醒脾胶囊调控血管活性肠肽干预功能性腹泻脾虚证大鼠机制研究

目的探讨醒脾胶囊通过血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)修复肠道屏障且调节RhoA/ROCK2信号通路抑制肠道运动亢进,缓解功能性腹泻(functional diarrhea,FDr)脾虚证的作用机制。方法将50只SPF级大鼠按照随机数字表均分成正常组,模型组,洛哌丁胺组和醒脾胶囊高、低剂量组。采用高浓度番泻叶水煎剂连续灌胃14 d制备脾虚型FDr膜型。依据临床脾虚泄泻诊断标准,动态采集并量化排便情况、体质量、饮食量、疲劳程度、皮毛情况等大鼠宏观体征;28 d测定小肠推进率并取结肠组织和腹主动脉血;采用酶联免疫吸附试验测定血清和结肠组织中VIP含量,通过检测苏木精-伊红(HE)染色法和蛋白质印迹法评价结肠屏障完整性、肠道运动及相关通路蛋白的表达情况。结果与正常组相比,14 d后,模型组大鼠便多稀溏,体质量增长减缓,喜眯眼蜷卧,毛枯少泽,食少乏力,量化后各项指标评分及总分显著升高(P<0.01),小肠推进率明显上升(P<0.01),血清和结肠组织中VIP含量升高(P<0.01)。HE染色提示模型组结肠黏膜层不完整,可见明显充血、水肿,结肠紧密连接蛋白Occludin和Claudin-5表达下调(P<0.01),结肠收缩蛋白RhoA和ROCK2表达均上调(P<0.01,P<0.05)。与模型组相比,各治疗组大鼠腹泻及其伴随症状和结肠组织切片的病理表现有不同程度缓解;其中,高剂量的醒脾胶囊可有效缓解腹泻并促进结肠黏膜结构恢复整齐致密同时有效减轻充血水肿,显著上调Occludin和Claudin-5表达(P<0.01),降低血清和结肠组织中VIP含量(P<0.01),显著减缓小肠推进率(P<0.01),明显下调结肠组织收缩蛋白RhoA和ROCK2表达(P<0.01)。结论醒脾胶囊可有效缓解大鼠脾虚症状并改善腹泻,调控VIP从上调肠屏障紧密连接与抑制肠道过亢运动两个方面达到缓解脾虚型FDr的功效。

基于网络药理学探讨新型冠状病毒肺炎时方不同治则中药特色机制研究

目的分析比较新型冠状病毒肺炎(COVID-19)时方中不同治则代表中药的作用机制,以期阐释中药防治新型冠状病毒肺炎不同病程阶段的药理作用机制及主要防治途径。方法依据国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第六版)》中临床治疗期的处方中药,总结疾病证候演变中四类基本治则,并且选定各治则高频次及具有治则代表性的中药构成方药集合,按照治则在SymMap数据库搜索并收集各中药靶标进行分析归纳;用DAVID和STRING软件对各治则靶标分别进行GO生物学过程分析及KEGG信号通路富集分析,总结各治则的主要针对作用通路以及靶点。结果四类治则主要涉及细胞信号转导通路、病毒感染以及多种细胞因子及免疫调控机制。值得注意的是,不同治则方药配伍干预通路侧重点不同,具体表现为散寒胜湿、宣肺解表治则主要作用于恢复机体稳态,调控免疫以防止证候进一步演变;清热化湿、宣肺解毒治则主要作用于抑制病毒体内复制,增强免疫功能等抗病毒途径;清气凉营、解毒清热治则多富集于抑制炎症与细胞分化、抗细胞凋亡途径;复脉固脱、开窍醒神治则多集中于增强机体免疫正向调控为主。结论时方的四类治则从不同角度证明了中医药对COVID-19整个病程与证候演变过程中的因时制宜以及辨证特色,从分子的视角阐释中医药不仅适用于疫病的预防,更有效于疫病的发生、发展以及微证转重过程,为中医药防治新型冠状病毒肺炎主要作用机制与靶点的阐明提供科学依据。

基于转录组学的芪参颗粒调控脾脏ALOX15/STAT3通路抑制单核细胞释放防治心力衰竭的机制研究

目的基于转录组学分析心力衰竭(心衰)时脾脏单核细胞动员相关蛋白与通路的表达情况,以及芪参颗粒对其的调控机制。方法采用左冠状动脉前降支结扎术制备大鼠心肌梗死后心衰模型。将大鼠随机分为模型组、芪参颗粒组(235.2 mg/kg)、脾切组、假手术组,连续给药21 d。通过超声心动图分析评价各组大鼠心功能。采用转录组学测序(RNA-Seq)技术及GO、KEGG通路富集分析,研究脾脏中各基因的表达;采用免疫组织化学法和Western blot对脾脏单核细胞分布以及关键蛋白花生四烯酸-15-脂加氧酶(ALOX15)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)和单核细胞趋化因子受体2(CCR2)进行检测。结果与假手术组相比,模型组大鼠左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)均降低(P<0.01),左室舒张末内径(LVID;d)、左室收缩末内经(LVID;s)增高(P<0.01);与模型组相比,脾切组LVEF值升高(P<0.01),芪参颗粒组LVEF升高(P<0.05)。转录组学分析结果得到芪参颗粒参与调控的34个差异基因,GO及KEGG通路富集分析显示以上基因主要富集于脾脏免疫调控、白细胞迁移、抗原合成与呈递等生物学过程。模型组大鼠脾脏组织CD163、CD68表达较假手术组减少(P<0.01);芪参颗粒组CD163、CD68表达较模型组上升(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠脾脏组织中STAT3、CCR2蛋白表达上升,ALOX15蛋白表达下降;芪参颗粒组STAT3、CCR2蛋白表达下降,ALOX15蛋白表达上升(P<0.05或P<0.01)。结论芪参颗粒通过调控ALOX15/STAT3通路介导的脾脏单核细胞动员与释放进而提高心功能,防治心衰。

保元汤调控AT1/P38 MAPK/TGF-β途径改善心肌纤维化防治心力衰竭的机制研究

目的:探讨保元汤对心肌梗死(MI)后心力衰竭(HF)大鼠心肌纤维化(MF)的影响及其机制。方法:体内实验通过利用左冠状动脉前降支结扎术制备MI后HF动物模型,利用超声、血生化、病理切片染色和WesternBlot等技术进行相应指标的检测。在机制研究中,体外实验采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激构建H9C2大鼠心肌细胞损伤模型,给予400、600、800μg/mL保元汤提取物冻干粉以及AngⅡ1型受体(AT1)抑制剂RNH6270进行干预,利用Western Blot技术检测相关蛋白的表达情况。结果:与模型组比较,保元汤可以显著提高HF大鼠的左室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)(P<0.05),同时抑制左心室内径(LVID)的扩张;此外,可以有效降低循环中ANP、BNP以及AngⅡ的含量(P<0.01);病理结果显示,保元汤可以能够有效抑制MF程度以及心肌组织中AngⅡ的生成(P<0.05);Western Blot结果显示保元汤可以下调缺血心肌组织中血管紧张素转化酶(ACE)1以及AT1的表达;同时下调AT1受体下游的磷酸化-P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)、转化生长因子β(TGF-β)、Smad3的表达以及上调ACE2的表达;细胞实验结果显示保元汤可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞中AT1以及其下游P38 MAPK的激活,同时下调TGF-β以及Smad3蛋白的表达。结论:保元汤能有效抑制MI后大鼠缺血区域的纤维化程度,减缓HF进程,其机制与保元汤调控AT1/P38 MAPK/TGF-β途径相关。