蒙药古日古木——13含药血清通过Akt途径抑制肝癌细胞的增殖探析

目的 探讨蒙药古日古木—13中的有效成分对HepG2肝癌细胞的增殖迁移的抑制及其作用机制。方法20只Wistar大鼠按照随机数表法分为空白、低、中、高剂量药物组,每日一次进行灌胃,一周后心尖取血,制备含药血清完成培养基处理HepG2肝癌细胞,利用IncuCyteZoom动态细胞成像系统筛选含药血清作用最适浓度,选择最适浓度的含药血清作用于划痕处理的细胞,观察其迁移情况。通过网络药理学确定药物成分和疾病的共同蛋白,确定关键作用通路。蛋白免疫印迹检测Akt、p-Akt、mTOR、P-mTOR蛋白表达。结果 IncuCyte分析结果显示中浓度的含药血清对HepG2增殖抑制最明显。IncuCyte显示细胞划痕后,中浓度组含药血清处理的肝癌细胞迁移率下降,组间差异有统计学意义(P<0.05),抑制HepG2增殖。利用数据库筛选药物成分和疾病的共同靶点,Cytoscape平台分析出关键交叉蛋白是Akt,最后通过KEGG富集分析获得关联度较高的Akt相关信号通路。Western blot结果显示中浓度含药血清作用HepG2肝癌细胞48 h后可以下调Akt、p-Akt、mTOR、P-mTOR蛋白表达量,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 经研究发现,蒙药古日古木-13有效成分对HepG2肝癌细胞的增殖和迁移都有抑制作用,作用时间在48 h开始明显,Akt是最关键的蛋白靶点。

药用牡丹根部内生细菌的抑菌活性研究

以采自洛阳、铜陵和菏泽健康的"凤丹"(Paeonia ostii)根部组织为试材,采用表面消毒法进行内生细菌的分离,平板对峙法测定内生细菌对4种牡丹病原菌的拮抗作用;利用分子生物学的方法鉴定具有拮抗作用的菌株,同时进行拮抗菌株抑菌活性基因的扩增;通过酸沉淀的方法提取拮抗菌株的抑菌活性物质,测定其抑菌活性物质对牡丹灰霉病(Botrytis cinerea)的抑菌活性和抑菌机制,以期为牡丹内生细菌的进一步开发应用奠定理论基础。结果表明:从"凤丹"根部组织中共分离获得124株内生细菌,其中16株内生细菌对4种牡丹病原真菌均具有不同程度的抑菌活性,4个菌株Md1-14、Md2-17、Md2-35和Md3-14抑菌效果显著;鉴定结果表明Md1-14和Md3-14为苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)和假真菌样芽胞杆菌(B.pseudomycoides);Md2-17和Md2-35为贝莱斯芽胞杆菌(B.velezensis);扩增结果表明4个菌株中均具有合成抑菌活性物质的基因片段,拮抗菌株的抑菌活性物质对牡丹灰霉病菌具有显著的平板抑制作用,抑菌机制主要是导致灰霉病菌菌丝发生畸形、扭曲和局部膨大。