同种异体工程化软骨的构建和修复甲状软骨缺损的实验研究

目的 探讨同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫功能动物体内构建的可行性及其对甲状软骨缺损的修复能力。方法 利用组织工程技术制备同种异体片状和“C”型半管状工程化软骨 ;将 4周形成的片状工程化软骨用于修复 12只新西兰大白兔甲状软骨大片缺损 ;一定时间取材 ,分别对预定形态工程化软骨的构建情况及其修复效果进行大体和组织学评价。结果 ①构建 4周形成的预定形态工程化软骨呈乳白色 ,有弹性和支撑力 ,8周时软骨呈瓷白色 ,镜下观察显示软骨组织特征 ;②甲状软骨缺损修复术后 4、8、12周观察 ,修复区愈合良好 ,组织学检查 :修复区与正常软骨间的界面区可见软骨细胞生长及软骨基质生成 ,无免疫排斥迹象。结论 在有免疫功能的动物体内可形成同种异体预定形态组织工程化软骨 ,获取的工程化软骨对甲状软骨缺损有良好的修复效果 。

组织工程PHBHH多孔材料喉支架的制备与细胞相容性研究

目的探索组织工程多孔生物材料喉支架形态塑形物的制备技术,体外观察其细胞相容性,为进一步探寻软骨组织工程适宜生物材料提供实验依据。方法以新型生物材料聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate),PHBHH,M=60万]为原料,氯化钠盐粒为致孔剂,采用溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥技术制备多孔PHBHH喉支架形态塑形物,以乙醇置换法测定其孔隙率,负载软骨细胞后体外共同培养,通过大体形态、扫描电镜观察材料模压成形效果、材料孔隙连续性及其与软骨细胞粘附、分布和生长情况。结果模压成形的组织工程PHBHH材料塑形物类似喉支架形态,滤沥除盐后整体结构呈多孔海绵状,具有良好的支撑性,孔隙率达92%±2%,孔隙间连续性好,软骨细胞与材料粘附、生长及孔隙内分布状况良好,基质分泌旺盛。结论以溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥技术可制备出支撑度和孔隙率适宜的PHBHH组织工程多孔材料的喉支架,其材料与软骨细胞体外培养相容性良好。

聚羟基乙酸无纺网设计在软骨组织工程中的适用研究

目的观察接种同种异体软骨细胞后，一定设计的三维生物可降解材料聚羟基乙酸(PGA)无纺网在组织工程化软骨形成中的降解性。方法取乳兔肋软骨细胞，接种于PGA支架材料上，经体外培养，体内皮下种植或修复软骨缺损，一定时间取材，观察PGA纤维在工程化软骨形成过程中的降解情况。结果软骨细胞－PGA复合物体外培养1周，可见基质产生，未见纤维降解迹象；体内种植或修复软骨缺损4周后，新生软骨内仍有较多PGA纤维；8周时PGA纤维已基本消失；12周软骨细胞成熟，基质分泌丰富，未见任何PGA存留迹象。结论一定设计的PGA无纺网在组织工程化软骨形成过程中适合其生物降解性要求。

无纺网与多孔海绵状材料作为软骨组织工程支架的适用性及体内降解性

背景:聚羟基乙酸无纺网与聚羟基丁酸酯-聚羟基己酸酯共聚物多孔海绵具有良好的塑形适应性、生物降解性与生物相容性。目的:观察聚羟基乙酸无纺网与聚羟基丁酸酯-聚羟基己酸酯共聚物多孔海绵作为软骨组织工程支架的适用性及体内降解性。方法:分别制备乳兔软骨细胞-聚羟基乙酸无纺网复合物、乳兔软骨细胞-聚羟基丁酸酯-聚羟基己酸酯共聚物多孔海绵复合物。在实验组成年兔两侧背部皮下分别植入制备的两种复合物,在对照组成年兔两侧背部皮下分别植入聚羟基乙酸无纺网与聚羟基丁酸酯-聚羟基己酸酯共聚物。结果与结论:组织学观察显示,以聚羟基乙酸无纺网获取的组织工程软骨,植入4周时软骨细胞较小,软骨内有较多聚羟基乙酸纤维残留,8周时软骨细胞较成熟,包埋在陷窝内,聚羟基乙酸纤维消失,12周时软骨细胞成熟,基质分泌丰富,无聚羟基乙酸存留;以聚羟基丁酸酯-聚羟基己酸酯共聚物多孔海绵获取的组织工程软骨,植入4周时软骨细胞不成熟,软骨基质内似"杂质"样材料残留物较多,8周时软骨细胞较成熟,软骨基质内仍可见材料残留,12周时软骨基质材料残留基本消失。两组组织工程软骨特殊染色与免疫组织化学检测均显示再生软骨胶原与基质黏多糖生成良好,软骨中均检测出Ⅱ型胶原。表明两种材料作为软骨组织工程支架具有良好的适用性,其降解时间均达到组织工程软骨构建的要求。

组织工程化喉软骨的构建

目的 研究组织工程化喉支架软骨的构建方法。方法 酶消化法获取幼兔肋和关节软骨细胞并进行体外培养,传代时延长胰蛋白酶作用时间3-5 min,收集第3代培养的软骨细胞用于实验;采用溶液浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉形态聚羟基烷酸酯类[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate,PHBHH)]生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞-PHBHH复合物,体外共同培养1周后,分别在成兔体内用大网膜充填复合物中空部分与整体包裹、腹内成形(9只动物)和背部筋膜瓣与肌肉组织共同充填与包裹复合物、皮下成形(9只)的方法将负载软骨种子细胞的喉形态材料塑形物植入腹腔和背部,设空白对照组(每批3只)。术后一定时间取材,大体形态观察、组织学和免疫组织化学检测评估工程化喉软骨的成形与再生情况。结果 获取的软骨细胞活性为(93±2)％,传统方法为(94±2)％(P>0.05)。制备的喉形态生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,液体(乙醇)静态容积测定孔隙率>90％。两种体内植入法均构建出喉形态组织工程化组织,大体形态维持良好,组织学和免疫组织化学均证实为软骨组织,且形态学和组织学表现两者基本一致。结论 改良培养细胞传代过程中胰酶作用程度未影响软骨细胞的成软骨性能;

气管插管后持续性声嘶原因的相关危险因素分析

目的 分析与气管插管后持续性声嘶原因相关的危险因素。方法 通过喉镜检查和杓状软骨拨动复位术治疗确定 78例患者的声嘶原因。从插管操作者技术水平、患者插管条件、年龄、留管时间及手术类别等方面探讨这些原因发生的危险因素。结果 71例声嘶原因为杓状软骨脱位 (91.0 3 % ) ,5例单侧声带麻痹 (6.41% ) ,2例喉内肉芽肿形成 (2 .65% )。声嘶发生在各年龄段所占比率无明显差别 ;留管时间 >12h的患者占全部声嘶患者17.95% ;心胸手术后声嘶占全部声嘶患者的 84.62 % ;与插管操作者技术或患者插管条件有关者占 76.64%。结论 插管技术。

以PGA为三维支架同种异体工程化软骨的构建

为探讨以聚羟基乙酸 (PGA)为三维支架材料的同种异体软骨细胞构建组织工程化软骨的能力 ,采用胶原酶消化方法分离乳兔肋软骨获取种子细胞 ,收集体外培养传 2～ 3代的软骨细胞 ,接种于经多聚赖氨酸处理的PGA支架材料上 ,将细胞 材料复合物种植在成兔皮下 ,一定时间取材 ,对获得的同种异体工程化软骨进行组织学评价。结果显示 ,软骨细胞体外培养 1天后 ,在PGA支架上分布均匀 ;培养 1周左右 ,PGA纤维间有呈蜘蛛网状基质产生。种植复合物 4周取材可见PGA纤维未完全降解 ,软骨细胞不成熟 ,周边存在一定程度炎细胞浸润 ;8周取材 ,PGA纤维消失 ,软骨基本成熟 ,炎细胞浸润不明显 ,软骨基质含量丰富 ,分布与正常肋软骨组织学特征相似。提示以PGA为支架材料同种异体软骨细胞在有免疫力的动物体内可形成工程化软骨 。

改良以聚羟基乙酸为支架同种异体组织工程化塑形软骨的构建

目的优化组织工程技术构造塑形同种异体软骨组织的方法.方法酶消化法获取乳兔关节和肋软骨细胞并进行体外培养,传代时适当延长胰蛋白酶作用时间.收集第3-4代培养细胞用于实验.将聚羟基乙酸(PGA)塑形后接种软骨种子细胞构建成细胞-PGA复合物,植入成兔皮下(在材料塑形和复合物种植过程中改良传统方法).于种植后不同时间点取材进行大体和组织学观察,评价软骨形态和再生情况并与改良前方法比较.结果(1)培养细胞传代时适当延长胰酶作用时间所获软骨细胞活性为(92±2)%,传统方法为(93+2)%(P＞0.05).(2)种植后4周,标本呈乳白色,有一定撑力;组织学观察见软骨细胞不成熟,基质含量低,周边有炎细胞浸润.8和12周时,标本呈瓷白色,软骨组织基本成熟,炎细胞浸润不明显.16周时,外观与12周一样,软骨细胞生长良好,新形成的软骨组织内未见血管生长,无炎细胞浸润.结论调整培养细胞传代时胰酶作用时间收获的软骨种子细胞在有免疫力动物体内成软骨效应良好,无明显免疫排斥;PGA塑形和复合物皮下种植方法的改良有利于同种异体组织工程化预定形态软骨组织的形成.

气管插管后持续性声嘶的原因及其治疗

目的 探讨气管插管后持续性声嘶的原因及评估杓状软骨复位术的治疗效果。方法 对７８例病人通过检查及疗效观察，确定声嘶原因。采用杓状软骨复位术及肉芽摘除术治疗。结果７８例中，７１例为杓状软骨脱位（９１．０３％），５例声带麻痹（６．４１％），２例喉内肉芽形成（２．５６％）。构状软骨脱位的病人全部治愈；声带麻痹治疗无效；喉肉芽形成的病人，１例治愈，另１例发音改善。结论 构状软骨脱位、声带麻痹及喉内肉芽形成是气管插管后持续性声嘶的主要原因；构状软骨复位术对构状软骨脱位所致的声嘶疗效明显。

耳鼻咽喉科领域的软骨组织工程

耳、鼻、喉和气管的软骨组织工程研究已有较大进展,已分别在裸鼠和具有免疫力动物体内形成了与耳鼻咽喉有关的组织工程化软骨组织,并有初步应用的实验研究报道。随着胚胎干细胞、骨髓基质干细胞、同种异体软骨细胞和智能生物材料的研发和应用,耳鼻咽喉科软骨组织工程有望获得突破性进展。本文综述了该领域的软骨组织工程研究现状和发展趋势。

聚羟基烷酸酯聚合物负载软骨细胞修复同种异体喉软骨缺损

背景:软骨组织工程基础研究相当深入,但在耳鼻咽喉科实际应用研究颇少,探索组织工程技术简便实用的喉软骨修复方法是值得研究的课题。目的:比较多孔海绵状聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物生物材料负载软骨细胞体外培养形成的初期组织工程软骨组织与体内植入一定时期形成的较成熟组织工程软骨组织修复同种异体甲状软骨缺损的效果。方法:收集体外培养第3代乳兔(3 d龄)软骨细胞,以多孔海绵状聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物生物材料为细胞外基质,采用组织工程技术制备细胞-材料复合物,共同体外培养形成初级组织工程软骨组织后直接应用于成兔甲状软骨缺损的修复(实验组A,n=5)或将初级组织工程软骨组织体内植入一定时期形成较成熟组织工程软骨再应用于甲状软骨缺损的修复(实验组B,n=5)。设单纯聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物材料修复组(对照A组,n=4)和单纯软骨细胞修复组(对照B组,n=4)作为对照。分别于术后4周(实验B组)和8周(实验A组、对照A组、对照B组)取材,对甲状软骨缺损修复效果进行大体和组织学评价。结果与结论:两者大体支架形态基本一致,修复区与原有软骨均相续平坦,无凹陷及缺损。但实验A组存在界面无细胞区,修复区基质分泌不丰富;实验B组界面区有细胞生长,基质分泌良好。两者炎细胞浸润均不明显。对照组修复区凹陷,呈暗红色软组织充填,组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。结果表明在有免疫力的动物体内,初级组织工程软骨组织直接应用与体内植入后再应用均能有效修复同种异体甲状软骨缺损,无明显免疫反应;相同时期内,应用较成熟组织工程软骨组织修复效果优于应用初级组织工程软骨组织。然而,直接应用初级组织工程软骨组织可节省时间、成本、工作量及操作环节,避免二次皮下手术的痛苦,是比较实用的方法之一。

悬雍垂腭咽成形术围术期的麻醉要求

目的 探讨适宜悬雍垂腭咽成形术的全麻方法和利于手术的麻醉要求。方法 对 72例全麻悬雍垂腭咽成形术围术期麻醉处理的合理性及其对手术的影响进行总结和评估。结果 术前全麻气管内插管 ,54例静脉快速诱导和 18例表麻清醒下操作 ,分别有 11例和 5例出现插管因难 ;术中及术后因麻醉管理原因出现不同程度呼吸困难 15例 ,其中 2例行紧急气管或环甲膜切开术 ,无死亡病例。结论 术前对插管方法的选择和插管难易程度作出评估是麻醉成功的前提 。

同种异体组织工程预定形态软骨的研究

目的研究以聚羟基乙酸(Polyglycolic acid,PGA)为细胞支架同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫力的动物体内构建的可行性。方法取1周龄乳兔肋软骨和关节软骨，收集体外培养第3～4代的软骨细胞，接种于塑为管状和片状经多聚赖氨酸处理的PGA材料上。分别于6、12周取材，行大体和组织学观察评价。结果软骨细胞－PGA复合物体外培养1周有基质产生。种植6周后，管状和片状复合物生成软骨，结缔组织内可见炎细胞；12周时软骨细胞成熟。结论同种异体软骨细胞与PGA所形成的复合物在有免疫力的动物体内可构建出预定形态软骨。

同种异体软骨细胞-聚羟基乙酸复合物修复喉软骨缺损

目的探讨同种异体软骨细胞－聚羟基乙酸 (PGA)复合物在有免疫力的动物体内对喉甲状软骨的修复能力。方法消化分离乳兔肋软骨，获取种子细胞，体外培养，收养第 2～ 3代培养细胞，接种于经多聚赖氨酸处理后的 PGA三维可降解生物支架料上。结果复合物体外培养 7～ 10d，可见呈蜘蛛网状基质产生。术后 4周，修复区愈合良好，无瘢痕及坏死现象；组织学观察可见愈合面有软骨细胞生成和基质分泌。结论软骨细胞－ PGA复合物可用于喉软骨缺损的修复，修复区愈合良好，无明显免疫排斥反应。

慢性鼻-鼻窦炎120例药物治疗评估

目的评估药物治疗慢性鼻-鼻窦炎疗效。方法根据症状、鼻内镜检查及CT表现，12周岁以上120例（216侧）不伴鼻息肉慢性鼻-鼻窦炎患者列入治疗对象。给予大环内酯类抗生素（克拉霉素缓释片）、黏液溶解剂（标准桃金娘胶囊）和一种中成药（鼻渊通窍颗粒）3种药物口服，糖皮质激素鼻内局部应用。最少用药4～6周复查，若患者主观感觉症状缓解或消失，复查cT，cT提示鼻窦炎症完全消失者，停用除克拉霉素缓释片外的其他药物，将克拉霉素减半继续服用达12周。若仅有主观症状改善继续合并用药，治疗过程中根据症状与cT表现确定是否调整用药方法，最长用药12周，所有患者在停药后4周，根据治疗前后症状及CT表现，分别采用视觉模拟量表（VAS）和Lund—Mackey鼻窦cT扫描病变范围评分系统对临床疗效进行主观与客观评估。结果120例CRS患者治疗前VAS得分为（7．88±1．58）分，治疗后为（2．74±1．56）分，治疗前后得分比较t=27．01，P〈0．01。Lund-Mackey鼻窦cT量化评分治疗前为（8．10±1．g1）分，治疗后为（2．98±1．56）分，治疗前后得分比较t=26．67，P〈0．01。治疗前后按侧进行Lund—Mackey鼻窦CT量化评分判为正常（轻微）、轻度、中度和重度的构成比变化比较，x2=197．77，P〈0．01。结论合适的药物治疗对慢性鼻-鼻窦炎疗效明显，12岁以上不伴鼻息肉慢性鼻-鼻窦炎应首选药物治疗。

原位杂交在成年和幼年型喉乳头状瘤HPV病因学的对比研究

探讨成年和幼年型喉乳头状瘤ＨＰＶ感染发病差异及其影响因素。方法：用地高辛配基（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记ＨＰＶ６和ＨＰＶ１１型作探针，原位核酸杂交方法在２９例成年型喉乳头状瘤（ＡＬＰ）和２１例幼年型喉乳头状瘤（ＪＬＰ）石蜡包埋标本检测ＨＰＶ同源序列。结果：ＡＬＰＨＰＶ６和ＨＰＶ１１阳性率分别为４１４％（１２／２９）和４８３％（１４／２９）；ＪＬＰＨＰＶ６及ＨＰＶ１１阳性率均为７６２％（１６／２１）。ｘ２统计示：两型喉乳头状瘤ＨＰＶ６及ＨＰＶ１１阳性率明显不同（ＨＰＶ６ｘ２＝５９９，ＨＰＶ１１ｘ２＝３９５，Ｐ均小于００５）。结论：１）ＡＬＰ和ＪＬＰＨＰＶ感染发病存在差异。２）ＡＬＰ除了ＨＰＶ感染外，其促发因素不可忽视，ＪＬＰ更倾向于依赖ＨＰＶ感染而发病。

软骨组织工程与耳鼻咽喉组织工程软骨

组织工程的核心是建立有种子细胞和生物材料构成的三维空间复合体,复合体为种子细胞提供获取营养、气体交换,废物排泄和生长代谢的场所,随着种子细胞生长分化和生物材料的降解吸收,最终形成新的、能永久替代、具有与原组织或器官相同形态和功能的有生命力的生物体,也即组织和器官的再生。软骨由于其独特的组织结构和缺损修复应用的迫切性,成为当前组织工程研究的热点之一,已取得重要进展。

喉形态聚羟基烷酸酯类多孔生物材料制备及其与软骨细胞复合培养观察

为探索新型聚羟基烷酸酯类组织工程多孔生物材料制备及其喉支架形态塑形技术,体外观察其与软骨细胞相容性,为进一步探寻适宜喉支架形态软骨组织工程生物材料提供实验依据,以聚羟基烷酸酯类生物材料聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物(PHBHH)为原料,氯化钠盐粒为致孔剂,采用溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥技术制备喉支架形态多孔PHBHH塑形物,以乙醇置换法测定其孔隙率,负载软骨细胞后体外共同培养。通过大体形态、扫描电镜观察材料模压成形效果、材料孔隙连续性及其与软骨细胞粘附、分布和生长情况。结果表明,模压成形的喉形态材料塑形物类似喉支架形态,滤沥除盐后整体结构呈多孔海绵状,具有良好的支撑性,孔隙率达92±2%,孔隙彼此间连续性好,软骨细胞与材料粘附、生长及孔隙内分布状况良好,基质分泌旺盛。结论:以溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥技术可制备出支撑度和孔隙率适宜的喉支架形态PHBHH组织工程多孔材料,材料与软骨细胞体外培养相容性良好。

以羟基丁酸酯与羟基已酸酯共聚物为支架材料构建组织工程喉形态软骨(英文)

背景:再生预定形态组织工程软骨的研究为喉软骨病损的修复与重建提供了新思路与新方法。然而,由于喉软骨形态、部位与功能的特殊性,迄今在此领域软骨组织工程研究并未呈现出其应有的优势。目的:探讨带蒂肌筋膜组织瓣构建组织工程喉支架形态软骨方法,为肌筋膜瓣复合组织工程化软骨修复重建喉软骨支架功能提供实验依据。方法:采用溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉支架形态聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞-聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物复合物,体外共同培养1周后用于体内植入。将新西兰白兔脊背部一侧骶棘肌及其筋膜制备肌筋膜组织瓣,采用筋膜衬里方法充填与包裹软骨细胞聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物喉支架形态复合物,原位植入。将单纯聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物喉支架体内植入的兔作为对照组。分别于术后6,12和18周取材,行大体形态观察、组织学和免疫组化检测评估喉支架形态组织工程化软骨成形与再生情况。结果与结论:制备的聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物多孔生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,形似喉支架形态,乙醇静态容积测定孔隙率>90%。筋膜衬里的带蒂肌筋膜组织瓣血运丰富,可有效充填与包裹喉支架形态塑形物。不同时间点均获取形态维持良好的喉支架形态组织工程软骨,组织学和免疫组化检测均证实体内植入6周即可形成软骨组织,12周及18软骨组织进一步成熟,而对照组体内植入未检测到软骨组织。结果证实,带蒂肌筋膜组织瓣可保障血运,采用筋膜衬里的肌筋膜组织瓣充填与包裹方法可构建喉支架形态组织工程软骨。