产埃博霉素B纤维堆囊菌发酵条件的优化

埃博霉素是纤维堆囊菌产生的一种和紫杉醇具有相同抗癌作用的大环内酯类次级代谢产物。以So ce2161为出发菌株,通过一系列单因素实验确定了对产量影响最大的四个因素,即温度、初始pH、转速、接种量。对四个因素设计正交实验进行发酵条件优化,最终得到最佳实验条件为使用250 m L挡板三角瓶,在温度32℃、初始pH=7.2、转速180 r/min、接种量6%、装液量60 m L/250 m L、发酵时间6 d、种龄60 h条件下,埃博霉素B的产量为46.83 mg/L。

以UiO-66-NH_(2)为载体苯丙氨酸解氨酶的固定化及其催化性能

天然的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)存在稳定性差、可操作性低等问题,限制了其在医药、食品和生物化工领域的应用.为了提高PAL的催化性能,本研究将PAL吸附固定在金属有机骨架UiO-66-NH_(2)载体上,制备出PAL@UiO-66-NH_(2)固定化酶颗粒.通过优化固定化酶颗粒的制备条件,PAL@UiO-66-NH_(2)最大酶活回收率达到(90.01±3.18)%,比优化前提高了约35%;并对其pH耐受性、温度耐受性和重复使用性等催化性能进行研究.结果表明:PAL@UiO-66-NH_(2)对pH和温度的耐受性优于游离PAL;在重复使用5次后,PAL@UiO-66-NH_(2)仍能保持初始酶活力的80%左右,表现出较好的重复使用性.本研究结果可为PAL的工业化应用提供参考.

半胱氨酸辅助的酶@ZIF-8固定化酶制备及其特性研究

以共沉淀包埋的策略将酶固定在ZIF-8金属有机骨架中能显著提高酶的催化稳定性,但是,所制备的酶@ZIF-8固定化酶的固定化效率和酶活回收率却很低。为了解决这一问题,本研究以半胱氨酸(cysteine,Cys)为辅助剂,采用共沉淀包埋的策略将苯丙氨酸解氨酶(PAL)固定在ZIF-8载体中,制备出PAL@ZIF-8固定化酶。利用单因素实验及响应面实验优化了PAL@ZIF-8制备条件,并对其pH耐受性、温度耐受性和重复使用性等催化性能进行研究。响应面优化结果表明,2-甲基咪唑浓度、醋酸锌浓度和Cys浓度对酶活回收率有显著影响,醋酸锌浓度和Cys浓度对酶活回收率存在交互影响,在200 mmol/L 2-甲基咪唑、60 mmol/L醋酸锌和4 mg Cys,2 mg聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)的优化条件下,PAL@ZIF-8最大酶活回收率为(56.15±0.94)%。与不添加Cys制备的PAL@ZIF-8相比,酶活回收率提高了近40%,而且PAL@ZIF-8比游离PAL表现出更好的温度耐受性和pH耐受性。重复使用7次后,PAL@ZIF-8仍能保持初始酶活的60%左右,表现出较好的重复使用稳定性。以上结果表明,这种以Cys为辅助剂将酶共沉淀包埋在ZIF-8中的方法是一种高效的酶固定化策略。

纤维堆囊菌So ce2161限制修饰系统研究

采用双向电泳技术从So ce2161中未获得内源性质粒,通过对So ce2161培养液、细胞壁及菌体内部DNA核酸酶进行提取纯化,并与外源基因孵育,发现了有较强活性的DNA核酸酶,对DH5α基因组DNA、质粒pET-32a均有降解作用。

粘细菌的分离纯化与鉴定

粘细菌的次级代谢产物药用潜力巨大,粘细菌的分离纯化及鉴定对粘细菌的研究而言意义重大。常用的分离方法有食草动物粪便诱导法、滤纸诱导法和细菌划线法;纯化方法有直接纯化法和间接纯化法;鉴定方法除传统的镜检法外目前比较通用的是16S r DNA测序比对法。