科技伦理规范治理与科研诚信建设

在当今科技快速发展的时代,科技伦理规范治理与科研诚信建设显得尤为重要。论文阐述了科技伦理和科研诚信的发展概况、意义、现状、举措等,认为有必要营造良好的诚信科研环境,提高全社会的科技伦理意识和科研诚信水平。科技伦理规范治理与科研诚信建设是相辅相成的。一方面,科技伦理规范为科研诚信提供了道德指引和行为准则;另一方面,科研诚信又是科技伦理规范得以有效实施的重要保障。二者共同构成了一个健全的科技创新生态环境,有助于激发创新活力,促进科技活动的健康发展。

临床科研课题伦理审查工作实践及思考

科研项目的伦理审查是保障临床研究受试者权益的重要手段。论文通过分析科研项目伦理审查中的常见问题,提出构建科研项目伦理审查机制,加强伦理委员会自身培训与建设,与科研项目主管部门联动,规范课题申报前伦理审查的操作规程,提高研究人员的伦理意识,加强跟踪审查管理,切实提高科研伦理审查质量。

牛膝促进成骨细胞增殖的作用与机理研究

目的 :研究牛膝对成骨细胞株HFOB1 19的促增殖作用及其分子机制。方法 :制备牛膝含药血清 ,醇提法制备牛膝脱皮甾酮 ,MTT法检测二者对体外培养的HFOB1 19的促增殖作用 ,RT PCR检测PKARⅠ β的表达。结果 :牛膝含药血清与牛膝脱皮甾酮均能促进成骨细胞的增殖 ,并导致PKARⅠ β表达的上调。结果 :初步判定牛膝在体外有促进人成骨细胞增殖的作用 ,其主要作用成份为脱皮甾酮 ,并有可能是通过cAMP介导的信号传导途径进行的。

重组人骨形成蛋白-2在大肠杆菌中的表达、纯化和复性(英文)

目的:通过对大肠杆菌表达重组人骨形成蛋白-2的复性研究,得到高活性的重组人骨形成蛋白-2。方法:在大肠杆菌中通过温度诱导表达重组人骨形成蛋白-2经过Triton X-100清洗之后,又通过DEAE离子交换层析纯化包涵体,包涵体在8 mol/L尿素变性溶解,在氧化-还原(还原型和氧化型谷胱甘肽)复性系统中,通过简单的稀释复性,通过肝素亲和层析一步纯化法纯化重组人骨形成蛋白-2 ,最后通过诱导C2C12细胞产生碱性磷酸酶检测重组人骨形成蛋白-2活性。结果:温度诱导表达重组人骨形成蛋白-2是以包涵体单体的形式存在,经过几步纯化后,得到高纯度的包涵体。重组人骨形成蛋白-2在不同氧化-还原剂比例,和不同小分子化学辅助剂浓度中复性,得到复性的效率也不同。亲和层析纯化后,本实验得到重组人骨形成蛋白-2的生物学活性比商业化的重组人骨形成蛋白-2更高。结论:重组人骨形成蛋白-2属于转化因子-β家族,此复性方法可能应用于此家族的其他成员同时得到成本低、产量高的重组人骨形成蛋白-2 ,可能为临床应用创造了良好的条件。

猪卵透明带-3β截短型蛋白在原核系统中的表达研究

目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点被定向插入pET-3c质粒T7强启动子下游的多克隆区,筛选出重组子,经DNA测序验证正确后,转化表达菌株BL21(DE3)pLysS,再用IPTG对重组菌体进行诱导。结果:SDS-PAGE分析表明tunc-pZP3β在大肠杆菌系统中高水平表达,且在WesternBlot免疫印迹中能被特异性抗体识别。结论:对适当的抗原表位序列进行保留而截去两端一定的氨基酸序列,所获得的截短型蛋白能够实现在大肠杆菌中高效表达,这有利于深入研究该蛋白核心区域的功能。

反义封闭PKARⅠβ基因表达对双龙接骨丸含药血清体外促成骨细胞增殖作用的影响

目的进一步明确cAMP依赖的磷酸激酶Ⅰ型调节亚基β(PKARⅠβ)在双龙接骨丸含药血清促进体外培养成骨细胞增殖过程中的作用。方法构建表达PKARⅠβ基因反义序列的重组子pcDNA-antiPKARⅠβ,脂质体法转导成骨细胞HFOB119,MTT法检测其增殖状况。结果高剂量含药血清处理的反义基因封闭组中,HFOB1.19的增殖能力与空白血清对照组无显著差异(P>005)。结论双龙接骨丸含药血清的体外促成骨细胞增殖作用与PKARⅠβ基因的表达密切相关。

基因组半定量PCR方法检测肿瘤组织的基因缺失

目的 用 PCR方法检测肿瘤组织中抑癌基因的缺失状况。方法 PCR半定量技术。结果 10对标本有 5对发现缺失 ,80 %与 Southern杂交结果相符合。结论 半定量 PCR技术可以替代 Southern杂交 ,成为检测基因缺失的一种便利手段。

原核表达hbFGF结构与功能优化的研究

野生型hbFGF蛋白可溶性与稳定性较低一直是困扰研发人员的难题。分析其氨基酸序列发现含有 4个游离巯基 ,其中第 78、96、1 0 1位半胱氨酸游离巯基可能直接影响其可溶性、稳定性及活性。对天然hbFGF进行定点突变 ,一组将Cys78、Cys96同时突变 ,另一组将Cys78、Cys96与Cys1 0 1进行联合突变 ,均改为丝氨酸密码子 ,然后克隆入原核表达载体pET 3c ,进行表达 ,结果发现两种突变蛋白的可溶性大幅度增加 ,稳定性明显上升 ,其中三点突变的效果更为显著 ,但蛋白质的活性明显下降。可以认为 78、96与 1 0 1位半胱氨酸的游离巯基同时参与了天然hbFGF多聚体的形成 ,是导致野生型hbFGF可溶性与稳定性较低的主要原因 ,Cys1 0

bFGF在原代培养人皮肤成纤维细胞中的高效分泌表达

目的:提高碱性成纤维细胞生长因子在原代培养的成纤维细胞中的分泌表达。方法:bFGF缺乏典型的分泌信号肽,将鼠抗体轻链基因Igκ的信号肽序列引入该基因的5′端得到新的Igκ-bFGF重组体基因。同时考虑到人源细胞氨基酸编码密码子的偏好性,对整个基因序列密码子的第3位摇摆碱基作了偏好性调整,并克隆入真核表达载体中。得到的重组质粒用酶切的方法线性化,尽量去除质粒载体上大肠杆菌起源的基因序列,然后通过电穿孔的方法将线性质粒转导入原代培养的人皮肤成纤维细胞。结果:与野生型的bFGF基因相比,嵌合体bFGF被大量分泌到培养基中,同时对于成纤维细胞的增殖有明显的促进作用。结论:这种嵌合体基因的构建可以明显提高成纤维细胞对bFGF的分泌表达。

牛膝含药血清促进人T细胞增殖的作用与分子机制研究

目的 :研究牛膝对体外培养的人 T淋巴细胞增殖的影响及其可能的分子机制。方法 :制备牛膝含药血清 ,3 H-Td R掺入法检测其对体外培养的 T细胞的促增殖作用 ,RT-PCR检测 PKAR β的表达。结果 :牛膝含药血清能明显促进 T细胞的增殖 ,并导致 PKAR β表达的增加。结论 :初步认为牛膝在体外有促进人 T细胞增殖的作用 ,并有可能通过 c AMP介导的信号传导途径进行。

解码基因组中的“暗物质”

长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）是非编码RNA家族的重要成员,因其数量、种类、功能状况都不明确,又被称作基因组中的＂暗物质＂。本研究对其研究价值、作用的分子机制、与疾病的关系进行了探讨，

翻译起始区二级结构对荧光素酶基因在COS-7细胞中表达效率的影响

在荧光素酶基因起始密码子ATG下游插入4种串连重复的密码子(6×ATT ,3×ATT ,6×GCC与3×GCC) ,得到具有不同二级结构的翻译起始区(translationinitiationregion ,TIR) ,以研究TIR二级结构对该基因在COS 7细胞中表达的影响.Northern印迹结果显示,4种重组子mRNA的转录水平没有显著差异,而Western印迹与酶活性检测表明,与野生型结构相比,6×ATT与3×ATT能显著提高荧光素酶的表达量与活性,而6×GCC结构的表达量明显下降.使用计算机辅助分析软件,扫描上述TIR结构发现,TIR稳定性或二级结构复杂度是导致上述表达差异的主要原因.

纳豆激酶原基因的克隆及表达

从纳豆菌中克隆具有溶血栓性质的纳豆激酶原的基因 ,与质粒PBV2 2 0连接 ,转化大肠杆菌E .coliDH5α .挑取阳性克隆用EcoRⅠ /BamHⅠ双酶切鉴定得到一条约10 0 0bp的条带 .阳性克隆经温度诱导表达 ,用SDS_PAGE电泳鉴定 ,在 38kD处有一条明显的带 ,占菌体蛋白的 2 0 %左右 ,同时还表明该蛋白以包涵体的形式蛋白分子量为存在 .包涵体经收集。

二氢杨梅素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外抗增殖作用

0引言二氢杨梅素（dihydromyricetin,DMY）,化学名为3,5,7,3′4′5′-六羟基-2,3双氢黄酮醇,是从藤茶（Ampelopsis grossedentata）等植物茎叶中提取的一种二氢黄酮醇化合物。

快速液体培养法检测呼吸道标本中的肺炎支原体

目的探讨快速液体培养法检测肺炎支原体(MP)的临床应用价值,分析其假阳性的情况及原因。方法对93例呼吸道标本进行MP快速液体培养,培养液用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测肺炎支原体核酸,同时测定血清中肺炎支原体抗体,进行统计学分析。结果在93例检测标本中,肺炎支原体快速培养阳性16例,检出率是17.2%(16/93);FQ-PCR法阳性10例,检出率10.7%(10/93);血清学检测阳性22例,检出率23.6%(22/93)。3种方法检测结果无显著差异。结论快速液体培养法干扰因素多,影响其特异性;结果判断时结合显微镜检查,排除细菌或真菌等导致的假阳性,其特异性可达到与血清学及FQ-PCR法一致水平。

一氧化氮、内皮素-1和同型半胱氨酸对冠心病的辅助诊断价值

目的探讨血清一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)及同型半胱氨酸(Hcy)检测对冠心病的辅助诊断价值及与冠心病的关联性。方法检测264例冠心病患者和90名体检健康者(正常对照组)血清NO、ET-1和Hcy水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价NO、ET-1、Hcy对冠心病的辅助诊断价值,根据得出的最佳临界值确定3项指标的敏感性和特异性。引入常规危险因素(年龄、性别、糖尿病、高血压、血脂异常、吸烟、肥胖)进行校正,采用非条件Logistic回归分析评估NO、ET-1、Hcy作为冠心病危险因素的价值及与冠心病的关联强度。结果冠心病组血清NO水平明显低于正常对照组(P<0.001),而ET-1、Hcy水平明显高于正常对照组(P<0.001)。NO、ET-1、Hcy辅助诊断冠心病的ROC曲线下面积分别为0.723、0.742、0.718。非条件Logistic回归分析显示NO、ET-1、Hcy的比值比(OR)分别为2.254、5.116、2.308,95%可信区间(CI)分别为1.028~4.938、2.498~10.479、1.038~5.131,与冠心病的关联强度由高到低依次为ET-1、Hcy、NO。结论血清NO、ET-1、Hcy对冠心病有一定的辅助诊断价值,是冠心病的危险因素。

牛膝脱皮甾酮对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用

目的探讨牛膝脱皮甾酮(achyranthes bidentata ecdysterone,ABE)对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法选用8月龄SD雌性大鼠随机分5组:假手术组、去卵巢组、低剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅠ、中剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅡ、高剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅢ,以及α-D3处理组,药物灌胃,治疗3个月后处死大鼠,进行相关的检测。结果高剂量与中剂量ABE能够明显改善去卵巢后大鼠的骨密度与各项生物力学及骨形态计量学指标,低剂量处理组也有一定的治疗作用。结论牛膝脱皮甾酮对去卵巢大鼠骨质疏松具有防治作用,并呈剂量依赖性。

骨形态发生蛋白2通过Smad途径上调Osterix的表达

Osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T3-E1,C2C12中Osx的转录水平显著上调,并且与成骨分化指标Col1a1,osteocalcin具有相似的表达动力学特征.而且,在C3H10T1/2细胞中过表达负显性(dominant negative,DN)Osx基因,能够有效抑制BMP2诱导的成骨分化.过表达BMP/Smad信号通路抑制蛋白Smad6,能够抑制Osx转录水平的上调.但是通过荧光素酶报告载体对Osx的启动子-1254^+85区域进行分析后未发现接受BMP通路调控的启动子区域.上述结果表明,BMP2能够通过Smad途径上调Osx的表达,并对成骨分化的过程具有十分重要的作用.