水曲柳EST-SSRs位点信息分析

为使EST-SSRs分子标记技术在水曲柳辅助育种、基因定位、雌雄鉴定等研究中应用，本文对NCBI数据库中的12100条水曲柳ESTs进行了分析，序列拼接得到全长为3.02X10。bp的非冗余的5423个ESTs聚类，利用在线软件SSRIT进行SSRs位点搜索，共检索出9489个SSRs位点。EST.SSRs的长度从6—46bp之间变化。二核苷酸重复在水曲柳中占主导地位（6914个），占总SSRs的72.86％，其次是三核苷酸（24.96％）和四核苷酸（1.37％）。各种不同重复模式中出现最多的是（AG／CT）n（3458次），占二核苷酸重复的50.01％，其次分别是（AC／GT）n（24.47％）和（AT／AT）n（24.23％）。利用Primer5.0软件共设计了147对EST.SSRs引物。水曲柳ESTs中SSRs出现频率较高，类型丰富，这一研究结果提供了水曲柳EST.SSRs信息，使该分子标记技术在水曲柳研究中的进一步应用成为可能。

EST-SSR标记在水曲柳雌雄鉴定中的应用

选用黑龙江省青山林木种子园成年水曲柳200棵树为实验材料,在来自NCBI中的5 423条白蜡属EST序列和该实验室测得的水曲柳转录组的179 502条序列中查找SSR位点并设计引物,通过PCR扩增筛选有效扩增和有差异片段的引物,用于水曲柳雌雄的鉴别。结果显示:(1)白蜡属EST和水曲柳转录组中的5 423条和179 502条序列中,分别查找到9 488个和3 557个SSR位点,SSR出现的频率分别是174.96%和1.98%,SSR的类型都是以二核苷酸为主。(2)232对引物中有208对引物获得有效扩增,74对引物在雌雄DNA中有差异,27对扩增片段符合预定大小片段。(3)经过3轮筛选,选出19号和56号引物用于200棵水曲柳中,雌雄差异率分别是64.5%和89.5%。研究表明,利用EST-SSR分子标记对水曲柳性别进行鉴定是一种有效可行的方法。

芩红奶牛乳房灌注液提取工艺研究

为了确定芩红奶牛乳房灌注液的最佳提取工艺,通过设计正交试验,筛选较适宜的溶媒、加水量、提取温度、提取时间、提取次数等。确定了芩红奶牛乳房灌注液的最佳提取工艺,为芩红奶牛乳房灌注液的生产和临床应用奠定基础。

中药芩红乳房灌注液制备工艺的研究

奶牛乳房炎是危害奶牛养殖业最大的疾病之一，给养殖经济造成巨大经济损失。治疗奶牛乳房炎常用的是抗生素，但抗生素的使用造成药物残留，而且使多种菌种逐渐产生耐药性。与抗生素相比，中草药的毒副作用则要小得多，而且许多中草药还具有较好的免疫调节作用，因此被学者广泛关注。

治疗奶牛乳房炎的中药组方工艺研究

[目的]研究中药治疗奶牛乳房炎的最佳制备工艺。[方法]通过设计,筛选较适宜的粉碎时间和混合比例;采用薄层色谱法(TLC)建立新中药组方有效成分的检测方法。[结果]确认了该组方最佳制备工艺为粉碎时间45 min,混合比例为1.0∶1.0∶0.4;确定有效成分中蒲公英、漏芦、当归、川芎薄层鉴别结果,供试品色谱中,均在与对照品色谱相应的位置上出现相同颜色的荧光斑点。[结论]优选粉碎时间和混合比例是组方制备的安全有效方法。建立的检测项可以用于有效成分的质量控制。

山苦荬标准提取物的制备与质量控制方法

[目的]制定山苦荬标准提取物的制备工艺并建立其质量控制方法。[方法]采用正交试验设计建立山苦荬标准提取物的制备工艺;采用紫外分光光度法、TCL、微生物法建立山苦荬提取物的质量控制指标。[结果]制备工艺为原料药材的处方量用20倍量水连续提取3次,100℃,每次1 h,减压浓缩温度与干燥温度均为65℃;山苦荬提取物在30-70μg/m L的浓度与吸光度线性良好,回收率为98.4%,RSD为0.64%。标准提取物溶液在198与294 nm紫外波长最大吸光度比值为4.1,干燥失重为0.4%,灰分为0.8%,酸碱度为5.2,细菌菌落总数为12个/g,霉菌总数无,大肠杆菌无,沙门氏菌无。[结论]优选溶剂水及相应的温度提取和控制是山苦荬标准提取物制备的安全有效方法。建立的检测项可以用于山苦荬标准提取物的指标控制。