无根根霉脂肪酶的酶学性质研究及酯合成的应用

初步探讨了无根根霉脂肪酶 (RhizopusarrhizusFischerLipase)的酶学性质及酯合成应用。结果表明 :在不同表现形式下该酶具有不同的最适pH、pH稳定性、最适温度和热稳定性。当用胆盐处理发酵液 ,Tween - 80处理菌体细胞时发现该脂肪酶活力分别提高 3倍和 3 5倍。本文利用溶致液晶固定化的方法在有机介质中催化酯合成 ,固定化后该酶酯合成的反应速度比其游离态高 30倍以上。最适条件下 ,合成油酸 - 2 -辛基十二烷酯的能力达 5× 10 - 5mol·hr- 1·u- 1。

无根根霉脂肪酶的菌株筛选及产酶条件设置

目的 :筛选产酶菌株并探讨其最佳产酶条件。结果 :其中的一株无根根霉 (RhizopusarrhizusFischer - 2 9)显示了最高的脂肪酶酶活力。它的最适产酶条件为培养基初始pH 7 0 ,鱼油加入量1% ,32℃。摇瓶发酵 4 8h ,最高发酵液酶活 34 98u/ml,在此条件下水解鱼油 ,可使其中的DHA、EPA的含量由原来的 10 %提高到 4 0 % ,是任何传统方法所无法比拟的 。

抗白一号诱导白血病K562细胞凋亡作用的研究

目的 :研究抗白一号对白血病细胞株K5 6 2细胞的影响 ,并探讨其机制。方法 :采用MTT法检测细胞毒作用 ,利用Wright Gimesa染色法、Hoechst33342荧光染色等手段观察凋亡细胞的形态结构变化 ,应用透射电镜技术和流式细胞分光光度术进行凋亡定性定量观察 ,并探讨凋亡抑制基因bcl 2蛋白表达 ,应用原位末端标记检测DNA断裂。结果 :抗白一号对细胞具有明显的生长抑制作用。在其作用下细胞呈现典型的凋亡形态学变化。流式细胞仪分析表明抗白一号能使K5 6 2细胞发生凋亡 ,凋亡率呈现对浓度和时间的依赖性 ,并发现抗白一号使K 5 6 2细胞bcl 2基因的表达下调。结论 :抗白一号能诱导K5 6 2细胞发生凋亡 ,其作用机制与bcl 2基因表达的下调有关。

蝎毒对人白血病细胞株的抑制作用

目的 :采用 3种人白血病细胞株 (人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL - 6 0、人红白血病细胞株K5 6 2 )作为实验模型 ,观察东亚钳蝎毒对人白血病细胞的生长抑制作用。方法 :台盼蓝排染法细胞计数观察细胞生长、MTT法检测蝎毒对细胞的毒性、流式细胞术分析凋亡细胞。结果 :蝎毒对Raji、HL - 6 0、K5 6 2 3种人白血病细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,并且其作用强度在一定范围内呈现浓度和时间依赖性。结论

姜黄素对人类红白血病细胞(K_(562))的抑制及诱导分化作用

用人类红白血病细胞（Ｋ５６２）为材料，通过细胞计数、ＭＴＴ法测定，形态学观察、ＮＢＴ还原试验及联苯胺反应等方法检测了不同浓度姜黄素对体外人Ｋ５６２细胞的作用。结果表明，姜黄素对Ｋ５６２细胞有明显的抑制作用，随浓度增加，抑制作用逐渐增强。形态学观察可见轻微诱导分化作用。鉴于姜黄素对人类红白血病细胞兼有轻微诱导分化和增殖抑制作用，提示姜黄素有可能应用于人类红白血病的治疗。

蝎毒对白血病HL-60细胞生长的抑制和诱导凋亡作用研究

目的 :研究蝎毒对HL 60细胞的生长抑制和诱导凋亡作用 ,并探讨其作用机制。方法 :应用MTT法观察蝎毒对细胞的抑制作用 ,光镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变 ,原位末端标记检测DNA断裂 ,流式细胞术分析凋亡细胞和bcl 2蛋白表达。结果 :蝎毒可明显地抑制HL 60细胞生长和诱导细胞凋亡 ,作用在一定范围内呈对浓度和时间的依赖性 ,蝎毒并能下调HL 60细胞bcl 2蛋白表达。结论 :蝎毒能抑制HL 60细胞生长和诱导细胞凋亡 ,其作用机制可能与bcl 2蛋白表达的下降有关。

蝎毒对小鼠淋巴瘤细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :研究蝎毒对小鼠淋巴瘤细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用。方法 :应用MTT法观察蝎毒对细胞的抑制作用 ,光镜、透射电镜观察细胞结构的改变 ,原位末端标记检测DNA断裂 ,流式细胞术分析凋亡细胞。结果 :蝎毒 (12 5 - 2 0 0 μg/ml)可明显地抑制小鼠淋巴瘤细胞生长和诱导细胞凋亡 ,并且其作用强度在一定范围内呈现对浓度和时间的依赖性。结论 :蝎毒能抑制小鼠淋巴瘤细胞生长和诱导细胞凋亡。

姜黄素在体外对原代白血病细胞的作用

目的 :研究姜黄素在体外对原代白血病细胞的抑制作用。方法 :MTT法 ,台盼蓝拒染法。结果 :姜黄素对临床白血病患者原代白血病细胞初发组抑制率显著大于复发组 (P <0 .0 5 )。结论

姜黄素在体外对白血病细胞及其时相性影响的观察

目的 :研究姜黄素在体外对 K5 62 及原代白血病细胞的抑制增殖与诱导分化作用 ,观察其对白血病细胞的细胞周期时相的影响。方法 :细胞生长曲线制作、形态学观察、MTT法、联苯胺反应、流式细胞仪检测。结果 :姜黄素对 K5 62 细胞具有明显的抑制作用 ,其 IC5 0 为 5 .46mg/L ,呈剂量效应关系 ;姜黄素使细胞生长停滞于 S期 ,使细胞在 S期大量堆积 ,而不能进入下一个细胞增殖周期 ;光镜下可见细胞质内出现红色区域 ,联苯胺反应阳性率高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;姜黄素对初发组患者原代白血病细胞抑制率显著大于复发组 ( P<0 .0 5 )。结论 :姜黄素在体外对 K5 62 细胞具有抑制增殖与轻微诱导分化作用 ,并能改变其周期时相 。

端粒酶催化亚单位与肿瘤

人类端粒酶催化亚单位又称端粒酶逆转录酶 ,为端粒酶激活的限速酶 ,与端粒酶活性表达一致 ,对癌病变特异。一些化疗药物、中药、核酶及反义寡核苷酸均能不同程度地抑制hTERT -mRNA的表达 ,同时抑制了端粒酶活性 ,减慢了肿瘤细胞的生长速度。

大连地区耐甲氧西林葡萄球菌调查及药敏试验分析

大连地区耐甲氧西林葡萄球菌调查及药敏试验分析大连医科大学附属二院大连１１６０２３刘敏，王敏营口市中心医院国素华大连医科大学检验系孙宏丹葡萄球菌是最常见的化脓性球菌之一，是临床化脓性感染和医院内感染的主要病原菌，近年来，由于抗菌药物和激素的广泛应用，造...

HDL-C直接测定法与间接测定法方法学评价

目的 :探讨HDL -C直接测定法与间接测定法在临床中的应用价值和方法学评价。方法 :①取HDL -C标准液 ,分别用直接法和间接法测定精密度 10次。②用直接法和间接法分别测定随机选取的临床标本各 30份 ,经方差检验及数学期望检验 ,判别两种方法有无显著差别。结果 :直接法测定的HDL -C精密度 (CV值为 0 91% )高于间接法测定的结果 (CV值为 1 12 % )。而临床检验的标本中 ,HDL -C直接法与间接法所测定数值无显著性差异。结论 :HDL -C直接法使用生化机器测量 ,精密度高 ,简单便捷 ,间接法应用于临床检验与直接法无显著差别 ,精密度也能满足要求。

铁岭市“三公开”体会心得

“‘三公开’是一项由教育行政管理部门研究制定、研训部门督导执行、基层学校具体操作、教师全员参与、教学活动面向全系统全社会开放的全新的教学活动。”铁岭市教师进修学院院长李东元介绍,“‘三公开’是以实践中的教师为主体,以课堂为背景,以研究为基础,以互动为机制的教师间互相观课、研讨的一种形式,是一种融教师日常教学、教学研究和专业成长为一体的工作方式。”“三公开”的阵地是课堂,手段是校本研修,形式是课堂教学的对外开放。通过“三公开”,铁岭市搭建了一个交流的平台,使广大教师立足岗位,全员参与,互评互议,提升素质,提高质量。

复方中药诱导Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡作用的研究

目的 :研究复方中药对 Burkitt′s淋巴瘤细胞株 Raji细胞的影响 ,并探讨其机制。方法 :采用 MTT法检测细胞毒作用 ,利用 Wright- Gimesa染色法 ,Hoechst 33342荧光染色等手段观察凋亡细胞的形态结构变化 ,应用透射电镜技术和流式细胞分光光度术进行凋亡定性定量观察 ,并探讨凋亡抑制基因 bcl- 2蛋白表达。结果 :复方中药对 Raji细胞具有明显的生长抑制作用。共同孵育一段时间后 ,细胞呈现典型的凋亡形态学变化。流式细胞仪分析表明复方中药能使 Raji细胞发生凋亡 ,凋亡率呈现对浓度和时间的依赖性 ,并发现复方中药使 Raji细胞 bcl- 2基因的表达下调。结论 :复方中药能诱导 Raji细胞发生凋亡 ,其作用机制与 bcl- 2基因表达的下调有关。

蝎毒对白血病Raji细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :采用人类 B淋巴细胞株 Raji细胞作为实验模型 ,用东亚钳蝎毒 (BMK)作为干预手段 ,观察其对Raji细胞的生长抑制和凋亡诱导作用 ,并探讨其作用机制。方法 :MTT法 ,Wright- Gimesa染色法 ,Hoechst3334 2和 PI荧光染色 ,透射电镜技术和流式细胞分光光度术。结果 :BMK(12 .5 m g/ L～ 2 0 0 .0 mg/ L)可明显地抑制 Raji细胞生长和诱导细胞凋亡 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,并且其作用强度在一定范围内呈现对浓度和时间的依赖性。流式细胞仪分析显示BMK能下调 Raji细胞 bcl- 2蛋白表达。结论 :BMK能抑制 Raji细胞生长和诱导细胞凋亡 ,其作用机制可能与 bcl- 2蛋白表达的下降有关。

端粒酶反义hTERT的构建及其对K562细胞的作用

目的 观察反义人类端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)是否能够抑制端粒酶活性及K5 6 2细胞的增殖。方法 选择hTERT基因上游部分的起始密码子上下 2 90bp长度的核苷酸片段 ,设计引物并进行PCR扩增后 ,反向连接于pLNCX neo质粒上得到反义hTERT基因表达质粒。在体外转染中通过脂质体法将质粒导入K5 6 2细胞。以MTT法和体外集落形成实验检测反义hTERT表达质粒对K5 6 2细胞增殖的抑制作用 ;以TRAP PCRELISA法来研究反义hTERT基因对K5 6 2细胞的端粒酶活性的抑制作用。结果 ①转染反义hTERT表达质粒组与对照组 (空白对照及空质粒组 )相比较 ,生长速度明显变慢 ,集落形成能力明显下降 ,空白对照组K5 6 2细胞集落数为 ( 10 0 .33± 7.5 7) / 10 3 细胞 ,空质粒组K5 6 2neo细胞集落数为 ( 92 .6 7± 5 .86 ) / 10 3 细胞 ,转染反义质粒组HL 6 0as集落数为 ( 5 0 .33± 6 .11) / 10 3 细胞 (P <0 .0 1) ;②反义hTERT对K5 6 2细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用 ,K5 6 2neo细胞活性为 1.2 79± 0 .0 73 ,K5 6 2as为 0 .82 6± 0 .0 36 ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 该研究构建的端粒酶反义hTERT基因表达质粒转染到K5 6 2细胞中后 ,能够封闭K5 6 2细胞hTERTmRNA的表?

反义hTERT对K562细胞端粒酶活性及细胞增生的影响

目的 :观察反义 h TERT表达质粒转染 K5 6 2细胞后是否能够抑制端粒酶活性及K5 6 2细胞的增生。方法 :质粒的构建与转染 :将 2 90 bp h TERT c DNA片段 ,反向连接于 p L NCX- neo质粒上得到反义 h TERT基因表达质粒。在体外转染中通过脂质体法将质粒导入 K5 6 2细胞中 ,以G4 18进行筛选得到阳性克隆 ;以 MTT法和形态学法检测反义 h TERT表达质粒对 K5 6 2细胞增生的抑制作用 ;以 TRAP- PCR EL ISA法来研究反义 h TERT基因对 K5 6 2细胞的端粒酶活性的抑制作用。结果 :转染反义 h TERT表达质粒组与对照组 (空白对照及空质粒组 )相比较 ,生长速率明显变慢 ,部分细胞出现凋亡等形态学改变。反义 h TERT对 K5 6 2细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用。结论 :研究构建的端粒酶反义 h TERT基因表达质粒转染到 K5 6 2细胞中后 ,能够封闭 K5 6 2细胞h TERT- m RNA的表达 ,在抑制端粒酶活性的同时 ,减慢了 K5 6 2细胞的生长速度。