胰腺癌患者外周静脉血树突状细胞体外特征研究

胰腺癌是一种国内外发病率均呈明显上升趋势的恶性程度极高的消化系统灾难性疾病,患者免疫力极其低下、手术切除率低。研究结果显示胰腺癌的发生与树突状细胞(DC)数量的减少和功能障碍关系密切。我们于2015年1月至2018年12月,比较分析胰腺癌患者与健康人或正常人(简称健康人)DCs的体外特征。现报道如下。

健康人外周静脉血树突状细胞瘤苗诱导系统免疫效应细胞对BxPC-3的抑制与凋亡

目的 体外观察诱导扩增的健康人或正常人(统称为健康人)外周静脉血树突状细胞(DCs)杂交瘤苗诱导系统免疫效应细胞(SIECs)对原位胰腺癌细胞株(BxPC-3)的抑制与凋亡作用。方法 以淋巴细胞分离液梯度离心获得健康人外周静脉血单核细胞(PBMCs),贴壁法获取DCs和去DCs的单核细胞(即SIECs),并分别用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、BxPC-3肿瘤特异性抗原(BxPC-3TSA)培养DCs和SIECs。5 d后收集DCs并计数,用PEG+10%二甲基亚砜(DMSO)做为融合剂,按10∶1、5∶1、1∶5将BxPC-3TSA致敏的DCs(简称敏DCs)、DCs分别与BxPC-3进行融合,获得敏DCs-BxPC-3、DCs-BxPC-3融合瘤苗。第7天,SIECs分别和敏DCs-BxPC-3、DCs-BxPC-3、敏DCs、DCs以40∶1混合培养1 d,分别收集混合培养细胞,并以混合细胞中的SIECs∶BxPC-3=10∶1的效靶比对BxPC-3进行膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)法凋亡实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)法毒性实验。结果 敏DCs、DCs与BxPC-3融合,以1∶1的比例融合时融合效果最好,融合率为40.0%。CCK-8法实验显示:敏DCs-BxPC-3、DCs-BxPC-3、敏DCs诱导SIECs对BxPC-3抑制率分别为53.1%、45.3%、78.8%,吸光度(A)值Dunnett T3检验显示组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。凋亡实验显示:敏DCs瘤苗、DCs瘤苗、敏DCs、DCs诱导SIECs对BxPC-3的凋亡率分别为24.17%, 11.43%, 85.87%, 29.94%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 肿瘤抗原序贯法致敏DCs使其获取抗原时出现叠加效应,从而发挥更好的抗肿瘤结果;早期DCs融合瘤苗在一定程度上可诱导SIECs抑制肿瘤细胞效果。

树突状细胞负载丁酸梭菌诱导免疫效应细胞对裸鼠皮下BxPC-3移植瘤的抑制作用

目的探讨丁酸梭菌(CB)致敏树突状细胞(DCs)诱导免疫效应细胞(IECs)对BALB/c裸鼠皮下BxPC-3移植瘤的抑制效果。方法BALB/c裸鼠安全性评价实验:28只裸鼠随机分为7组,实验第1天,取对数生长的BxPC-3注射于裸鼠左下臂,14 d后测量各组裸鼠皮下移植瘤大小,空白对照G组注射无菌生理盐水,A~F组分别皮下注射不同浓度CB致敏的DCs和IECs。49 d后测量移植瘤的大小。BALB/c裸鼠体内效能实验:28只BALB/c裸鼠随机为7组,实验第1天,取对数生长的BxPC-3注射裸鼠左下臂。14 d后,G组裸鼠左下臂移植瘤注射无菌生理盐水,A~F组分别皮下注射不同浓度CB致敏的DCs和IECs。49 d后处死裸鼠并分离皮下移植瘤,通过苏木精-伊红(HE)染色法观察裸鼠皮下移植瘤病理切片,电子秤称其重量并计算抑瘤率。采用单因素方差分析。结果(1)BALB/c裸鼠生物安全性评价实验结果。A组(0.99±0.27)cm^(2)最大,F组(0.45±0.20)cm^(2)最小,其他组为B组>C组>D组>E组,其中D、E、F组与G组比较差异有统计学意义(F=5.134,P<0.05)。(2)BALB/c裸鼠生物效能实验结果。A组(1.24±0.26)g,F组(0.77±0.22)g,其他组为B组>C组>D组>E组,其中D、E、F组与G组比较差异有统计学意义(F=7.364,P<0.05)。同时,F组抑瘤率高达46.52%,A组抑瘤率最低13.8%,其他组皮下移植瘤抑制率为B组<C组<D组<E组。结论CB致敏的DCs具有良好的生物安全性和诱导IECs抗BxPC-3移植瘤作用。

海南热带地区352例胰腺癌患者临床特征与转移风险分析

目的分析海南热带地区胰腺癌患者临床特征,为及时发现、合理诊治胰腺癌提供依据。方法基于电子病历(electronic medical record,EMR)系统收集胰腺癌患者临床资料,应用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果 352例患者男女性别比1∶0.66,年龄(65±13)岁;黄疸占40.3%、腹痛36.1%;无转移占33.5%、有转移66.5%。百分位数法显示淋巴细胞及其比率、葡萄糖(glucose,Glu)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartic acid aminotransferase,AST)、直接胆红素(direct bilirubin,DB)、间接胆红素(indirect bilirubin,IB)、癌胚抗原(carcinogenic antigen,CEA)、肿瘤标志物糖链抗原(tumor marker sugar chain antigen 19-9,CA19-9)与正常参考值范围比较有差异。Mann-Whitney U检验显示白细胞、中性粒细胞及其比率、中性粒细胞与淋巴细胞比值(ratio of neutrophils to lymphocytes,NLR)、ALT、AST、DB、IB、CEA组间有差异(均有P<0.05)。二分类Logistic回归分析模型显示NLR≥3.7是NLR<3.7时发生转移风险的4.958(1.896~12.964)倍,IB与转移风险呈负关联。结论 65岁左右具有黄疸、腹痛症状者,淋巴细胞及其比率、Glu、ALT、AST、DB、IB、CEA、CA19-9检查有助于胰腺癌的及时发现;NLR及IB对胰腺癌的合理治疗具有指导意义。