2软件构建“成分-靶点-疾病”网络图。基于此,通过细胞活性检测(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测HSC-T6的增殖情况并以此确定分组:空白组、低剂量组(100μg·mL^(-1)FA)、中剂量组(200μg·mL^(-1)FA)、高剂量组(400μg·mL^(-1)FA)和阳性对照组(200μg·mL^(-1)秋水仙碱),划痕实验检测HSC-T6的迁移能力,酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测HSC-T6内α-平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况,流式细胞仪检测HSC-T6的周期变化,聚合酶链式反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测JAK2、STAT3 mRNA相对表达,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测JAK2、STAT3蛋白的分子表达量。结果获得FA与HF的交集靶点254个,核心靶点有信号转导和转录激活因子3(STAT3)、白蛋白(Albumin,ALB)、蛋白激酶B1(Protein kinase B,Akt1)、肿瘤抑制蛋白(Tumor protein P53,TP53),表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和胱天蛋白酶3(Caspase-3,CASP3)等。KEGG分析发现FA对HF的作用通路主要涉及磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3 kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、Janus激酶/信号转导和转录激活因子(Janus kinase/signal transducer and activvator of transcription,JAK/STAT)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)等通路。实验结果表明,在CCK-8实验、划痕实验以及ELISA实验中,与空白组相比,低、中、高剂量组和阳性对照组的细胞增殖率、迁移能力和α-SMA蛋白表达均显著降低(P<0.05),经流式细胞仪检测,与空白组相比,低、中、高剂量组和阳性对照组周期阻滞率明显增高(P<0.05);经qRT-PCR仪和Western Blot检测,与空白组相比,低、中、高剂量组和阳性对照组中JAK2、STAT3蛋白分子量与mRNA相对表达均逐渐降低(P<0.05)。结论FA抗HF具有多通路、多靶点的特点,FA可以通过下调JAK2和STAT3靶点抑制肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)活化起到抗HF的作用。

《伤寒论》阳明病之二便辨析

《伤寒论》阳明病篇提纲即言“阳明之为病,胃家实也”,《灵枢·本输》云“大肠小肠皆属于胃”。阳明本燥,邪气并入大肠,传化糟粕功能失常而影响大便;小肠不得升清降浊致膀胱气化不利,亦可影响小便,及二便失司是阳明病常见征象。阳明病小便异常可提示津液有无,胃气虚实,湿热内结与浊气有无出路等;阳明病大便燥硬可反应“热”“实”“燥”互结于胃内;且大、小便之间互为关联。本文旨在梳理阳明病二便相关论述,探讨二便症状表现特点,辨析此篇内小便、大便病机,揭示其内在区别与联系,凸显二便在阳明病篇相关理论内涵。

重离子辐射旁效应与中医的“传舍”理论

近年来辐射旁效应(RIBE)被医学界广为重视,并且通过设计各种实验来解释这种现象,从中医学的角度来看,辐射总体属于外来的“毒邪”,学者们将其命名为“电离毒”“辐射毒”等。笔者认为辐射所致的旁效应类似于《黄帝内经》中的“传舍”,可理解为是辐射阳毒入里、发生传舍。“气”是辐射毒发生“传舍”的载体,可通过表里、五行、经络传舍,当然或经上述途径复合传舍,或直中脏腑或骨髓等深部组织。这些理论可拓宽中医对放疗的认识,尤其在防治方面,可根据这些理论“先安未受邪之地”。

温阳利水法治疗糖尿病肾病的理论探究

古今中医理论中并未出现糖尿病肾病(diabeticnephropathy, DN)的相关名词,根据其症状可与中医的“消渴”“关格”“水肿”等病进行对应辨证。DN多由糖尿病迁延不愈所引发,继而出现的肾小球滤过率降低、蛋白尿、水肿,肾小球硬化,是糖尿病非常严重的并发症。目前关于临床上对DN的治疗仍以西药为主,但是大多数西药不可避免地产生了一系列的不良反应,严重降低了患者的生活质量。中医药治疗DN针对病因病机,在改善DN的临床症状、提高患者的生活质量方面疗效显著。中医认为在DN发展过程中,脾肾阳虚、水停失运是其重要病机,同时水停失运也会变生多种他证,因此,在此病治疗过程中,应重视温阳利水法的研究与运用。

水提法和醇提法对舒肝和络醒脾方抗肝纤维化作用的影响

目的:比较水提法和醇提法对舒肝和络醒脾方抗肝纤维化作用的影响。方法:将舒肝和络醒脾方分别采用水提法和醇提法提取备用。将无特定病原体级Wistar大鼠40只分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、舒肝和络醒脾方水提组和舒肝和络醒脾方醇提组5组,每组8只。从造模第1天开始,除正常对照组外,其余各组大鼠均腹腔注射体积分数为400 mL/L的四氯化碳2.0μL/g体质量,3次/周。从造模第2天开始给药,1 d 1次,至第8周末。舒肝和络醒脾方水提组和醇提组分别以水提物和醇提物28.75 g/kg体质量灌胃,秋水仙碱组用秋水仙碱溶液5.0μL/g体质量灌胃,模型对照组以等量生理盐水灌胃,正常对照组不做任何处理。第8周末当晚,大鼠禁食不禁水12 h,次日上午称量体质量,麻醉大鼠,取血、肝脏。计算肝指数;采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清透明质酸(HA)、IV型胶原(CIV)的含量;采用赖氏法检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量;取肝脏组织以甲醛固定,制备石蜡切片,Masson染色,显微镜下观察肝组织形态学变化,并对其纤维化程度进行评估。结果:与正常对照组对比,模型对照组大鼠肝指数、血清HA、CIV、ALT、AST的水平明显升高(P<0.05),肝脏明显变硬,MASSON染色显示肝纤维化明显。经不同提取物治疗后,两组大鼠肝指数、血清HA、CIV、ALT、AST的水平明显降低(P<0.05),肝纤维化程度均明显减轻(P<0.05)。水提组和醇提组之间虽然HA、ALT和AST差异有统计学意义,但数据出现反向背离,无法证明两组间治疗效果的差异。结论:水提法和醇提法对舒肝和络醒脾方的抗纤维化作用无明显影响,其抗纤维化成分及机制有待深入研究。

经方中白术应用规律探析

通过研究学习《伤寒论》白术有关条文及各类文献,对其进行分析、归纳和总结,探究其用法用量、配伍方式,尤其是在辨证论治原则下蕴含的“量准效专”“以辅为增”之特点及其病机、脉象等规律,以期对研究仲景辨证论治思想和中医临床发展提供指导意义。

基于MYLK和PGE2-cAMP信号通路探讨半夏泻心汤对功能性消化不良大鼠的影响

目的 观察半夏泻心汤通过肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase, MYLK)和前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)-环磷酸腺苷(cyclicadenosinemonophosphate, cAMP)通路对功能性消化不良(functionaldyspepsia, FD)模型大鼠十二指肠的影响及表达。方法 采用夹尾激惹刺激和无规律进食法构建功能性消化不良大鼠模型,60只SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组、多潘立酮组、半夏泻心汤组,各15只大鼠;多潘立酮组给予多潘立酮水溶液(2.7mg·kg^(-1)·d^(-1)),半夏泻心汤组给予半夏泻心汤水煎剂(4g·kg^(-1)·d^(-1)),空白、模型两组分别灌服等容积生理盐水,实验共28d。检测体重、摄食量评价大鼠一般状态;ELISA法检测各组大鼠血清PGE2、cAMP含量;HE染色观测各组大鼠十二指肠病理形态情况;实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测各组大鼠十二指肠MYLK、PGE2及其受体EP1和EP4的mRNA含量变化;WB法检测MYLK、cAMP、EP1和EP4的蛋白表达。结果 与空白组对比,模型组大鼠体重幅度呈缓慢上升趋势,摄食量呈下降趋势(P<0.05);血清PGE2、cAMP含量明显降低(P<0.05);病理结果显示用药干预结束后四组大鼠十二指肠组织的上皮黏膜结构完好,细胞排列规则,未出现明显的炎性反应;十二指肠MYLK基因和蛋白含量明显升高(P<0.05),cAMP、PGE2、EP4基因和蛋白含量均显著下降(P<0.05);而EP1基因和蛋白含量统计学对比无差异(P>0.05)。半夏泻心汤用药后可明显改善上述指标(P<0.05)。结论 半夏泻心汤可抑制MYLK通路且升高PGE2-cAMP通路的表达,从而改善大鼠功能性消化不良的状态。

论经方中大黄炮制及煎服法的应用

通过研究《伤寒论》与《金匮要略》中有关大黄的经方,总结大黄相关的炮制方法、煎药溶媒和煎煮时间及顺序。认为大黄酒制后可制约其“寒性”,引药上行,清上焦热;缓其峻下之功,保护胃肠;增强活血之效。蒸大黄可缓中补虚,祛瘀不伤正。生大黄可泻下攻积,清热泻火。大黄煎煮溶媒多为普通水、井花水和酒,煎煮时间多为30~60 min。通过总结,从而为临床医生提供大黄的用药规律,充分发挥其药效,以切中病机。

黄芪当归配伍对抗肝纤维化的作用研究

肝纤维化(HF)是向肝硬化发展的必经阶段,严重者会转为肝癌,危害着人类健康。HF早期可以被逆转,因此,抗HF的这一逆转过程对肝硬化和肝癌的防治极为重要。黄芪当归配伍(芪归)在临床常用于活血化瘀、气血双补,对HF的逆转有较好的效果。本文分别从肝纤维化的中医理论和芪归药对配伍的相关药理学研究等方面探讨其对抗肝纤维化的作用机制,以期为临床治疗肝纤维化提供帮助。

基于《伤寒论》浅析石膏的清热作用

通过研究《伤寒论》中有关石膏的方剂,如桂枝二越婢一汤、大青龙汤、麻杏石甘汤、白虎汤、白虎加参汤和竹叶石膏汤,从石膏的君臣配伍、剂量改变及现代瘟疫运用等方面进行分析,从而正确认识石膏的清热作用,认为无论内外寒热,亦或虚实真假,只要合理配伍,即可正确大胆地运用石膏的清热作用。